北美栅锈菌和松杨栅锈菌可视化检测体系建立

目的 为实现北美栅锈菌和松杨栅锈菌快速有效的鉴别及鉴定。 方法 本研究根据两种锈菌的28SrDNA基因序列设计若干组LAMP引物。经筛选得到的引物以北美栅锈菌、松杨栅锈菌、图拉斯叉钩丝壳菌、芍药白粉菌、梨胶锈菌、羊肚菌、金针菇的基因组DNA为模板进行LAMP反应并完成特异性检测;首先建立初始LAMP反应体系,再进一步优化LAMP反应体系的组分和反应条件,加入羟基萘酚蓝实现可视化检测;最后确定检测体系灵敏度。 结果 表明,筛选出的引物具有特异性;25 μL北美栅锈菌LAMP检测体系最佳Mg2＋浓度为6 mmol·L−1,最佳内外引物比例为8：1,最佳dNTPs浓度为1.2 mmol·L−1;同样地,25 μL松杨栅锈菌LAMP检测体系最佳Mg2＋浓度为4 mmol·L−1,最佳内外引物比例为6：1,最佳dNTPs浓度为1 mmol·L−1。加入160 μM羟基萘酚蓝（HNB）可清晰地指示反应结果,两种检测体系在61 ℃条件下,分别反应30 min和40 min可实现目视判断结果,且灵敏度分别可达34 fg·μL−1和60 fg·μL−1。 结论 通过建立两种锈菌的可视化LAMP-HNB检测体系可实现对北美栅锈菌和松杨栅锈菌进行区分及鉴定,为快速鉴定和区分重要杨树锈病提供了技术支撑和实践参考。     

七叶树溃疡病病原真菌的分离与鉴别

【目的】分离和鉴别引起七叶树溃疡病的病原菌,为制定合理的防治技术提供依据。【方法】采用组织分离培养、人工接种、形态观察及核糖体转录间隔区序列(ITS-rDNA)分析,对引起七叶树溃疡病的水渍型溃疡病病原菌NW397和干腐型溃疡病病原菌NW3362种真菌进行鉴别与比较。【结果】引起七叶树溃疡病的病原为2种不同的真菌,并表现出不同的危害特征。水渍型溃疡病菌NW397 ITS-rDNA序列与多主葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea Sacc.)等的序列同源性高达99%;干腐型溃疡病菌NW336ITS-rDNA序列与乌饭树拟茎点菌(Phomopsisvaccinii)等的同源性高达95%以上。【结论】七叶树水渍型溃疡病菌定名为多主葡萄座腔菌(Botryosphaeria do-thidea Sacc.),干腐型溃疡病菌定名为梨干枯拟茎点菌(Phompsis fukushii Tanaka et Mill)。     

美洲黑杨无性系对杨叶锈病的抗性研究

研究了美洲黑杨(Populus deltoides)无性系对杨叶锈病(Melampsora larici-populina)的抗性问题.结果表明,供试的美洲黑杨无性系对杨叶锈病的抗性可分为4种类型,即高抗型、抗病型、感病型和高感型.     

针叶树苗圃病害调查与主要病害发生规律研究

本文调查了针叶树苗期病害的种类和苗期病害的发生规律，结果表明针叶树苗期病害有8种，其中侵染性病害有6种，生理性病害有2种。猝倒病是针叶树苗期主要的病害，表现为3种症状类型。日灼型猝倒是气象性病害的主要形式，由丝核菌Rhizoctonia和镰刀菌Fusarium引起的生物猝倒型和立枯型病害是针叶树育苗的主要病害，其发生与育苗地所处的环境、营养土基质有关,同时提出了对针叶树苗期病害防治的对策。     

