T细胞疫苗在自身免疫性疾病中的应用

自身免疫性疾病的发生与体内自身反应性T细胞异常活化有关。T细胞疫苗是治疗自身免疫性疾病的一种新方法。用亚致病量的自身反应性T细胞接种自身免疫病患者,可减轻自身免疫反应,这可能是通过激活抗克隆型T细胞以抑制患者的自身反应性T细胞实现的。T细胞疫苗在许多动物实验及临床应用证明,是可行有效及安全的。     

2型糖尿病肾病与PPAR-γ2 Pro12Ala单核苷酸多态性的相关性研究

PPAR-γ2Pro12Ala（P12A）单核苷酸多态性（SNP）,包括PP、PA、AA三种基因型,由于AA突变率很低,用XA作为PA、AA共同代称。受试者301例,用RFLP-PCR行基因型测定。单纯T2DM组XA基因型频率明显低于正常对照组（0.101vs0.283,P〈0.05）;糖尿病肾病（DN）组及肌酐清除率减低（DN2）组中XA基因型者UAlb/Cr有明显降低（P〈0.05）。XA基因型携带者T2DM发病率降低,与DN发病无关。     

Torin2对人甲状腺乳头状癌细胞株生物学行为影响的研究

目的 探索一种新的二代哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂9-(6-氨基-3-吡啶基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]苯并[H]-1,6-萘啶-2(1H)-酮(Torin2)对人甲状腺乳头状癌(PTC)细胞生物学行为的影响,以期为临床靶向治疗PTC提供新的理论依据.方法 对人PCT的TPC-1细胞株和正常甲状腺Nth...     

过氧化物酶体增殖物受体与心血管疾病

过氧化物酶体增殖物受体(PPAR)-γ是配体依赖性的转录因子,分布于细胞核内与配体结合产生不同的生物学作用。近年来研究表明PPAR-γ除与糖脂代谢相关外还与另一些造成心血管疾病的重要危险因素密切相关,如胰岛素敏感性、血压调节、动脉粥样硬化,本文对此进行综述。     

MuSK-mCherry融合荧光蛋白的构建及对重症肌无力患者MuSK抗体的检测

目的：构建肌肉特异性激酶（MuSK）与红色荧光蛋白（mCherry）的重组融合蛋白（MuSK-mCherry）,并作为抗原用于重症肌无力（ MG）患者血清中的MuSK抗体（ MuSKAb）的检测。方法：应用PCR技术,从含有mCherry 基因的载体pRSET-B扩增mCherry基因,经T载体（pGEM-T Easy Vector）克隆至含有MuSK细胞外区第22-452位氨基酸肽段基因的载体pMT/BiP/V5-His（ MuSK）上,构建MuSK-mCherry融合荧光蛋白基因。将重组载体转染果蝇S2细胞,表达产物以共聚焦显微镜检查。以MuSK-mCherry融合蛋白作为抗原,应用荧光免疫沉淀试验检测MG患者MuSKAb。结果：成功地构建了MuSK-mCherry融合蛋白基因,并得到了表达。经对已知MuSKAb阳性的MG患者血清中的MuSKAb的检测证实,构建的MuSK-mCherry融合蛋白在荧光免疫沉淀试验中可以检测到MuSKAb。结论：以MuSK细胞外肽段与mCherry构建的融合荧光蛋白作为抗原,可以用于MG患者血清中的MuSKAb的检测。     

局部晚期NSCLC放化疗联合细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫疗法初步研究

目的比较局部晚期NSCLC采用放化疗与放化疗联合CIK过继免疫疗法治疗的疗效。方法回顾分析2011—2012年间收治的125例未行手术的局部晚期NSCLC 患者资料,其中102例放化疗（对照组）、23例放化疗联合CIK过继免疫治疗（综合治疗组）。采用倾向评分匹配法对两组进行1﹕2匹配,考虑因素包括肿瘤分期、放化疗方案、放化疗后疗效等,匹配后共59例（37、22例）患者入组,比较两组生存及肿瘤控制情况。 Kaplan－Meier法计算生存率并Logrank法检验和单因素预后分析。结果对照组和综合治疗组1、2、3年OS分别为73％、32％、16％和91％、59％、41％（ P＝0．030）,PFS分别为61％、21％、17％和45％、10％、10％（ P＝0．538）;ⅢB 期的3年OS分别为11％和47％（ P＝0．026）,序贯放化疗的3年OS分别为11％和46％（ P＝0．003）;鳞癌患者的3年DMFS分别为22％和73％（ P＝0．029）。两组不良反应发生率相近,放射性肺炎发生率分别为9％和15％（ P＝0．889）,放射性食管炎发生率分别为12％和7％（ P＝0．097）。结论放化疗联合CIK有可能使部分局部晚期NSCLC患者生存获益,但其应用人群、时机及剂量安全仍需进一步研究。     

Vav1在吲哚胺2,3双加氧酶抑制T细胞中的作用初探

目的:探讨吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)抑制T细胞中信号传导分子Vav1的分子机制.方法:应用稳定表达IDO的CHO细胞株,与纯化的外周血T细胞共孵育,检测IDO抑制T细胞增殖,诱导凋亡的情况,通过semi-quantitative RT-PCR检测T细胞中Vav1、IL-2 mRNA表达变化;Western blot及免疫沉淀技术检测Vav1蛋白表达及活化情况.结果:IDO可抑制T细胞的增殖.T细胞中Vav1和IL-2 mRNA水平明显下降(P<0.05).而且,IDO还能使Vav1蛋白的表达和磷酸化水平降低.结论:研究证实在肿瘤局部产生于抗原呈递细胞或肿瘤细胞的IDO,可能通过抑制细胞内重要的信号传导蛋白Vav1的表达和磷酸化过程,使肿瘤浸润淋巴细胞的主动免疫受损,有利于肿瘤发生免疫逃逸.     

