一个承载分子的设计与肽抗生素hPAB-β的高效表达

目的 通过设计一个承载蛋白分子高效表达肽抗生素hPAB-β，为大量制备hPAB-β奠定基础。方法 根据肽抗生素的特性，确立4条设计原则，并据此设计一489bp的承载蛋白编码序列，用化学合成法获得该序列并将之克隆到pQE-32中构建成表达载体，进一步将肽抗生素hPAB-β基因插入上述表达载体，肽抗生素基因位于承载蛋白编码序列3'－端，两者构成融合基因，将含融合基因的表达载体转化大肠杆菌JM109，筛选阳性重组子，并用阳性重组子表达融合蛋白。结果 设计的承载蛋白为163个氨基酸，分子量17668.80，等电点5.621。用承载分子与肽抗生素hPAB-β构建的融合蛋白表达载体转化细菌后，筛选到4个阳性重组子，均能高效表达肽抗生素融合蛋白，融合蛋白的产量占细菌总蛋白的40％－45％。结论 设计的承载蛋白分子能够实现肽抗生素的高效表达。     

肽抗生素hPAB-β的化学合成及其杀菌活性的初步证实

目的 化学合成、纯化并初步测定肽抗生素hPAB-β的活性，为后续研究奠定基础。方法 采用固相合成法合成肽抗生素hPAB-β，经RP－HPLC纯化，用质谱进行分子量鉴定，谷胱甘肽氧化／还原法复性合成产物，进一步用阳离子交换柱纯化复性产物，收集主峰，药敏法初步测定合成肽的抗菌活性。结果 合成肽抗生素hPAB-β的纯度为86.52%，经质谱分析，合成肽的分子量测定值与理论值相符，用谷胱甘肽氧化／还原法复性合成肽取得了较好的效果。复性产物对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌具有杀灭作用。结论 化学合成的肽抗生素hPAB-β具有良好的杀菌活性。