人类ZAKβ与YWHAZ蛋白相互作用的初步研究

目的研究ZAKβ与YWHAZ蛋白之间的相互作用。方法以ZAKβ为诱饵蛋白,利用酵母双杂交筛选人类肝脏cDNA文库,经GST Pull-down、免疫共沉淀和细胞共定位实验分别验证ZAKβ与猎物蛋白在体外和细胞内的相互作用,构建ZAKβ的截短体以确定相互作用的区域,用磷酸化抗体检测ZAKβ在相互作用中的磷酸化作用,并通过流式细胞仪检测这对蛋白相互作用对细胞周期的影响。结果利用酵母双杂交筛选到一个能与ZAKβ相互作用的蛋白YWHAZ,并在体外和细胞内都验证了这二者的相互作用,发现这两个蛋白都能共定位于293T细胞的胞质中,确定了ZAKβ的N端1~250氨基酸为与YWHAZ蛋白相互作用的区域。体外实验发现了这二者的相互作用涉及到磷酸化反应,发现这对蛋白的相互作用能提高293T细胞的G2期水平。结论首次发现并证实了ZAKβ和YWHAZ之间的相互作用,发现该相互作用涉及到磷酸化过程并能够对细胞周期产生影响。     

新生隐球菌荚膜基因CAP60与荧光蛋白融合表达系统的构建

荚膜是新生隐球菌的主要毒性因子 ,目前Ｃｈａｎｇ等已克隆了 4种荚膜基因 :ＣＡＰ5 9、ＣＡＰ6 4、ＣＡＰ6 0及ＣＡＰ10。已知这 4种基因对新生隐球菌的荚膜形成都是必须的 ,缺失任何一个基因都会使新生隐球菌变成无荚膜表型。搞清荚膜形成的任何一个生理、生化机制都将在新生隐球菌的临床诊断和治疗上带来突破性的进展。我们建立荧光蛋白作为标记与荚膜基因ＣＡＰ6 0融合表达 ,为进一步的研究创造条件。根据已知的ＣＡＰ6 0基因序列设计ＰＣＲ引物 ,上游为 5′ ＡＴＴＧＣＴＡＧＣＴＴＣＧＡ ＣＡＧＡＣＡＴＴＧＡＧＣＣＣＴ 3′ ,下游引…     

基于叶绿体matK基因序列探讨10种石杉科石杉属植物的系统关系及分子鉴定

目的:利用叶绿体matK基因序列探讨10种石杉属植物的系统发育及分子鉴定.方法:分别从9种石杉属植物中提取总DNA,经扩增纯化后,用PCR产物直接测序.结果:对石杉属Huperzia Bernh.9个种的叶绿体matK基因进行了测序,序列长度为1 589 bp,并对10个种(亮叶石杉H.lucidula的matK基因序列从GenBank中下载)的matK序列进行比对,其中有35个系统发育信息位点及35个变异位点,以垂穗石松Lycopodiella cernua为外类群,利用MEGA 3.1软件计算种与种之间的遗传距离在1.59%～0.25%,并构建系统树,获得最简约树和邻接树.结论:小杉兰组和蛇足石杉组植物分别聚成一枝,构成姊妹群,其靴带支持率分别为98%和99%.长柄石杉与蛇足石杉分别聚在2个不同进化枝,二者间有19个碱基差异,遗传距离为1.21%.建议应将长柄石杉单独列为一个种.     

71株白念珠菌临床分离株微卫星基因分型

目的 建立高效、快速、简便的白念珠菌临床分离株三重保守基因微卫星分型技术。方法 以煮沸法处理的71株白念珠菌野生株为模板，三色荧光分别标记保守基因CDC3、EF3和HIS3微卫星序列引物，PCR扩增，产物行聚丙烯酰胺凝胶电泳。由基因扫描分析软件获取片段的精确长度，Genotyper软件行基因分型。结果 71株白念珠菌野生株行CDC3、EF3和HIS3基因分型分别获得5、10、8种等位基因，7、8、9种基因型，三位点联合分析共获得14种菌株基因型。结论 白念珠菌多重保守基因微卫星分型能从基因水平快速、高效的对临床分离株进行分型，对白念珠菌的流行病学研究有重要价值。     

益母草类中药原植物的核核糖体内转录间隔区序列分析

目的分析益母草属4种植物nrDNAITS序列,探讨其在益母草药材DNA分子鉴别中的作用。方法对4种益母草属植物分别进行ITS序列的PCR扩增和测序,并运用CLUSTRALX和MEGA软件进行分析。结果测得4种植物的ITS序列,包括ITS1、5.8S和ITS2全长序列以及18S、26S部分序列;益母草及其易混淆的3种植物ITS1、ITS2序列的差异性分别为7.2%～18.8%和14.2%～27%。根据ITS序列特征所构建的系统树与传统分类有所不同。结论ITS序列特征可作为益母草种间鉴别的有效分子标记。     

