国内未见分布蝇种:澳洲麻蝇的形态和DNA条形码鉴定

目的 应用DNA条形码与形态分类相结合的方法,快速、准确鉴定在中山口岸入境船舶截获的1只蝇类.方法 2014年4月30日中山出入境检验检疫局神湾办事处从澳大利亚入境载有鲜葡萄的货船上截获1只蝇类,做成针插标本,并拍照存档.进行形态学鉴定,然后取1条后足提取基因组DNA,采用动物DNA条形码的通用引物(LCO1490和HCO2198)扩增目的片段,并进行纯化、克隆测序和序列分析,与NCBI及BOLD中的序列进行比对,构建NJ树.结果 形态学鉴定截获蝇类为雌性麻蝇科种类,由于缺少关于雌性麻蝇鉴定特征描述的参考资料,无法将该蝇鉴定到种,所获得的DNA条形码序列与BOLD中的澳洲麻蝇[Sarcophaga australis (Johnston et Tiegs,1921)]的序列相似度达100％.经过科技查新,确认是中国未见分布种.结论 根据鉴定结果,判定所截获的蝇类为雌性澳洲麻蝇,是我国首次截获.应用DNA条形码与形态鉴定相结合可以准确快速鉴定雌性麻蝇种类.     

DNA条形码技术在人体排出未知昆虫幼虫鉴定中的应用

目的 使用DNA条形码鉴定方法对两名儿童从尿道排出的不明昆虫幼虫进行鉴定,解决未知昆虫幼虫无法利用传统形态学鉴定方法进行鉴定的难题,为主诊医生后期制定针对性治疗方案提供科学依据。方法 以家长收集并送检的患儿从尿道排出的不明活体昆虫幼虫为材料,先进行图像采集和形态学描述,然后取部分昆虫幼虫组织提取基因组DNA,利用多细胞无脊椎动物线粒体细胞色素氧化酶I(COI)的通用引物进行DNA扩增,PCR产物直接从两端测序,DNA测序结果以MEGA6软件验证图谱确定为有效序列后,经拼接、去除通用引物序列,最终得到658 bp的COI基因片段碱基序列。上传数据与GenBank和BOLD数据库中的序列进行同源性比对,建立系统发育树。结果 序列测定结果与GenBank和BOLD中公布的白斑蛾蚋（Clogmia albipunctata）的COI序列相似性为100%。选取GenBank中与目的片段核苷酸序列比较所得相似性较高的7种物种序列,以红头丽蝇为外群,构建NJ树,发现昆虫幼虫的序列以及GenBank中的白斑蛾蚋聚为一类,毛蠓科的全部物种聚成一支,置信度高达100%。结论 根据实验结果可以判断这两名儿童...     

医学媒介生物微量组织直接扩增DNA条形码序列方法的研究

目的 为保证DNA条形码序列模板DNA来源的单一性,和最大程度减少凭证标本的形态破坏,建立一种从医学媒介生物微量组织中免提取,直接扩增DNA条形码序列的方法。方法 以螨、蚤、蜱单个个体以及小至蝇类后足1/5跗节的组织块为材料,通过优化裂解液浓度、裂解液和缓冲液配比,优化反应体系和反应条件,用KOD FX DNA聚合酶进行DNA条形码序列的直接扩增,反应产物测序,与NCBI基因库中的序列进行比较以验证其是否被污染。结果 裂解液优化为NaOH 50 mmol/L;裂解液和缓冲液配比优化为9∶1;反应体积优化为每50μl反应体系中2×KOD FX DNA聚合酶buffer（含Mg2 ＋）25μl、2mmol/LdNTP10μl、KOD FX DNA聚合酶（1U/μl）1μl、正向引物LCO1490（20μmol/L）、反向引物HCO2198（20μmol/L）各1μl;反应条件优化为：95℃3 min;98℃10 s,50℃30 s,68℃1 min,35个循环;68℃7 min。测序结果显示无污染,均为有效序列。结论 该方法操作简单而且省去了DNA提取的步骤,节约了时间和费用,适合螨、蚤、蜱单个个体以及小至蝇类后足1/5跗节的组织块DNA条形码序列的直接扩增。     

粗野粉蝇的DNA条形码和形态鉴定

目的应用DNA条形码与形态分类相结合鉴定中山口岸入境船舶截获的雌性蝇类。方法 2015年3月26日,在中山小榄港口岸对截获的爱尔兰进口废旧瓦楞纸箱中的雌性蝇类进行DNA条形码与形态鉴定;与相似种伪粗野粉蝇进行形态与DNA条形码的比较。结果所截获的蝇类为雌性粗野粉蝇;粗野粉蝇与伪粗野粉蝇在形态上的区别较细微,而在658 bp的DNA条形码序列上有32个核苷酸的差异,差异高达4.86%,远大于DNA条形码2%的种判断界限。结论应用DNA条形码与形态分类相结合方法可以准确快速鉴定蝇类。     

