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肿瘤坏死因子新型免疫抑制剂的构建、表达和鉴定 总被引:1,自引:2,他引:1
目的 用鸡卵清溶菌酶(Hen egg-white lysozyme,HEL)T辅助细胞表位序列替换hTNF-α3^ 末端序列,构建和表达hTNF-α新型免疫抑制剂。方法 将重组的hTNF-α HEL克隆、表达、纯化后进行初步的生物学活性鉴定。结果 DNA测序分析表明,重组的hTNF-α HEL3^ 末端序列与设计序列完全相同。将其插入pBV220表达载体中,重组菌经42℃诱导4h做SDS-PAGE分析,结果 显示该免疫抑制剂获得了表达,Mt为17000,其表达量为菌体总蛋白量的30%。Western blot结果证实,该表达蛋白可与抗TNF-α抗体产生免疫反应。对该表达蛋白进行了阴离子交换柱纯化,获得的重组蛋白的纯度可达95%以上。对该蛋白的体外杀伤活性检测表明,该蛋白已完全丧失了TNF-α的体外杀伤活性。结论 上述实验结果证明,TNF-α免疫抑制剂的构建获得了成功,该免疫抑制剂既保持了与TNF-α抗体结合的能力又失去了TNF-α的杀伤活性,为其下一步治疗作用的研究奠定了基础。 相似文献
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GM-CSF对MUC1基因疫苗抑制乳腺癌生长的增强作用 总被引:5,自引:2,他引:5
目的 :观察GM CSF有无增强MUC1基因疫苗对EMT6乳腺癌生长的特异性抑制作用。方法 :采用股四头肌肌肉注射法 ,将构建的MUC1基因疫苗pcDNA3.1 MUC1免疫雌性BALB/c小鼠 ,每 3wk 1次 ,共 3次。每次基因免疫后 1、3、5d ,皮下注射GM CSF 10 0 μL(1μg/ 10 0 μL)。最后 1次基因免疫后第 3周 ,接种表达MUC1的EMT6小鼠乳腺癌细胞。两周后观察、记录肿瘤的生长情况。于肿瘤细胞接种后第 4 3天 ,处死全部动物 ,称量肿瘤的质量。用 4h51Cr释放法检测小鼠脾特异性CTL的杀伤活性。结果 :接种肿瘤细胞后 4 3d ,MUC1基因疫苗加GM CSF组、MUC1基因疫苗组、pcDNA3.1加GM CSF组及pcDNA3.1组 ,EMT6肿瘤的大小依次为 (135± 33.8)mm3 、(2 5 0± 34.3)mm3 、(5 6 8± 4 3.6 )mm3 和 (5 96± 4 8.2 )mm3 ;平均瘤质量 (g)依次为 (0 .81± 0 .4 2 )g、(1.2 3± 0 .4 1)g、(2 .30± 0 .4 8)g及 (2 .2 8± 0 .5 8)g。与对照组相比较 ,MUC1基因疫苗组EMT6肿瘤的生长受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ;与单独MUC1基因疫苗组相比较 ,MUC1基因疫苗加GM CSF组抗肿瘤生长的作用有显著差异 (P <0 .0 5 )。在效靶比为 10 0∶1、5 0∶1、2 5∶1和 12 .5∶1时 ,MUC1基因疫苗加GM CSF组特异性CTL对EMT6靶细胞的杀伤率 ,依次为 6 8.5 %、 5 3.4 % 相似文献
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内皮素(endothelin,ET)是内皮细胞产生的由21个氨基酸构成的一种血管收缩肽,人基因组中3个独立的基因编码了3种不同的ET异构体,其药理学效应的差异提示可能存在不同的ET受体.本文NET受体的分子特征为重点,讨论了ETs的功能. 相似文献
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将合成的含有随机序列 (NNK) 1 0 的寡核苷酸片段 ,克隆入噬菌体呈现载体噬菌粒 p CANTAB5 E的 Sfi ,N ot 位点 ,即 cp 蛋白信号肽与成熟肽之间 ,电转化 E.coli TG1,构建了噬菌体表面呈现的十肽库 ,实际库容为 3.5 3× 10 7,插入率为 6 6 .7% .经辅助噬菌体 M13KO7超感染后 ,获得滴度为 4.8× 10 1 1 pfu/ m l的噬菌体上清 .经过两轮 panning筛选和富集 ,从构建的随机十肽库中筛选到 2 6个具有血管形成素结合活性的重组噬菌体克隆 ,对其中 12个阳性噬菌体克隆的短肽序列进行了分析 ,EL ISA检测结果显示 12个阳性噬菌体克隆都能够… 相似文献
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[范彬,张英起,赵宁,颜真,药立波,苏成芝.细胞与分子免疫学杂志,2001;17(1):29-31]]目的 在原核细胞中表达融合蛋白hTNFα-hPgnK5并鉴定其活性.方法 构建hTNFα-hPgnK5基因的表达载体,并在大肠杆菌DH5α中进行表达.以MTT法测定该融合蛋白体外抑制肿瘤细胞或血管内皮细胞增殖的活性.结果 成功地构建了hTNFα-hPgnK5表达载体并获得表达.免疫印迹分析表明,该融合蛋白具有hPgnK5的免疫活性.体外实验表明,该融合蛋白具有抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖的活性.结论 hPgnK5蛋白可与hTNFα共同表达,表达产物可抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖. 相似文献
