弓形虫速殖子表膜蛋白的研究进展

弓形虫的生活史可分为有性生殖和无性生殖2个阶段,无性生殖阶段又有缓殖子和速殖子2个阶段,其中速殖子阶段的危害最为严重。作者就速殖子表膜蛋白的相关性、在速殖子和缓殖子转换中的作用、表膜蛋白基团GP1的锚定作用以及表膜蛋白生物工程疫苗方面的研究综述如下。1弓形虫速殖子的表膜蛋白弓形虫速殖子的表膜蛋白大约有1000多种,其中主要的有5种,包括SAG1(P30)、SAG2(P22)、P23、P35和P43。SAG1是速殖子中含量最丰富的蛋白,仅在弓形虫的速殖子期表达。SAG1基因为单拷贝基因,无内含子,弓形虫没有在SAG1基因的转录启动子TATA,在SA…     

弓形虫半巢式PCR检测方法的建立

根据GenBank上公布的弓形虫RH株的P30基因(X14080)设计了3条特异性引物P1、P2和P3,建立了半巢式PCR检测体系,并将P1和P3的扩增产物克隆到pUCm-T载体上进行测序.结果表明,该体系能够扩增出约250 bp的片段,P1和P3能扩增出约500 bp的片段,克隆到pUCm-T载体上的504 bp片段与P30基因(X14080)的序列同源性为99.8%.该PCR检测体系特异性强,在健康猪血液、猪链球菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和猪圆环病毒DNA上未扩增出条带;敏感性高,最低检测为18 fg.该检测体系的成功构建为猪弓形虫的检测和流行病学调查提供了有力的技术支持.     

金华地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

奶牛乳房炎是奶牛三大疾病之一。据有关资料报道，国外奶牛乳房炎发病率约为25％～60％。据我国有关部门不完全统计，乳房炎是我国奶牛最严重的疾病之一，发病率达20％～70％，个别牛群发病率甚至更高。奶牛乳房炎不仅影响产奶量(可降低产奶量10％～15％)，而且影响乳的品质，甚至危及人的健康。     

捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株H11蛋白基因的克隆及序列分析

参照已发表的捻转血矛线虫H11蛋白基因序列设计引物，以H．contortuss ZJ株的总RNA为模板，进行RT—PCR扩增，成功扩增出H11基因。将PCR产物与pUCm—T载体连接后，转化DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆并测序。序列分析表明，其核苷酸序列与国外报道的H11基因的同源性为99．5％。编码氨基酸序列具有氨基肽酶的保守序列，推测可使虫体不能获得所必需的氨基酸而导致死亡。     

药物对球虫感染鸡血液及生化指标的影响

1日龄艾维因肉鸡分为 4个组 ,即中药组、马杜霉素组、感染不给药组和不感染不给药组 ,每组 2 0只。中药组从 1日龄开始即投喂含 0 .1%中草药复方制剂 (由绞股蓝皂甙、去油鸦胆子仁等组成 )的饲料 ;马杜霉素组从 12日龄起投喂含马杜霉素 5 mg/ kg的饲料。前 3组于 14日龄感染鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊。卵囊攻击前及攻击后 4、7d分别采血 ,测定血液红细胞数、血钾、血钠、血磷、血清白蛋白和血清总蛋白含量。结果表明 ,卵囊攻击后 4、7d,感染不给药组的红细胞数显著低于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,卵囊攻击后 7d,血钾浓度显著高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,血清白蛋白和血清总蛋白显著低于其他各组 (P<0 .0 5 ) ;卵囊攻击后 7d,中药组血液红细胞数显著低于不感染不给药组 (P<0 .0 5 ) ,但显著高于感染不给药组 (P<0 .0 5 ) ;马杜霉素组的各项测定指标与不感染不给药组相比无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;卵囊攻击后 ,各组间的血磷和血糖值无显著差异 (P>0 .0 5 )。结果提示 ,药物能抵抗球虫感染 ,血液各项指标得以保持相对恒定。     

首次在红嘴相思鸟体内发现多变环肠吸虫

环肠科(Cyclocoelidae)吸虫是禽类呼吸器官的寄生虫。据唐崇惕等研究，可分7个亚种：多变环肠吸虫(Cyclocoelum mutabile)；小口环肠吸虫(Cyclocoelum microstomum)；三角血食吸虫(Haematotrephus triangularum)；束形连腺吸虫(Uvitellina adelpha)；卡氏连腺吸虫(Uvitellina     

