大蒜素体外抗猴甲型轮状病毒的研究

目的  研究大蒜素体外抗猴甲型轮状病毒（SA11）的作用。方法  通过病毒滴度测定来确定大蒜素能否抗SA11以及最佳浓度。结果  大蒜素对MA104细胞的最大无毒浓度为100 mg/ml,病毒滴度测定可以得出,50 mg/ml的大蒜素可以抑制SA11感染的MA104细胞出现细胞病变效应（CPE）。结论  一定浓度的大蒜素在体外有抗SA11的作用。

     

纳尔逊海湾病毒S3蛋白纯化及大鼠多克隆抗体制备

目的制备纳尔逊海湾病毒(NBV)S3多克隆抗体。方法首先将构建好的Pris His MB-S3重组基因质粒,转化到大肠杆菌(E.coil)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。镍柱亲和层析法纯化目的蛋白以获得大量融合重组蛋白,以此为抗原免疫大鼠制备抗S3多克隆抗体并进行鉴定。结果 Pris His MB-S3蛋白的相对分子质量(M_r)约39 000,以包涵体形式存在,通过免疫大鼠成功制备出NBV S3多克隆抗体。间接ELISA测定抗体效价达1∶64 000。间接免疫荧光实验证明S3蛋白成功在细胞内表达并以颗粒状分布在细胞质内。结论成功获得高反应性和高特异性的S3蛋白多克隆抗体。     

人致病性呼肠孤病毒M3编码蛋白纯化及多克隆抗体制备

目的  根据构建的人致病性纳尔逊海湾病毒（NBVs）M3基因片段质粒,纯化融合蛋白制备NBVs M3多克隆抗体。方法  利用构建的纳尔逊海湾病毒（NBVs）M3基因质粒Pris His MB-M3,转化至大肠埃希菌（E.coil）BL21（DE3）感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达,产物经过镍柱亲和层析法获得Pris His MB-M3融合蛋白;将纯化的融合蛋白作为抗原免疫家兔,获得NBVs M3多克隆抗体;蛋白免疫印迹检测（Western blot）蛋白准确性以及多克隆抗体抗性。结果  SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色检测显示：25℃、IPTG浓度为0.3 mmol/L,诱导12 h,Pris His MB-M3融合蛋白表达量最高;在咪唑浓度为MCAC-20、MCAC-40条件时洗脱下目的蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗体,Western blot验证成功制备出NBVs M3多克隆抗体。结论  成功获得了灵敏性及特异性较高的纳尔逊海湾病毒（NBVs）M3多克隆抗体,为进一步研究该病毒的致病性提供了很高的应用价值。