一氧化氮合酶与缺氧复氧所致神经细胞凋亡及银杏叶提取物的保护作用

目的　探讨一氧化氮 (NO)在缺氧复氧诱导神经细胞凋亡中的作用及中药银杏叶提取物的保护机制。方法　实验使用胎龄 16～ 17日Wistar大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养 ;采用Wright Giemsa染色 ,光镜、透射电子显微镜观察 ;原位末端标记法确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型 ;应用NADPH d组织化学方法检测神经细胞一氧化氮合酶 (NOS)的表达并用计算机图像分析系统进行定量检测。　结果　缺氧复氧可以使大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡 ,随缺氧时间的延长 ,凋亡细胞数渐多 ,至缺氧 8h复氧 18h达高峰 ;在缺氧 2h(H2 R0 组 )和缺氧 8h复氧 18h(R8R1 8)组中神经细胞NOS表达均显著增高 ,与正常对照组比有显著性差异 (P <0 0 1;P <0 0 5 )。EGB能显著抑制此双时相NOS活性的增强 ,并明显降低神经细胞凋亡率。　结论　缺氧复氧损伤可诱导培养的大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡。NOS表达增强从而使NO产生增加可能是缺氧复氧诱导神经细胞凋亡的机制之一。银杏叶提取物 (EGB)经下调NOS表达活性 ,抑制NO的产生保护培养的大鼠大脑皮层神经细胞免于凋亡。     

鼠胚脑皮质及海马神经元原代培养方法的改进

神经细胞原代培养是研究神经细胞的重要手段之一^[1,2].传统方法是将神经细胞与神经胶质细胞混合培养,因此无法满足在单一神经细胞培养基础上进行研究的需要。1998年10月至1999年9月,我们对传统混合培养方法在取材、消化、温度、机械操作等方面进行控制和改进,得到了比较满意的相对单一的神经细胞培养物和单神经细胞网络,为进一步开展神经生物学研究提供了相对稳定的体外模型。     

无血清培养人肝癌细胞增生率的变化和bFGF在细胞中的表达

采用无血清培养体系 ,研究肿瘤细胞自分泌调控机制。将人肝癌细胞培养在无血清无外源分裂因子培养基中 ,采用细胞原位计数法和免疫组织化学染色法 ,观察不同时相人肝癌细胞增生率的变化以及碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达情况。结果 :人肝癌细胞生长良好 ,其增生速度与其分泌的bFGF量成正比。提示 :肝癌细胞在无外源生长因子的条件下通过分泌bFGF ,以自分泌和旁分泌的方式作用于自身和相邻细胞 ,促进细胞生长和增生。     

荧光染料在视神经脊髓鞘形成期从轴突至少突胶质细胞的扩散

将真蓝(true blue)混悬液注入出生后7、14、28d大鼠眼球内,经过一定时间后,视神经内的轴突和少突胶质细胞被荧光标记。荧光强度在视神经眼球端强于视神经交叉端;出生后14～28d的幼鼠荧光标记明显强于出生后7d的幼鼠;不同年龄组的动物荧光标记普遍在注射荧光染料后的第5d显著增强。本研究表明,荧光染料可被视网膜的节细胞吸收,经轴突输送,然后,横向扩散到少突胶质细胞,扩散的通路可能是朗氏结旁区的轴胶连接。     

银杏叶提取物对缺氧复氧致神经细胞凋亡中Bax基因表达的影响

为探讨缺氧复氧致原代培养的大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中 ,Bax基因的表达及银杏叶提取物 (EGB)对其的调节作用 ,用胎龄 1 6～ 1 7dWistar大鼠的大脑皮质神经细胞进行原代分离培养。采用原位末端标记法 (TUNEL)透射电镜技术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型 ,并应用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间Bax基因的表达。结果 :缺氧复氧可以使大鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡 ,随缺氧时间的延长 ,凋亡细胞数逐渐增多 ,至缺氧 8h ,复氧 1 8h达高峰 ,银杏叶提取物预保护可使凋亡细胞数减少 ;同时随着缺氧时间的延长 ,Bax基因表达逐渐增高 ,EGB可逆转缺氧复氧时Bax的表达。提示 :EGB对缺氧复氧时Bax的表达具有明显的抑制作用 ,这可能是EGB对抗缺氧复氧时胎鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡的机制之一。     