捻转血矛线虫Hc-FAR-4蛋白的表达特性及其与配体结合能力分析

【目的】捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生在牛羊等反刍动物的皱胃中,引起的捻转血矛线虫病在我国呈全国性流行。文章通过研究脂肪酸与视黄醇结合相关蛋白Hc-FAR-4的表达特性及配体结合能力,以了解其在捻转血矛线虫生长、发育、繁殖过程中的作用。【方法】对Hc-far-4进行克隆、并且构建原核表达载体pET-30a-Hc-far-4,pET-30a-Hc-far-4重组质粒经过PCR与双酶切鉴定准确无误之后转化到E. coli BL21感受态细胞中,用0.1 mmol·L ^-1IPTG(isopropyl-β-d-thiogalactoside)进行重组蛋白的诱导表达。收集重组蛋白rHc-FAR-4,利用荧光分析法,研究rHc-FAR-4蛋白与DAUDA、视黄醇、油酸的结合能力。配体结合试验是依据荧光物质retinol与脂肪酸类似物DAUDA在极性和非极性溶液中,在某一波长的激发光激发下,所发出的荧光光谱随之变化的特性,判断rHc-FAR-4蛋白是否具有与DAUDA、retinol结合的能力。再在体系中加入非荧光长链脂肪酸油酸,根据荧光光谱的变化情况判定油酸能否分别与DAUDA、retinol竞争目的蛋白的脂肪酸结合位点,间接说明目的蛋白能否与非荧光脂肪酸油酸结合。同时制备鼠源多克隆抗体,利用ELISA技术检验免疫后小鼠的抗体效价,抗体效价合适即可收集小鼠血清。收集的血清用于免疫组织荧光（IHF）试验,探究Hc-FAR-4的表达部位,从而推测其功能。该试验过程为：对捻转血矛线虫进行石蜡包埋,石蜡切片,抗原修复,3%的BSA 于4℃封闭过夜,自制鼠源多克隆抗体作为一抗孵育1 h; Alexa Fluor? 488 nm羊抗鼠IgG作为二抗避光孵育1 h,DAPI染色30 min,激光共聚焦显微镜检查染色情况。利用荧光定量PCR技术分析Hc-far-4在捻转血矛线虫各个主要阶段的表达特性。【结果】成功克隆目的基因Hc-far-4,测序结果与Sanger数据库中捻转血矛线虫far-4基因序列（>HCISE00908800.t1）相似度为 99.9%;重组质粒 pET-30a-Hc-far-4在E. coli BL21中成功表达,在诱导8 h后达到峰值。经过ELISA检测,结果显示制备的鼠源多克隆抗体效价达到1﹕1 024 000—1﹕2 048 000,可用于后续试验。Western Blot鉴定结果显示rHc-FAR-4重组蛋白带有His标签,并且条带大小为25 kD,结果符合预期。制备的鼠源多克隆抗体经过Western Blot鉴定,能够与天然Hc-FAR-4 蛋白结合,说明该抗体可用于IHF试验。配体结合试验结果表明 rHc-FAR-4蛋白具有结合脂肪酸与视黄醇的能力。荧光定量PCR分析表明,Hc-far-4在四期幼虫中的转录水平最高;IHF试验表明,Hc-FAR-4主要表达在捻转血矛线虫的肠壁、性腺中。综上推测Hc-FAR-4蛋白主要在寄生生活阶段参与了转运脂肪酸与视黄醇,为捻转血矛线虫的生长发育与生殖提供营养物质。【结论】捻转血矛线虫 FAR-4 蛋白能够结合脂肪酸类似物DAUDA和视黄醇,但是与油酸的结合能力较弱,主要表达在肠壁,在性腺、角皮中也有少量表达,其基因在进行营寄生生活阶段时表达量达到峰值。     

牛血液多形核白细胞吞噬功能检测方法的研究

以啤酒糖酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）为吞噬材料,用吖啶橙染色指示牛血液多形核白细胞的吞噬活性。该方法直观、简便、可靠,一项试验可同时获得吞噬百分率、杀伤百分率、吞噬指数和杀伤指数４项指标,从不同角度反映了机体免疫功能状态。此外,用透射电镜和扫描电镜观察了牛血液多形核白细胞吞噬经牛血清调理的啤酒糖酵母的情况。     

减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达弓形虫SAG1基因

将PCR扩增获得的弓形虫SAGI基因,与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建成pcDNA3-SAG1真核表达质粒,高压电转化入dam和PAOP基因双突变的减毒沙门氏菌(ZJ111株)中,并直接转染Vcro细胞,胰酶消化、收集细胞,SDS-PAGE和western blot可检测到30 ku左右的蛋白条带和印迹带.结果表明减毒沙门氏菌能将外源基因呈递给Vero细胞并进行表达.