排序方式: 共有39条查询结果,搜索用时 0 毫秒
1.
作者采用PCR方法克隆了我国海南省FCC1/HN株P190抗原两个保守区基因,分别定名为P190CRI和P190CRV。基因片段经纯化后连接到pUC18载体中进行DNA序列分析,结果显示:除了P190CRV中有5个碱基变换外,其余序列均与MAD20型序列一致。经序列分析的两个基因片段分别与pGEX-2T载体连接,经双酶切鉴定后转化感受态JM109(DE_3)大肠杆菌进行高效融合表达,并且用Sepharose 4B-谷胱甘肽层析柱进行亲和纯化,结果为:两个插入基因片段均得到高效融合表达,经一步亲和纯化后就取得高纯度的重组蛋白。 相似文献
2.
AstudyonimprovementofexpressionofhumanG-CSFcDNAtransferredwithretroviraldouble-copyvectorGuoBaoyu(郭葆玉);ZhangSuying(张淑英);XuHui... 相似文献
3.
导向药物或称免疫毒素,由导向系统与“弹头”两部分组成,它能高效杀死癌细胞,又对正常细胞有很小损伤作用,然而近年来的研究表明,将导向系统与“弹头”偶连时存在着药效明显下降、鼠的单克隆抗体对人有免疫原性等一系列问题。对于这些涉及免疫毒素构建中的一些迫需解决的问题,国内外学者近来在这方面提出了一些克服的办法和崭新的设计思路——用基因工程技术制备嵌合抗体。本文综述了构建免疫毒素所应具备的理想条件、存在问题的解决途径及未来的发展方向。 相似文献
4.
T淋巴细胞在疟疾免疫中起重要作用,因此在疫苗设计时应注重掺入T细胞表位。活的减毒细菌或病毒载体在携带异源抗原和诱生细胞免疫方面具有重要作用。红内期MSA1,MSA2,RESA和EBA-175抗原等被列为重要疫苗候选抗原,它们的一些保护性表位也已鉴定。SPf.66合成肽疫苗目前受到很大关注,并已进入人体临床试验。本文还展望了红内期疫苗的发展前景。 相似文献
5.
目的 :设计切割ki-rasG12V mRNA的特异性ribozyme(Rz2 17) ,明确其对癌基因ki-rasG12VmRNA的细胞内外切割活性 ,为以ki-rasG12VmRNA为特异性靶分子的基因治疗及癌基因ki-ras的功能研究提拱一种新的途径。方法 :依Symons总结的“锤头结构”原理 ,设计一种能特异性切割ki-rasG12VmRNA的ribozyme ,利用DNA重组技术构建ki-rasG12V外显子 1和ri-bozymeRz2l7的体外转录质粒及ribozymeRz2 17的真核表达质粒 ,体外转录获得ribozymeRz2 17及ki-rasG12V外显子 1mRNA ,在含Mg2 溶液中ribozymeRz2 17对其靶RNA分子进行切割。以RT -PCR对转染ribozymeRz2 17真核表达质粒的细胞ki-rasG12VmRNA进行半定量分析。结果 :ki-rasG12V外显子 1体外转录mRNA分子 ,能被ribozymeRz2 17定点切割而野生型ki-ras外显子 1体外转录mRNA则不被切割 ;转染ribozymeRz2 17的胰癌细胞ki-rasG12VmRNA含量减少 ,而转染ri bozymeRz2 17的肝癌细胞其内源性ki-rasmRNA含量无明显变化。结论 :ribozymeRz2 17无论在细胞内外均能剪切突变型ki-rasmRNA(G12V)而且其切割作用为突变型ki-rasG12VmRNA特异性的。 相似文献
6.
The homogeneity between the high-and low-affinity glucocorticoid receptors(GR_H and GR_L)was testified by immunoaffinity chromatography using Mab N250(recognizing the immunogenic domain at the N terminal of GR_H)and Mab BuGR1(recognizing the DNA binding domain of GR_H).The specific binding peak of 0.98μmol/L[~3H]triamcinolone acetonide(TA)was higher than that of 52.50nmol/L[~3H]TA.The re-sult suggests that the antigenic determinants of GR_L are similar to those of GR_H.ThecDNA of rat liver GR_H was introduced into GR_H-and GR_L-negative mouse fibroblast cellline E82.A3 by calcium phosphate coprecipitation.A number of clones which expressGR_H were selected with G418(400μg/ml).The results of radioligand binding assay indicatethat GR_H gene is expressed successfully and GR_L also may be encoded by GR_H gene. 相似文献
7.
目的:确定人工设计的梅核Rx199对原癌基因K-ras mRNA的体外切割活性,为K-ras特异性核酶的体内应用提供依据。方法:利用DNA重组技术构建K-ras外显子1及核酶Rz199的体外转录质粒,以T7RNA聚合酶进行转录获得核酶Rz199对其靶RNA分子进行切割。结果:K-ras体外转录体为254nt的RNA分子,能被核酶Rz199切割成大小分别为90,164nt的2个片段。结论:梅核Ra1 相似文献
8.
恶性疟P190(亦称裂殖子表而抗原1,MSA1)是疟原虫红内期裂殖体产生的一种塘蛋白,分子量约190 kD。由于该抗原在疟疚病人和实验动物中均能诱生很强的保护性免疫力,因而已将它列入重要的疟疾疫苗候选抗原。P190存在株间抗原差异,但该变异属于等位基因双态变异。至今经序列分析鉴定的虫株中只发现两种变异类型序列,MAD20型和Kl型。比较不同虫株该基因序列可将该分子划分为保守区、双态区和多态区。近来研究提示,双态区可能是该分子重要保护性免疫控制区。我们克隆了我国恶性疟FCC1/HN株该双态区的基因。方法为设计和合成一对引物,在引物的5’端设有 相似文献
9.
为克服逆转录病毒中内部启动子对插入外源基因表达的干扰,将人G-CSF(粒细胞集落刺激因子)cDNA插入双拷贝载体N2A的3'LTRU3区上的多克隆位点,酶切鉴定后将重组质粒用电击转导法转入Psi-2嗜单性包装细胞系,经G-418选择压力,两周后挑出阳性克隆,测定感染滴度后转染NIH3T3细胞,选择挑出抗性克隆,测定G-CSF表达量,最高达53.3U/106细胞。Southern印迹和Northern印迹分析证明嵌合的目的基因在感染细胞中通过基因复制而转染到5'LTR的转录单位之外并且在染色体DNA中稳定整合,复制产生两个拷贝,在3'LTR和5'LTR中各有一个基因。 相似文献
10.
本实验分别用两种融合表达载体(pGEX-2T及pDS-6H)在大肠杆菌XL1-Blue中表达人促红细胞生成素(h-EPO)。结果发现,虽然h-EPO基因中大肠杆菌使用频率为0%或1%的密码子占密码子总量的14.3%,但实验中却取得了较高的蛋白表达量。pGEX-2T和pDS-6H中表达的融合蛋白(分子量:44400和23800)分别占细菌总蛋白的29.7%和17.5%。从而提示,一个基因中的密码子使用频率与翻译延长速率之间可能不是一种简单的对应关系。表达载体pGEX-2T中5'融合基因长度达1300bp,而pDS-6H中仅为36bp,而pDS-6H但两者表达水平却无显著差异,因此作为翻译起始限制因素的翻译起始区的ATG下游顺序仅需长约36个核苷酸。 相似文献