Retroviral vector containing human p16 gene and its inhibitory effect on Bcap -37 breast cancer cells

目的　研究p16基因对肿瘤细胞生长抑制及细胞周期阻滞作用。方法　将p16cDNA插入逆转录病毒载体pLXSN构建成p16基因逆转录病毒重组体pLp16SN。利用基因转染方法 ,将pLp16SN及pLXSN导入逆转录病毒包装细胞系PA317细胞 ,获得逆转录病毒。用逆转录病毒感染Bcap 37乳腺癌细胞 ,经G4 18筛选获阳性克隆。利用Northern和Westernblotting方法检测p16基因的表达。检测转基因细胞的生长速度 ,细胞周期及裸鼠成瘤等细胞生物学行为的改变。结果　Northern及Westernblotting显示转染p16基因的Bcap 37细胞p16基因mRNA及蛋白质表达明显增高。此细胞较未转染基因的Bcap 37细胞和转染空载体的Bcap 37细胞生长速度慢 ,G1期细胞比率增高 ,裸鼠接种成瘤体积小。结论　p16基因高表达能够抑制乳腺癌细胞Bcap 37的生长 ,并阻滞细胞从G1期进入S期     

脂多糖介导的血管平滑肌细胞血红素

目的:研究脂多糖(LPS)作用下的血管平滑肌细胞血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,并探讨HO/一氧化碳(CO)调节通路在内毒素性血管调节功能障碍中的作用。方法:10mg/L、30mg/L及50mg/L的LPS与培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)共同孵育6h,以及10mg/LLPS与VSMC共同孵育9h和18h。分别观察细胞丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活性、台盼蓝染色法记录VSMC蓝染率的变化;Northern杂交测HO-1mRNA表达。结果:VSMCHO-1mRNA表达随LPS浓度的增大而增加,LPS50mg/L时HO-1mRNA表达比对照高176.7%;低剂量LPS(10mg/L)诱导VSMCHO-1mRNA的表达量随诱导时间的延长而增加,18h组HO-1mRNA的表达量比对照高195.6%。只有当LPS浓度增加至50mg/L及10mg/L孵育18h时,细胞台盼蓝摄取率、MDA含量与LDH活性明显增加、细胞出现损伤。结论:LPS可诱导VSMCHO-1mRNA的表达且具有浓度依赖性和时间依赖性,HO/CO可能为介导内毒素性血管平滑肌功能调节障碍的重要通路。     

含人铜锌SOD基因逆转录病毒重组体的构建

构建含人铜锌ＳＯＤ基因逆转录病毒重组体。通过两步克隆将编码人铜锌超氧化物歧化酶基因片断从表达载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌ中切下，定向插入逆转录病毒载体ＸＭ－６上，以限制性内切酶切分析法判定插入是否正确。限制性内切酶谱分析与理论计算相符。含人铜锌ＳＯＤ基内逆转录病毒重组体和构建成功，为今后进行心肌保护，抗动脉粥样硬化及抗衰老的基因治疗等开辟了广阔前景。     

酸性液对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

心肌缺血导致心肌细胞严重的酸中毒，复灌后细胞内外ｐＨ值的急剧变化（即“ｐＨ反常”）在心肌损伤中起重要作用。我们的实验资料表明，用酸性液复灌对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤有保护作用［１］。本实验进一步分离成年大鼠心肌细胞并复制缺氧复氧损伤模型，观察复...     

酸性液对大鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用

心肌缺血导致心肌细胞严重的酸中毒,复灌后细胞内外pH值的急剧变化(即"pH反常")在心肌损伤中起重要作用.我们的实验资料表明,用酸性液复灌对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤有保护作用[1].本实验进一步分离成年大鼠心肌细胞并复制缺氧-复氧损伤模型, 观察复氧时用不同pH值孵育液对缺氧-复氧损伤的影响.     