银杏叶提取物对缺氧复氧致神经细胞凋亡中Bcl-2蛋白表达的影响

为探讨缺氧 /复氧致原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞凋亡中 Bcl-2的表达及银杏叶提取物的调节作用 ,本实验使用胎龄 16～ 17d Wistar大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养。采用 TUNEL染色方法、透射电镜技术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型 ,并应用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间 Bcl-2基因的表达。结果显示 :缺氧复氧可使大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡 ,随缺氧时间的延长 ,凋亡细胞数渐多 ,至缺氧 8h,复氧 18h达高峰 ,银杏叶提取物预保护可使凋亡细胞数减少 ;随缺氧时间延长 ,Bcl-2表达逐渐下降 ,银杏叶提取物可逆转缺氧复氧时 Bcl-2的表达。结果提示 ,银杏叶提取物对缺氧复氧时Bcl-2表达具有明显的抑制作用 ,这种抑制作用可能是银杏叶提取物对抗缺氧复氧时胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡的机制之一。     

几种哺乳动物神经胰岛复合体的组织学观察

本文为对几种成年哺乳类的神经胰岛复合体的组织学研究。本文所得结果表明,这几种成年哺乳类胰腺中都有此复合体存在,但数目很少,并有种属差异。狗和豚鼠较多,兔最少。复合体分布在小叶间明显多于小叶内。此复合体按其结构特点可分为四型:(1)A型:胰岛细胞与自主神经节细胞相混一起,二者无结缔组织分隔或结缔组织极少;(2)B型:胰岛细胞与神经节细胞相邻,其间有薄层结缔组织分隔;(3)C型:胰岛细胞与神经纤维束相邻或相混;(4)D型:胰岛同时与神经节细胞和神经纤维束相邻。     

人参提取物对内毒素所致小鼠脾细胞损伤的保护作用

目的 观察人参提取物在内毒素脂多糖(LPS)所致的SIRS／MODS中对脾细胞的作用。方法 通过HE、TUNEL染色和透射电镜比较注射人参提取物(GS)后再注射LPS时的脾脏形态学及凋亡情况，并用免疫组织化学的方法检测Bcl-2，Fas，FasL的表达。结果 随LPS作用时间的延长，脾损伤逐渐加重。动脉周围淋巴鞘细胞碎片及TUNEL阳性细胞增多，电镜观察可见到凋亡的淋巴细胞。而人参组细胞损伤明显减轻。Bcl-2的表达随着LPS作用时间的延长而减少，Fas，FasL则增强。人参提取物主要阻止Bcl-2表达减少。结论 人参提取物对LPS脾细胞损伤有保护作用，其作用机制与增强Bcl-2表达有关。     

银杏叶提取物对缺氧复氧诱导大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的保护作用

应用原代分离培养的Wistar胎鼠大脑皮层神经细胞缺氧复氧模型。研究银杏叶提取物对神经细胞凋亡的抑制作用。方法：采用流式细胞术检测DNA含量及凋亡细胞百分率。原位末端标记法检测DNA断裂;光镜及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：银杏叶提取物能改善神经细胞亚微结构的变化。减少凋亡细胞数,使缺氧复氧诱导神经细胞凋亡百分率明显下降。结论：银杏叶提取物对缺氧复氧所引起的胎鼠大脑皮层神经细胞凋亡有明显抑制作用。     

缺氧复氧时培养的大脑皮质神经细胞一氧化氮动态变化及银杏叶提取物的调节作用

本研究用原代混合培养的 Wistar胎鼠大脑皮质神经细胞 ,给予不同时间的缺氧复氧 ,观察其一氧化氮的代谢中间产物亚硝酸盐的动态变化以及诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍和银杏叶提取物对一氧化氮的调节作用。结果表明 :缺氧复氧可造成培养大鼠的大脑皮质神经细胞一氧化氮双相升高。即 :在缺氧早期 (缺氧 2 h)可见一氧化氮一过性升高 ,然后很快恢复至正常水平 ;在缺氧 8h、复氧 18h后可见第二次一氧化氮升高。于缺氧前 1h在细胞培养上清液中分别加入氨基胍 (0 .5 m mol/L)和银杏叶提取物 (5 0 μg/ml) ,发现氨基胍可有效地抑制缺氧复氧晚期培养的大鼠大脑皮质神经细胞一氧化氮升高 ,但不能抑制缺氧早期一氧化氮的产生 ;而银杏叶提取物可有效地抑制缺氧复氧诱导的一氧化氮双相升高。提示 :在混合培养的胎鼠大脑皮质神经细胞缺氧复氧损伤模型中 ,一氧化氮的双相升高是由不同亚型的一氧化氮合酶所介导 ,其早期升高可能为神经元型一氧化氮合酶活性上调所致 ,而其晚期升高则是诱导型一氧化氮合酶活性增强的结果 ;银杏叶提取物可抑制缺氧复氧时神经元型和诱导型一氧化氮合酶的活性从而降低一氧化氮的产生而完成其神经保护作用