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0 引言 胸腺素 α1(Thymosin alpha1,Tα1)是从胸腺素组分 5 (TF5 )中分离纯化出的热稳定酸性多肽 [1 ] ,由 2 8个氨基酸组成 ,Mr为 310 8.它是一种具有多种生物学活性的免疫调节剂 ,已应用于治疗乙肝、丙肝、癌症和免疫缺陷的研究中 .虽然胸腺素 α1有着广泛的应用前景 ,但由于其基因过短 ,很难利用基因工程方法实现直接表达 ,所以目前多是化学合成产品 [2 ] ,价格比较昂贵 ,应用的推广受到限制 .为了探索胸腺素α1多聚体的可能的生物学活性及其基因的体外表达 ,我们利用随机退火与 PCR技术相结合的方法构建了胸腺素α1的多串体基因 … 相似文献
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人纤溶酶原饼环区5基因的化学合成与原核载体的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
0 引言 抑制肿瘤新生血管生长可以抑制肿瘤生长 ,这是目前肿瘤治疗中新发展的治疗途径 .血管生长抑制因子是由纤溶酶原中的前四个饼环区构成的 ,具有抑制肿瘤新生血管进而达到抑制肿瘤的作用 [1 ] .研究表明 ,纤溶酶原饼环区 5 (简称 K5 ,下同 ) ,具有比血管生长抑制因子更佳的抑制肿瘤新生血管生长的作用 [2 ] .我们将人工合成的人纤溶酶原 K5 基因的 8段核酸片段组成为一个完整的 K5 基因 ,并连入原核载体中获得成功 .1 材料和方法1 .1 材料 p GEM3zf(- )质粒 ,JM1 0 9菌种由本室保存 ,T4多核苷酸激酶为 MBI公司产品 ,Bam HI,… 相似文献
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目的应用非对称PCR-荧光偏振(FP)技术建立一种同步检测全血中4种主要疱疹病毒(单纯疱疹病毒1/2型,巨细胞病毒、EB病毒)的新方法。方法以人疱疹病毒属通用引物行非对称PCR,扩增从179例样本中抽提的DNA。PCR扩增产物与特异性单纯疱疹病毒1/2型(HSV-1/-2)、巨细胞病毒(CMV)和EB病毒(EBV)寡核苷酸探针混合物温育杂交,荧光偏振检测技术检测杂交液荧光偏振值,据荧光偏振值判断病毒感染类型,并以DNA序列测定结果为参照。结果与DNA序列测定的阳性检测符合率为100%,但DNA序列测定检测均未检出多重混合感染。非对称PCR-FP方法对HSV-1/-2检测的灵敏度达到1.0×10~3拷贝/ml,对EBV和CMV检测的灵敏度达到2.0×10~3拷贝/ml。结论本法对于4种主要疱疹病毒感染的筛查及预防、预后判断具重要价值。 相似文献
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MUC1在原发性肝癌和肝硬化组织中的表达及其意义 总被引:1,自引:1,他引:1
目的 探讨MUC 1在原发性肝癌及肝硬化病变组织中的表达及其在肝癌诊断和免疫治疗中的意义。方法 采用免疫组化方法检测 43例原发性肝癌组织 (肝细胞癌 3 4例 ,胆管细胞癌 9例 )和 12例肝硬化及 6例正常肝组织中MUC1的表达。结果 肝癌组织中可见MUC 1强阳性表达 ,阳性反应信号为棕黄色颗粒 ,主要位于细胞膜上 ;肝硬化病变组织中仅 2例可见MUC 1弱阳性反应信号 ;正常肝组织中未见MUC1表达。MUC1在肝癌组织中的阳性表达率与其它两组肝组织之间存在统计学差异 (P <0 .0 1)。MUC 1在肝癌组织中阳性表达与肝癌组织的病理类型和组织学分化无明显关系 (P >0 .0 5 ) ;门静脉有无癌栓两组之间有差异显著性 (P <0 .0 5 )。结论 MUC1在肝癌组织中的表达及分布特点可作为肝癌的辅助鉴别诊断指标 ,有可能作为肝癌免疫治疗的靶抗原。 相似文献
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0 引言 人肿瘤的发生、转移和血管形成密不可分.近年来,已发现多种具有血管形成活性的因子,如纤维细胞生长因子(FGF),转化生长因子(TGF),血管形成素(angiogenin)等.其中血管形成素是第一个肿瘤来源的具有血管形成活性蛋白,在体外可以诱导鸡胚绒毛尿囊膜及兔角膜血管形成[1],因此可能在肿瘤发生中有重要作用.文献[2,3]报道,从人肝cDNA文库中获得人血管形成素的基因全长,并推导出氨基酸.我们利用RTPCR从人肺癌细胞株A549中提取总RNA,成功克隆了人血管形成素cDNA,其序列… 相似文献