热休克诱导HO-1基因在乳鼠心肌细胞中的表达 及其抗氧自由基损伤作用

目的 :观察血红素加氧酶 - 1 (ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ ,ＨＯ - 1 )基因在热休克处理的乳鼠心肌细胞中的表达及其抗氧自由基损伤的作用。方法 :取生后 2～ 3ｄ的Ｗｉｓｔａｒ鼠若干 ,雌雄不限 ,摘取心脏 ,剪碎至 1ｍｍ× 1ｍｍ× 1ｍｍ大小 ,胰酶消化法分离、培养乳鼠心肌细胞 ,一周后 ,将细胞分别在 42℃热休克处理 0 5ｈ ,1ｈ ,3ｈ ,5ｈ ,提取细胞总ＲＮＡ ,以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术观察ＨＯ - 1基因在乳鼠心肌细胞中的表达及其时间依赖性关系。同时以黄嘌呤 /黄嘌呤氧化酶氧自由基发生系统作用于热休克处理 5ｈ的乳鼠心肌细胞 ,…     

氯高铁血红素诱导HO-1基因在乳鼠心肌细胞中的表达 及其细胞保护作用

目的 :观察血红素加氧酶 - 1 (ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ ,ＨＯ - 1 )的底物氯高铁血红素诱导培养的乳鼠心肌细胞ＨＯ - 1基因表达的规律 ,以及该基因的表达对心肌细胞过氧化损伤的作用。方法 :取生后 2～ 3ｄ的Ｗｉｓｔａｒ鼠若干 ,雌雄不限 ,摘取心脏 ,剪碎至 1ｍｍ× 1ｍｍ× 1ｍｍ大小 ,胰酶消化法分离、培养乳鼠心肌细胞后 ,以不同浓度的氯高铁血红素孵育 1ｈ ;以及在 2 0 μｍｏｌ/ｍＬ浓度下分别孵育不同时间 ,提取细胞总ＲＮＡ ,以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术观察氯高铁血红素诱导ＨＯ - 1基因在乳鼠心肌细胞表达的剂量依赖性和时间…     

左旋硝基精氨酸诱导的大鼠高血压主动脉血色素加氧酶mRNA表达及活性改变

 目的 研究血色素加氧酶(Heme Oxyenase,HO)在左旋硝基精氨酸(Nω-Nitro-arginine,L-NNA)诱导的大鼠高血压模型主动脉中的改变及HO底物血色素-左旋-赖氨酸(Heme-L-Lysinate,HLL)的影响.方法 对Wistar大鼠每日分别给予L-NNA 15 mg/kg、L-NNA 15 mg/kg并每日加HLL 15 mg/kg,观察大鼠动脉血压,主动脉HO活性、HO-1 mRNA表达的变化.结果 L-NNA可明显诱导大鼠血压升高,在第4周末,与对照组相比,血压平均升高59%(P<0.05).同时加用HLL组血压未见升高.大鼠主动脉HO活性分别增加31.2%和55.2%(与对照组比,P<0.05),HO-1mRNA表达分别增加31.8%和148.0%(均为P<0.05).同时注射HO底物血色素和L-NNA时,主动脉平滑肌HO活性及HO-1 mRNA表达较单纯L-NNA组增加更为明显.结果 表明,HO/CO通路在L-NNA诱导的大鼠高血压形成过程中可呈代偿性上调状态,HO活性的增加是可诱导的HO-1 mRNA表达增加的结果,加用HO底物可降低升高的血压.结论 HO/CO通路参与血管张力的调节,对L-NNA造成的高血压发生发展过程中NOS/NO系统的抑制有代偿作用.     

LPS作用下的乳鼠心肌细胞HO-1的表达与作用

改善心功能是脓毒血症治疗上的关键措施之一。我们此前在应用盲肠结扎穿孔法复制的大鼠腹膜炎脓毒血症模型上观察到 ,脓毒血症时心肌可诱导型血红素加氧酶 (ＨＯ - 1 )表达增加 ,且可能参与心功能的代偿。但因脓毒血症是由内毒素 (ＬＰＳ)诱发的、由众多炎性细胞因子参与的复杂病理过程 ,心脏ＨＯ- 1表达增多是由ＬＰＳ直接所致还是由其它继发因素所为尚不清楚。目的 :通过观察ＬＰＳ对体外培养的乳鼠心肌细胞 (ＮＲＣＭ)ＨＯ - 1ｍＲＮＡ表达的影响 ,进一步探讨ＨＯ/ＣＯ通路在内毒素性心功能变化中的作用机制。方法 :用 1 0 μｇ/ｍＬ、30…