腺病毒编码人TRP2修饰DC诱发抗小鼠黑色素瘤免疫的研究

目的比较腺病毒载体(Ad)介导人和小鼠酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosinase-relatedpro-tein2,TRP2)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(BM-DC)诱发抗小鼠黑色素瘤免疫的差异。方法Ad编码人或小鼠TRP2(AdhTRP2或AdmTRP2)体外感染小鼠BM-DC并体内皮下免疫C57BL/6小鼠,7d后取出被免疫小鼠脾细胞行体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤试验(invivoCTL)和细胞内IFN-γ染色(ICS)分析CTL的杀伤活性和IFN-γ的产生;或给免疫后小鼠皮下接种小鼠B16.F10黑色素瘤细胞,观察荷瘤小鼠的成活情况。结果invivoCTL和ICS分析显示,AdhTRP2/BM-DC免疫小鼠,其6hCTL杀伤率为(98.7±1.2)%,IFN-γ产生的CD8+T细胞占总CD8+T细胞的(1.25±0.21)%;而AdmTRP2/BM-DC免疫的小鼠,其6hCTL杀伤率和产生IFN-γ的CD8+T细胞比例分别为(28.6±6.3)%和(0.24±0.06)%。荷瘤试验表明,AdhTRP2/BM-DC免疫小鼠后1周皮下接种106B16.F10细胞,观察3个月100%的小鼠无瘤生长;而接种5×104B16.F10细胞至AdmTRP2/BM-DC免疫1周的小鼠,3个月后小鼠成活率仅为40%。结论Ad介导异种(人)TRP2较自身(小鼠)TRP2修饰的BM-DC更为有效地打破肿瘤免疫耐受、诱导强烈的抗黑色素瘤免疫反应,是一种高效的以DC为基础的肿瘤疫苗。     

经皮射频毁损治疗原发性肝癌

目的 评价射频毁损（RFA）治疗原发性肝癌（HCC）的近期疗效、安全性及并发症。方法 采用RF－2000型射频治疗仪,在B超引导下经皮治疗78例HCC患者。结果 78例患者（肝功能Child分级：A级58例,B级14例,C级6例）的110个肿块（平均直经6.1cm,1.9-13.7cm）共进行了105次治疗,平均治疗1．3次和6．3个点,平均随访9．2个月（1－16个月）。患者术后肝功能轻度损害,2周左右恢复正常。最常见的不良反应为低热。6例（7．7％）出现并发症,未发生与RFA治疗直接相关的死亡。43例（55．1％）复发,平均发生在治疗后6．1个月。多因素相关分析显示,原位复发与肿块直径呈显著正相关（P＝0．0001）。无原位复发者其治疗点数与肿块直径存在线性关系（r=0.77216,P=0.0001),回归方程式为y=-1.794 1.733x。结论 RFA是一种治疗HCC安全有效的非手术方法。     

树突状细胞与肿瘤免疫治疗的现状

恶性肿瘤严重威胁着人类的健康,且发病年龄趋向年轻化,以外科手术,辅助放、化疗及免疫治疗等综合治疗成为肿瘤治疗的发展方向.肿瘤的主动免疫治疗一直是肿瘤治疗研究的热点,其基本理论依据是通过调节或增强机体固有的内在性防御机制来抑制或杀伤肿瘤细胞,或通过抑制肿瘤细胞转化、促进恶性细胞分化来降低肿瘤的恶性程度.     

紫外线诱导体外培养的LOVO、HT-29细胞的凋亡

目的研究紫外线照射体外培养的大肠癌ＬＯＶＯ和ＨＴ┐２９细胞后，诱导这两株大肠癌细胞系发生凋亡的作用。方法紫外线照射两株大肠癌细胞系后２４～３６ｈ，通过琼脂糖凝胶电泳、ＨＥ染色和流式细胞仪检测两株细胞发生凋亡的情况。结果两株大肠癌细胞在形态学上出现典型的细胞核固缩、碎裂，琼脂糖凝胶电泳显现特征性的“梯状”带，流式细胞仪分别在２４和３６ｈ出现亚二倍体峰。结论紫外线具有杀灭癌细胞的作用，其机制与诱导细胞凋亡有关；其方法简单、易行，可作为研究细胞凋亡的较好的体外模型。     

硫氧还蛋白还原酶2基因抗砷作用

目的 研究硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase,TrxR2)基因在抗砷细胞(As-ECV304)中的抗砷作用.方法 蛋白印迹法(Western Blot)检测As-ECV304和对照组细胞TrxR2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞周期分布,化学合成TrxR2基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染As-ECV304细胞,Western Blot验证干扰效率,细胞急性毒性试验检测细胞抗砷性的改变.结果 As-ECV304细胞中TrxR2蛋白水平较对照组细胞高,As-ECV304细胞G0/G1期细胞所占比例高于对照细胞.3个siRNA中有一个能特异性抑制TrxR2基因表达,干扰组细胞的生存率低于阴性对照组和未干扰组,3组细胞的半数抑制率IC50>分别为9.13,15.88和18.52 μmol/L.结论 siRNA干扰TrxR2基因表达后能明显降低抗砷细胞的抗砷性,提示该基因在细胞抗砷机制中发挥了重要作用.     

