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【目的】构建表达人细胞周期蛋白Dl及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段,克隆到pGEM-T easy载体上。测序鉴定后切下相应的片段,连接到表达载体pET-22b( )上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3),使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定表达蛋白。【结果】 用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌,Western blot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】 本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体,后两在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白. 相似文献
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番荔枝内酯诱导白血病细胞凋亡的机理 总被引:6,自引:1,他引:6
目的 研究番荔枝内酯(squamocin)诱导白血病细胞凋亡的机理。方法 DNA凝胶电泳法、荧光染色等检测细胞凋亡。试剂盒检测caspase-3的活性。Westernblot法检测PARP和caspase-3的剪切片断和磷酸化的SAPK/JNK量的变化。结果 Squamocin处理HL-60细胞后,导致染色质浓缩、片断化,DNA梯形条带出现,完整PARP的116ku条带逐渐减少,而85ku的片断逐渐增加,caspase-3酶的活性也增加。Caspase-3的特异性抑制剂DEVD-CHO预处理HL-60细胞,可阻止squamocin诱导的DNA片断化、PARP的剪切和细胞死亡。Squamocin激活HL-60细胞中SAPK/JNK。结论 Squamocin诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,squamocin激活caspase-3可能与SAPK/JNK的激活相关 相似文献
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目的探讨半合成紫草萘醌化合物SYUNZ-4对U937细胞的诱导凋亡作用及机制。方法锥虫蓝拒染实验和MTT法分析SYUNZ-4对U937细胞的生长抑制作用;DNA电泳、荧光显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果SYUNZ-4抑制U937细胞生长并呈时间和浓度依赖性,48 h的半数抑制浓度(IC50)为3.62μg/ml;经SYUNZ-4处理的U937细胞可见DNA梯形条带、细胞核浓缩和凋亡小体;6μg/ml SYUNZ-4处理U937细胞6,12,24 h,细胞凋亡率分别为(12.2±6.5)%、(25.3±11.4)%和(56.2±6.5)%,对照组凋亡率为(2.1±0.8)%(P<0.05);SYUNZ-4可活化U937细胞中的caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP,上调Bax、P21、P27、Fas和FasL的表达,下调Bcl-xL水平,对Bcl-2、BID和P53表达无影响。结论SYUNZ-4在体外可诱导U937细胞凋亡。caspase家族蛋白及其相关信号分子参与了凋亡的调节。 相似文献
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目的:观察茶多酚(TP)与亚硒酸钠(sodium selenite)混合物一次给予小鼠的急性毒性反应和死亡情况.方法:一次灌胃(ig)给药,观察14d.结果:测得TP单用一次ig的LD50为2914.45mg/kg;亚硒酸钠单用一次ig的LD50为33.54mg/kg;当TP与亚硒酸钠按7997.3mg∶2.7mg比例做成混合物,测得混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg,其中亚硒酸钠的含量为0.85mg/kg.结论:茶酚硒混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg. 相似文献
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THEANTICANCEREFFECTANDANTI-DNATOPOISOMERASEIIEFFECTOFEXTRACTSOFCAMELLIAPTILOPHYLLACHANGANDCAMELLIASINENSISXieBinsfen;谢冰芬;LiuZ... 相似文献
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目的研究DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(DMTCCI)诱导人粒细胞性白血病HL-60细胞凋亡并探索其机制。方法分别采用不同浓度的DMTCCI处理培养于RPMI-1640培养基的HL-60细胞。采用MTT法检测DMTCCI对HL-60细胞的生长抑制作用。采用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡。采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法观察凋亡相关蛋白survivin, Bcl-xL, Bad, Bax, Bcl-2, caspase-9, caspase-3, caspase-6, PARP, DFF45和lamin B的表达。采用ApoAlert Caspase-3分析试剂盒检测caspase-3的活性。结果DMTCCI具有抑制人白血病HL-60细胞增殖的作用,其IC50值为0.24 μmol·L-1。流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,DMTCCI可诱导HL-60细胞凋亡。在经DMTCCI处理的HL-60细胞中,survivin和Bcl-xL蛋白的表达水平下调,Bad和Bax蛋白的表达水平上调,Bcl-2蛋白的表达水平无变化,caspase-9,caspase-3,caspase-6,PARP,DFF45和lamin B被分别裂解,产生相应裂解产物。在HL-60细胞中,caspase-3的活性在1 μmol·L-1 DMTCCI处理3 h时明显升高,在处理12 h时达到最高峰。结论DMTCCI可抑制人白血病HL-60细胞的增殖并诱导其发生细胞凋亡。Bcl-2家族蛋白、survivin和caspases家族蛋白可能参与了上述诱导HL-60细胞凋亡的过程。 相似文献
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茶多酚对人鼻咽癌细胞株CNE_2细胞DNA损伤和细胞周期的影响 总被引:11,自引:0,他引:11
目的 观察茶多酚(tea polyphenols, TP) 对人鼻咽癌细胞株CNE2 细胞DNA 的损伤作用和细胞周期的影响。方法 用琼脂糖凝胶电泳方法测定TP对细胞DNA的断裂作用;用流式细胞术(FCM) 观察TP对CNE2 细胞周期的变化及其诱导凋亡。结果 TP可引起CNE2 细胞DNA 断裂、其断裂程度随剂量的增加和作用时间的延长而增强。TP不同浓度和不同作用时间可干扰CNE2 细胞在周期中的进程,使G1 期细胞明显增多,S期细胞减少,细胞分裂增殖指数(PI)亦随之降低。同时,TP可诱导CNE2 细胞凋亡,其凋亡率随TP浓度的增加和作用时间的延长在逐渐增加。结论 TP1998 12 04 收稿,1999 07 31 修回* 国家自然科学基金资助课题,No 39370800作者简介:谢冰芬,女,副研究员,硕士生导师,研究方向为肿瘤药理可引起人鼻咽癌细胞株CNE2 细胞的DNA 断裂,使细胞停滞于G1 期,阻止G1 期细胞进入S期;同时亦可诱导细胞凋亡,这些结果可能为TP的抗瘤作用提供理论依据 相似文献
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新酮醛是中山医科大学化学教研室合成。它是临床上用于抗炎的鱼腥草素和新鱼腥草素的同系物,其碳链略短。我校桂治宁等应用~3H-TdR体外参入法观察到新酮醛对小鼠肝癌细胞的DNA合成有明显抑制作用。对小鼠肿瘤(S—180,L_2,Hep ESC)有边缘抗瘤活性。合并用药能提高穿心莲和环磷酰胺的抗瘤作用。对大鼠没有明显的蓄积性毒性,对狗的亚急性毒性试验除引起血红蛋白值降低外,对其他脏器未见明显毒性。对小鼠免疫功能未见明显影响。 相似文献
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