核桃五个主栽品种对Botryosphaeria溃疡病的抗性测定

为测定陕西、川北地区核桃主栽品种对溃疡病的抗性差异,本文通过和针刺接种法,对11个核桃良种栽培品种1年生枝条进行了抗Botryosphaeria的初步评估;在此基础上,对其中抗性较强的5个品种,采用打孔法接种2年生枝条进一步进行了抗性测定和评估。结果表明“清香”和“香玲”对溃疡病的抗病性强,“鲁光”、“西林3号”和“西洛”对溃疡病的抗病性弱。核桃品种抗病性差异与接种方式和时间有关,但抗病品种清香和香玲抗性表现稳定。该研究结果为核桃引种栽培提供了依据。     

核桃黑斑病致病性泛菌的分离鉴定及壳聚糖抑菌的研究

为明确陕南地区核桃黑斑病病原菌种类,并筛选出无公害的有效抑菌剂,以陕南山阳县、丹凤县、商州区等地采集的发病核桃果实及枝条为研究对象,对其病原菌进行了系统分离和壳聚糖抑菌试验。根据致病性测定、菌体形态、培养特性、生理生化反应、16S rDNA及gyrB基因序列分析,对陕南核桃黑斑病病原进行鉴定;采用分光光度计测定OD₆₀₀下细菌受抑制的最低有效浓度。结果表明：陕南核桃黑斑病病原细菌为泛菌属的最后泛菌,可通过伤口侵染核桃的果实、嫩枝和叶片,发病时间短、致病性强;水溶性壳聚糖盐对该病原菌具有良好抑制效果,是防控核桃黑斑病的有效抑菌剂,对最后泛菌的最低抑制浓度分别为：壳聚糖盐酸盐3.5 g/L,壳聚糖乳酸盐0.5 g/L。     

温度和叶表化学物质对松杨栅锈菌夏孢子萌发的影响

松杨栅锈菌夏孢子萌发适宜温度范围为10～24℃,最适温度20℃左右。供试的2菌株对温度有不同的依赖性。TH菌株温度适应性范围较宽,GL菌株较窄。在最适温度范围内,供试的2个菌株呈现相同的萌发动力学模式,萌发最大速率出现在4～12h,温度越高,最大萌发速率出现时间越晚,并随时间的延长,萌发速率逐渐减小。在5、30℃,萌发速率有2～3个峰值,第1峰值最大,第2、第3峰值逐渐减小或消失。26℃下峰值呈现过渡型状态,有1个较小的次高峰。供试的2菌株,TH的萌发速率较GL稍高并在出现时间上略前。最适萌发条件下,石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水的卜氏杨和毛白杨提取物对松杨栅锈菌夏孢子萌发有不同的影响。毛白杨所有提取物在接种12h内,均抑制夏孢子的萌发,而卜氏杨乙醚提取物则促进夏孢子萌发,其余则抑制夏孢子萌发。所有水提取物在接种12h均表现为抑制作用。接种12～24h,2种杨树叶片正丁醇萃取物对夏孢子萌发速率均有一定程度的促进作用。     

杨树锈病的PCR检测

利用一对特异性引物进行PCR扩增,可以检测到感病杨树体内的病原物.     

杨树品种叶锈病抗病性研究

对引进的26个杨树种(品种)的叶锈病(Melampsora larici-populina)病情指数进行了田间调查和分析.结果表明:供试的26个树种均发病严重,发病率为100%,病情指数26.02～99.30.不同杂交组合的病情指数存在差异,但在多数杂交组合间差异不显著,而同一杂交组合的不同种(或品种)抗病性出现明显的分化,绝大多数品种间的病情指数存在显著差异.因此,在杨树抗锈病选育工作中,不仅要考虑不同派系的抗病性差异,更应注意种或品种间的抗病性分化.     

秦岭南坡火地塘林区油松、落叶松林地内生菌根真菌的研究

对秦岭南坡火地塘林区7种林分进行设点、采土、湿筛倾斜分离鉴定。共分离鉴定出17种内生菌根(VAM),逮属Glom us、Gigaspora、Acaulospora 属,以Glomus为主。不同林分及不同立地条件,内生菌根真菌种类和数量有差别。