稳定表达突变减毒志贺样毒素Ⅰ的CHO细胞株的建立与鉴定

目的:建立稳定表达突变减毒志贺样毒素Ⅰ(Stx1)的CHO细胞株。方法:用脂质体介导将突变减毒Stx1真核表达载体pcDNA3.1-Stx1D10、pcDNA3.1-Stx1D100转染中国仓鼠卵巢细胞系CHO,G418筛选抗性克隆,PCR、RT-PCR、Western blot等方法检测阳性细胞株,有限稀释法获得稳定表达突变减毒Stx1的CHO细胞株。检测阳性细胞株的培养上清对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用,并使用Stx 1 B亚基抗体对该作用进行阻断。结果:经2次克隆化获得稳定表达突变减毒Stx1的基因工程细胞株,Western blot检测和SKOV3细胞生长抑制实验证实该细胞株可以分泌突变减毒Stx1,该毒素对SKOV3细胞具有生长抑制作用且该作用可以被Stx1 B亚基抗体阻断。结论:成功地建立了分泌性表达突变减毒Stx1的CHO细胞株,命名为CHO/Stx1D10和CHO/Stx1D100。证实Stx1的天然信号肽可以被真核细胞识别从而使其被真核细胞分泌性表达。     

MUC1/Y基因真核表达载体构建及MUC1、MUC1/Y体外修饰DC诱导特异性抗肿瘤免疫应答

目的　构建MUC1 Y全长cDNA真核表达载体 ,并以MUC1及MUC1 Y真核表达载体修饰树突状细胞 (DC)诱导特异性抗肿瘤免疫。方法　构建MUC1 YDNA真核表达载体 ,选取 10例HLA A2乳腺癌患者 ,体外IL 4、GM CSF联合诱导DC ,并以pCDNA3.1 MUC1和pCDNA3.1 MUC1 Y转染DC ,同时以空载体为对照 ,以pIRES2 EGFP MUC1 Y观察转染效率 ,转染后DC与自体T细胞混合培养 ,诱导CTL。以MCF 7为特异性靶细胞 ,Raji为非特异性靶细胞 ,通过乳酸脱氢酶释放实验检测杀伤活性 ,以annexinⅤ FITC检测特异性CTL诱导靶细胞凋亡的情况。以ELISA法测定基因修饰后DC刺激自体T细胞分泌IFN γ的能力。结果　酶切鉴定及测序结果表明成功构建了MUC1 Y真核表达载体pIRES2 EGFP MUC1 Y和pCDNA3.1 MUC1 Y。pIRES2 EGFP MUC1 Y转染效率基本为 10 %左右 ,DC中MUC1表达率为 8%。杀伤实验表明T DC pCDNA3.1 MUC的杀伤活性为 6 4 % ,T DC pCDNA3.1 MUC1 Y为 4 6 %。这两组间差异有显著性 ,同时与对照组比较差异均有显著性。annexinⅤ FITC标记实验显示 ,T DC pCDNA3.1 MUC1对靶细胞的杀伤和诱导凋亡的能力显著高于T DC pCDNA3.1 MUC1 Y及对照组。基因修饰DC刺激自体T细胞分泌IFN γ的能力显著升高。结论　构建的真核表达载体pIRES2 EGFP MUC1 Y可用     

新型树突状细胞疫苗的构建及功能的初步鉴定

目的:构建可同时实现沉默细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)刺激和肿瘤相关抗原负载的新型树突状细胞(DC)疫苗。方法:构建沉默SOCS1并共表达HMGB1及肿瘤相关抗原NY-ESO-1的质粒(p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1)。体外诱导单核细胞分化为DC,将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞。同时设立未转染组、shNC/GFP转染组和p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组。PCR和Western blot验证基因及蛋白表达后,酶联免疫吸附(ELISA)法检测DC细胞分泌的肿瘤坏子因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12、IL-1及IL-6的变化。结果:经测序证实所构建质粒序列与预期序列一致,酶切和PCR验证质粒结构正确。成功将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞,并在基因和蛋白水平验证NY-ESO-1的正确表达,HMGB1可在胞浆内表达。SOCS1 shRNA质粒shS可沉默SOCS1表达。p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组DCTNF-α、IL-12、IL-1及IL-6分泌量较未转染组和shNC/GFP转染组升高(P<0.05)。结论:成功构建可同时实现沉默SOCS1、HMGB1刺激和肿瘤相关抗原负载的新型DC疫苗。