红藻氨酸致痫大鼠海马神经元中真核生物起始因子2α酶切片段的产生

目的：研究半胱氨酸一天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)在红藻氨酸癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中，对其已知底物真核生物起始因子2(eIF2α)的作用。方法：制备红藻氨酸诱导大鼠癫痫模型，记录模型发作行为及脑电图表现，以TUNEL法检测模型癫痫发作终止后12、24、48、72和96h海马神经元凋亡情况，同时以Westerm blot法检测模型鼠海马eIF2α的表达变化及其与细胞凋亡之间的相关性。结果：在癫痫发作后12h出现凋亡神经元，随时间延长，海马神经元凋亡数不断增加，72h达高峰；发作后24h海马神经元出现了Caspase-3酶切eIF2α产生的片段，并逐渐变浓，至72h。结论：癫痫模型大鼠海马中caspase-3酶切eIF2α与神经元凋亡的发生时间一致，提示在癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中eIF2α被Caspase-3酶切。     

酵母LAG1同源的人类长寿保障新基因LASS2的克隆和功能研究

目的　分离和克隆肝癌相关基因。方法　我们用高通量功能筛选和RACE(rapidamplificationofcDNAends)方法从人肝cDNA文库中克隆到一个与酵母长寿保障基因LAG1高度同源的人类新基因LASS2 (homosapienslongevityassurancehomologue 2ofyeastLAG1)。结果　LASS2在正常人肝组织和肾组织中高表达 ,其表达谱不同于早先在人中克隆到的另一个与酵母LAG1高度同源的人类长寿保障基因LAG1Hs- 1。放射杂交基因定位显示LASS2位于人类染色体 1q11,酵母双杂交和GST结合实验发现LASS2蛋白能与细胞中的几个膜相关受体或转运体相互作用 ;另外 ,LASS2在体外对人肝癌细胞的克隆形成具有抑制作用 ,提示该基因可能参与细胞的生长调控。结论　LASS2是一个新的肝癌相关基因。     

微卫星基因分型法分析生殖器白念珠菌感染的传播特点

目的 建立适用于株间鉴别的白念珠菌快速微卫星基因分型方法,探索生殖器白念珠菌感染特点.方法 采集39例女性和27例男性生殖器念珠菌病患者生殖器、肛管和口腔的白念珠菌分离株.以三色荧光标记引物,PCR扩增白念珠菌保守基因CDC3、EF3和HIS3微卫星序列,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,行微卫星多态性基因分型.结果 三基因联合分析显示,男女生殖器白念珠菌感染者共获18种基因型,主要致病菌株基因型为116:124、122:131、160:200,占感染者的50%以上.3种共有基因型占71%.女性患者中肛管部位菌株基因型与生殖器部位完全一致的占80%,男性则仅占3.8%.女性患者口腔部位的菌株基因型与生殖器部位完全一致的仅占2.7%,男性未见口腔和生殖器一致的菌株基因型.71%的夫妻共患者间生殖器白念珠菌基因型完全相同,其中80%的致病菌株基因型为两性皆感染的主要致病性白念珠菌.结论 改良的白念珠菌微卫星多态性基因分型法能够特异、准确、稳定和快速地进行菌株间鉴别.生殖器白念珠菌感染存在优势基因型.     

新生隐球菌稳定载体的构建

新生隐球菌是一种具有荚膜、能在免疫功能低下人群中引起致命的系统性疾病的酵母真菌。要研究新生隐球菌致病的分子生物学机制 ,必须有一个相应的遗传学操作系统 ,而稳定的转化载体是其中的一个重要组成部分。该载体除了有用以识别的选择性标记外 [1 ] ,必须有较高的转化效率 ,并且有自身的稳定性。我们曾用带有 URA 5基因的质粒 p Cntell作为新生隐球菌转化系统中的载体 ,但该质粒没有自主复制序列 (autonomously replicating sequence,ARS) [2 ] ,转化效率及稳定性较低 ,不利于筛选新基因及对基因的功能进行研究。因此 ,我们尝试构建了…     

T淋巴细胞转化抑制试验测定肿瘤患者血清中抑制因子

肿瘤患者免疫功能是否降低,目前还存在不同的见解,Harris 指出肿瘤患者即使保持免疫功能,肿瘤还是持续增殖;倘若免疫功能降低,有时仍维持缓解现象。故认为免疫力升降与肿瘤消长不是直接关系。但从临床症状及预后观察,免疫力正常,生存率往往延长。在一般情况下,肿瘤患者后期,由于代谢异常,改变了免疫调节,出现免疫功能障碍,引起细胞免疫功能降低,导致肿瘤恶性发展。但其淋巴细胞体外功能测定往往与正常淋巴细胞没有显著性差异,这是由于患者血清中存在抑制因子,或检测方法不敏感所致。