中山口岸截获国内未见分布染色硬翅蠊的鉴定

目的通过准确地鉴定中山口岸入境船舶截获的蜚蠊,为今后口岸鉴定该种蜚蠊提供参考依据。方法2017年2月24日在中山口岸截获的圭亚那进口原木中截获1只雄性蜚蠊,对其进行形态鉴定及描述,获取其DNA条形码序列并提交至GenBank。结果经形态鉴定,该雄性蜚蠊为染色硬翅蠊,隶属于蜚蠊目姬蠊科。经科技文献查新,确认为我国未见分布种且为国内口岸首次截获。结论 DNA条形码是形态鉴定的强有力补充,DNA条形码数据库有待完善和补充,应用形态鉴定和DNA条形码相结合可准确快速地鉴定外来蜚蠊。     

首次截获弯曲歪尾蠊 (Phyllodromiidae:Symploce)∗

2019年10月18日在中山港口岸来自莫桑比克进口原木中截获4头蜚蠊,通过外部特征初步判断为歪尾蠊属,利用原木来源地信息查找非洲地区歪尾蠊属的文献资料,通过外部形态和雄虫尾器的特征比较,最终确定截获的4头蜚蠊为弯曲歪尾蠊Symploce incuriosa(Saussure,1899).对截获的弯曲歪尾蠊进行了外部形态...     

新截获中国未见分布种杜比亚丽蝇形态和DNA条形码鉴定

目的利用DNA条形码技术鉴定外来媒介生物,提高物种鉴定的速度与准确度。方法对2013年9月在中山神湾口岸截获来自澳大利亚的丽蝇进行形态与DNA条形码鉴定,通过与澳大利亚的蝇类专家进行标本交流,进一步确认鉴定结果;并与相似种螳丽蝇进行形态与DNA条形码上的比较。结果通过形态观察与DNA条形码鉴定,所截获的丽蝇为杜比亚丽蝇;经科技查新,确认为中国未见分布种。结论 DNA条形码是传统形态分类的有力补充,对在国境卫生检验检疫工作中及时鉴定媒介生物,减少媒介生物本身及其携带病原体的扩散,减少对公共卫生的安全威胁起到重要作用。     

中山市白纹伊蚊现场种群击倒抗性基因检测分析

目的 检测广东省中山市不同生境白纹伊蚊现场种群的击倒抗性(kdr)基因突变,了解其抗药性水平,探讨kdr基因突变与性别间抗药性差异的关系,为蚊虫的抗性机制研究以及科学防制提供依据.方法 2019年8-11月在中山市选择5个生境采集白纹伊蚊幼虫和蛹569只,实验室饲养至成虫,提取单只成蚊基因组DNA,扩增并测序分析kdr...     

基于磁共振成像和机器学习的针刺镇痛神经标志物研究现状

针刺治疗疼痛类疾病疗效显著,患者的主观评价是目前临床研究中衡量针刺镇痛效果的常用标准,但缺乏客观性和精准性.近年来,有研究尝试应用磁共振成像和机器学习方法,分析针刺治疗前后患者大脑的磁共振影像,识别具有特异性的神经标志物.这些标志物不仅有助于阐释针刺镇痛的脑机制,且有望发展为研究针刺镇痛效应的客观指标.本文从基于磁共振...     

基于复杂网络图论分析的慢性肩周炎患者脑功能连接及拓扑结构研究

目的：通过基于复杂网络的图论分析方法 探讨慢性肩周炎患者（CSP）的脑功能连接及拓扑结构的变化。方法 ：选择37例CSP患者（CSP组）,同期选择年龄、性别及教育程度与其相匹配的24例健康志愿者为对照组;获取2组静息态f MRI数据,采用图论分析方法分析2组大脑功能网络的差异;将2组具有显著差异的功能连接与视觉模拟量表（VAS）评分行Spearman相关分析。结果：CSP组拓扑结构参数中聚类系数和局部效率显著低于对照组（t=-3.461,P=0.001;t=-2.502,P=0.015）。通过对功能连接（复杂网络的边）进行统计分析发现,与对照组相比,CSP组右侧眶内额上回与左侧枕中回、右侧前扣带和旁扣带脑回与左侧枕中回之间的功能连接增强（均P<0.05）;左侧眶部额上回与右侧回直肌、左侧眶部额中回与右侧眶部额中回、左侧回直肌与右侧回直肌、左侧楔叶与右侧梭状回之间的功能连接降低（均P<0.001）。CSP组左侧楔叶与右侧梭状回的功能连接值与VAS评分呈正相关（r=0.368,P=0.025）。结论：CSP患者脑网络拓扑结构及功能连接发生了改变,可能与其疼痛的发生发展机制有关。