CD20抗原模拟表位的筛选

目的：筛选CD20分子的模拟表位肽,构建针对CD20分子的治疗性疫苗,以期为淋巴瘤以及其它B细胞相关性疾病的治疗提供新的方向.方法：利用噬菌体随机呈现肽库筛选技术,以人淋巴细胞分化抗原CD20 mAb Rituximab为靶点,筛选CD20分子的模拟表位肽.通过ELISA方法检测筛选出的阳性噬菌体与Rituximab的特异性结合,并以竞争性结合实验检测筛选出的阳性噬菌体与Raji细胞表面的CD20分子竞争结合Rituximab的能力.最后以Sanger双脱氧链终止法测定DNA序列,推断其氨基酸序列.结果：成功筛选出针对CD20 mAb Rituximab的阳性噬菌体,获得了CD20分子的模拟表位肽QDKLTQWPKWLE.获得的阳性噬菌体能够与Rituximab特异性结合,并且表达该表位的噬菌体可以竞争性抑制Rituximab与天然CD20分子的结合.结论：CD20分子的抗原表位肽QDKLTQWPKWLE能够与mAb Rituximab特异性结合,与天然CD20分子竞争性结合mAb Rituximab,并具有潜在的应用价值.     

HER-2蛋白疫苗的制备及在小鼠中诱导的抗体应答

目的：制备HER-2抗原疫苗．方法：采用RT—PCR方法从HER-2＋SKBR3细胞株中获得HER-2基因胞外段编码区cDNA,构建pQE-30-HER-2原核表达载体,在大肠杆菌中表达HER-2胞外区蛋白．Ni—NTA柱亲和层析纯化后,梯度尿素复性,Western Blot鉴定．用获得的蛋白免疫小鼠,检测重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答．结果：构建的pQE-30-HER-2质粒经酶切和DNA测序分析,结果表明该基因的序列与设计的序列完全相同．构建的质粒转化DI-IS（x后经IPTG诱导表达,SDS—PAGE分析,该重组蛋白以包涵体形式表达,且与mAbHerceptin有较好的结合活性．包涵体用Ni—NTA柱亲和层析纯化后,梯度尿素复性,最大限度的获得了可溶性的HER-2胞外区蛋白．用重组蛋白免疫小鼠,得到了较高的抗体滴度．结论：成功制备了HER-2蛋白疫苗并诱导出较高抗体滴度,为下一步工作打下基础．     

Myostatin基因疫苗动物免疫效果的初步研究

目的:检测Myostatin基因疫苗的免疫效果,观察其对免疫动物的影响,为Myostatin基因疫苗的应用提供实验研究.方法:以Myostatin基因疫苗pVAC-TT-Ms免疫小鼠,ELISA法测定其免疫小鼠血清的抗体滴度,通过全自动生化分析仪检测血清指标.以组织化学染色(HE)染色检测Myostatin基因疫苗对免疫小鼠骨骼肌的影响.利用Scion Image 4.02 分析Myostatin基因疫苗对免疫小鼠肌纤维横截面积的影响.结果:基因疫苗Myostatin能够诱导小鼠产生针对Myostatin的抗血清.与正常对照组比较,基因疫苗pVAC-TT-Ms免疫的动物平均体重增加了9.8%,股四头肌、腓肠肌和胸大肌分别增加了24.1%、10.9%和20.3%.结论:基因疫苗Myostatin能够诱导小鼠产生针对Myostatin的特异性中和抗体.Myostatin基因疫苗免疫的动物体重增加,肌细胞有肥大现象,肌肉质量明显增加.