5和5/F35型腺病毒载体对人骨髓间充质干细胞转染效率的比较

背景：在以人骨髓间充质干细胞为基础的基因治疗中,提高腺病毒载体对人骨髓间充质干细胞的转染效率尤为重要。 目的：对比观察5和5/F35型腺病毒载体对体外培养的人骨髓间充质干细胞的转染效率。 设计、时间及地点：对比观察,于2008-03/10在解放军北京军区总医院血液科实验室完成。 材料：骨髓来源于解放军北京军区总医院血液科异基因造血干细胞移植中健康供者,均无造血系统疾病。 方法：采用密度梯度离心和贴壁筛选的方法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第3代后用流式细胞仪检测人骨髓间充质干细胞表型;按1×104/孔密度接种于24孔板,细胞贴壁后分别换用成骨、成脂诱导液培养,以碱性磷酸酶、油红O染色检测其分化特性。用不同滴度编码增强型绿色荧光蛋白基因的腺病毒载体Ad5增强型绿色荧光蛋白和Ad5/F35增强型绿色荧光蛋白按5,20,100,400 感染复数转染体外培养的人骨髓间充质干细胞,荧光显微镜下观察。 主要观察指标：流式细胞仪检测增强型绿色荧光蛋白阳性表达率,并用锥虫蓝拒染法检测不同病毒滴度感染后人骨髓间充质干细胞活细胞比例。 结果：人骨髓间充质干细胞表面CD166、CD29、CD73、CD31、CD45、CD34和CD14阳性率分别为95.08%、99.53%、72.26%,1.50%,2.02%,3.80%和4.94%。人骨髓间充质干细胞成骨诱导后14 d碱性磷酸酶染色为阳性,成脂诱导后14 d油红O染色均为阳性。Ad5增强型绿色荧光蛋白和Ad5/F35增强型绿色荧光蛋白按5,20,100,400 感染复数分别感染人骨髓间充质干细胞,2 d后前者增强型绿色荧光蛋白阳性率分别为(0.72±0.14)%,(4.97±0.46)%,(9.80±3.43)%和(45.53±6.32)%;后者增强型绿色荧光蛋白阳性率分别为(24.31±10.55)%,(55.19±13.73)%,(87.68±9.5)%和(96.57±5.64)%。在5,20,100的感染复数,各组细胞存活率均在95%以上。在400的感染复数,细胞存活率明显降低,在90%以下。 结论：Ad5/F35对体外培养的人骨髓间充质干细胞的转染效率明显优于Ad5载体。     

KSHV潜伏和裂解感染机制的研究进展

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是卡波氏肉瘤(kapois's sarcoma,KS)的病原,并与PEL、MCD等多种淋巴增殖紊乱性疾病相关。其生命周期可分为潜伏感染和裂解感染两个阶段。在潜伏感染阶段,KSHV的病毒基因表达受到严格调控,只有少数病毒潜伏相关基因的持续表达,潜伏感染对病毒长期持续感染复制是必不可少的。在裂解复制阶段,病毒基因绝大部分复制表达,并包装产生新的感染性病毒颗粒。现就KSHV病毒潜伏感染和裂解感染机制的研究进展作一综述。     

组蛋白去甲基化酶JMJD3 促进弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞的干性

目的：探讨组蛋白去甲基化酶JMJD3（jumonji domain-containing protein 3）对弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL）细胞干性的影响。方法：利用TCGA数据库中DLBCL 患者的临床资料,分析JMJD3 的表达水平与DLBCL患者总生存率的关系。应用脂质体转染方法分别将对照质粒（pCMV）和JMJD3 表达质粒（pCMV-JMJD3）转染到ABC和GCB亚型DLBCL细胞中,用RT-PCR和qPCR检测转染细胞中JMJD3、ALDH1、OCT4 和SOX2 mRNA表达水平,用流式细胞术检测细胞中ALDH1 酶活性,用Western blotting 检测细胞中OCT4 和SOX2 蛋白的表达水平。通过基因集富集分析法（gene set enrichment analysis,GSEA）分析高表达JMJD3 的DLBCL患者的基因集富集情况。结果：患者预后分析结果显示,高表达水平的JMJD3 与DLBCL患者的不良预后有关（P<0.05）,但多因素分析结果显示JMJD3 的表达水平不是DLBCL患者预后的独立影响因素（均P>0.05）。pCMV-JMJD3 转染后细胞中JMJD3 表达显著增加,同时导致DLBCL细胞中ALDH1 mRNA水平和酶活性以及OCT4 和SOX2 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高（P<0.05 或P<0.01）。GSEA分析结果显示,高表达JMJD3 的DLBCL患者样本富集于Wnt/β-catenin 信号通路基因集（P<0.05）。结论：JMJD3 具有促进DLBCL细胞干性的作用,其可能是DLBCL患者潜在的治疗靶点。     

共享决策支持下家长参与护理对NICU早产儿母乳喂养率、生长发育的影响

目的 观察共享决策支持下家长参与护理对新生儿重症监护病房(NICU)早产儿母乳喂养率、生长发育的影响.方法 选择本院2018年1月至2019年9月出生的114例早产儿作为研究对象,按随机数字表法分为2组,各57例.对照组行常规护理干预,观察组行共享决策支持下家长参与护理干预.比较干预结束后3月时,母乳喂养指标(母乳喂养...     

氨磷汀治疗骨髓增生异常综合征临床观察

目的观察氨磷汀治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效。方法对9例MDS患者给予氨磷汀500 mg静点1次/d,每周连用5 d,共4周。结果9例患者血液学指标均获得不同程度的改善,其中6例粒系明显改善,4例红系改善,3例血小板有改善,共7例输血间隔延长;主要毒副作用是恶心呕吐等胃肠道反应,但患者均能耐受。结论氨磷汀是一种有效治疗MDS方法,能改善临床表现、减少感染和出血,有利临床缓解。