红景天属植物DALP反应体系的建立

目的 利用直接扩增片段长度多态(DALP)这一新分子标记技术建立一套稳定的红景天属植物的DALP反应体系。方法 以红景天基因组DNA为模板,对DALP反应程序的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果 建立了一套稳定性强、可靠性高的DALP应用反应体系;经过大量重复性实验,反应体系为20μL,Mg2 浓度为2.5 mmol/L,dNTPs浓度为1.25 mmol/L,模板DNA的量为60 ng,5 pmol/L选择性引物1μL,5 pmol/L反向引物3 μL,引物浓度比为1:3,Taq酶2 U。反应过程为:95℃预变性5 min、94℃变性30 s、50℃退火30 s、72℃延伸1 min;30个循环,再72℃延伸10 min,完成整个PCR反应。结论 该体系可有效地应用于红景天属药材的分类鉴定和地道性鉴定。     

石斛属4种植物的AFLP分析

目的 研究石斛属植物DNA指纹图谱,初步探讨AFLP分子标记技术在石斛地道性鉴别上的应用。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对石斛属内石斛组4个种和一个外类群种进行基因组DNA多态性分析。结果从64对引物组合中选出5对引物组合构建了5个种的DNA指纹图谱。通过聚类分析,石斛属4种植物聚成一个大类,彼此关系得到了很好的分辨,并获得bootstrap校验的有力支持。结论AFLP技术可用于药用石斛DNA指纹图谱研究。     

云南桃儿七遗传多样性的DALP分析

目的 进行药用植物桃儿七Sinopodophyllum hexandrum的遗传多样性研究,为桃儿七资源的保护和开发利用提供分子遗传理论基础。方法 对6个桃儿七居群进行DALP分析,利用PopGene 1.31软件分析遗传多样性相关数据,UPGMA方法聚类,结合Treeview软件生成树状图。结果 筛选5对引物组合,扩增共产生150条DNA片段,其中104条谱带具有遗传多态性,占69.33%,平均每组引物扩增所得多态条带为20.8,6个居群平均多态百分率为14.22%。6居群总的观察等位基因数Na为1.693 3,平均1.142 2;总的有效等位基因数Ne为1.417 1,平均1.083 8;基因多样性指数H为0.244 3,平均0.048 8;总的Shannon多样性指数I为0.364 3,平均0.073 0;居群总的基因多样性Ht为0.244 3,居群内基因多样性Hs为0.048 7。基因分化系数Gst为0.800 5,即遗传变异有80.05%发生在居群间,19.95%发生在居群内,居群每代迁移数Nm为0.124 6。结论 桃儿七居群间存在较大的遗传分化,基因流受到阻碍,这与桃儿七的繁育系统和生存环境紧密相关。     

6个不同产地铁皮石斛功效成分的分析研究

目的 对比6个产地铁皮石斛功效成分的差异,以期为铁皮石斛进一步开发利用以及石斛行业的质量规范提供试验数据支撑。方法 通过高效液相色谱法和紫外分光光度法分别测定不同产地3年生铁皮石斛的干燥茎中多糖、D-甘露醇、总黄酮、总皂苷、总生物碱、核苷类成分及甾族化合物等多种化学成分,并对6个产地进行Q-聚类分析。结果 浙江省乐清市双峰乡所产石斛的多种功效成分相对较高,聚类结果显示昆明市官渡区所产石斛与文山广南县最为接近,德宏州盈江县石斛与其他产地相距最远。结论 铁皮石斛功效成分众多,开发潜力极大,但各地区材料功效成分差异明显,而这些差异与地理位置关联不大,推测种质资源与人工繁育体系影响更大,说明急需统一的质量标准约束。     

红景天属植物DALP反应体系的建立

目的 利用直接扩增片段长度多态(DALP)这一新分子标记技术建立一套稳定的红景天属植物的DALP反应体系。方法 以红景天基因组DNA为模板,对DALP反应程序的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果 建立了一套稳定性强、可靠性高的DALP应用反应体系;经过大量重复性实验,反应体系为20μL,Mg2 浓度为2.5 mmol/L,dNTPs浓度为1.25 mmol/L,模板DNA的量为60 ng,5 pmol/L选择性引物1μL,5 pmol/L反向引物3 μL,引物浓度比为1:3,Taq酶2 U。反应过程为:95℃预变性5 min、94℃变性30 s、50℃退火30 s、72℃延伸1 min;30个循环,再72℃延伸10 min,完成整个PCR反应。结论 该体系可有效地应用于红景天属药材的分类鉴定和地道性鉴定。     

珍稀濒危药用植物金铁锁研究进展

金铁锁属石竹科金铁锁属,为单属单种多年生草本植物。由于其根部具有较高的药用价值,遭到制药企业大规模采挖,目前野生居群呈间断分布,居群大小和数量逐年减少,濒危程度日趋严重。文章总结综述近年来金铁锁在分类与系统学地位、生态地理分布与生活史、化学成分与药理作用、胚胎与繁殖生物学、遗传多样性与遗传结构方面的最新研究进展,为更全面地探讨金铁锁的濒危机制、制定合理的保护措施、以及规模化的GAP种植提供参考。     

虫草属EST-SSR标记系统的建立研究

目的:通过球孢虫草、蛹虫草EST设计EST-SSR引物,建立虫草属EST-SSR标记系统.方法:从NCBI公共数据库下载获得虫草EST,利用Sequece Seiners 1.2软件去除冗余序列并设计引物,进行PAGE电泳.结果:通过去除EST总序列中低质量的和冗余的序列后,得到全长为2 953 173 bp的4 556条无冗余球孢虫草EST.从中发掘出718个EST-SSR,分布于616条EST中,出现频率是15.8％.平均分布频率是每4 096 bp出现1个,三核苷酸重复序列有419个,是出现最多的重复类型.蛹虫草EST去冗余后得到1 363条无冗余EST,共含有1 117个EST-SSR,出现频率为81.95％,出现最多的重复类型是A核苷酸重复.根据球孢虫草EST-SSR序列,设计合成50对引物,有扩增产物的引物为34对,占总设计引物数的68％.根据蛹虫草EST-SSR,设计合成40对引物,有扩增产物的引物为39对,占总设计引物数的97.5％.基于SSR标记进行聚类分析,7种虫草无性型均能分开,且分为4支.结论:虫草属EST-SSR出现频率较高、类型较丰富、多态性潜能较高,具有较高的利用价值.球孢虫草和蛹虫草EST开发的SSR标记在虫草属有较好的转移性与通用性,可以很好的应用于虫草种间遗传关系的研究.应用虫草物种EST建立分子标记是一条简便而又有效的途径.     

一株分离自新疆细虫草菌核的弯颈霉鉴定及抑菌研究

目的：开发利用新疆细虫草资源,为新疆细虫草相关真菌的研究和开发利用提供基础资料。方法：研究从新疆细虫草菌核中分离得到一种白色菌株,编号为SFYT002,采用形态学观察和ITS以及18SrDNA测序,在GenBank比对,进行系统进化树分析,并采用滤纸片法研究其体外抗菌作用。结果：菌株SFYT002主要的特征为菌落白色棉绒状,瓶梗长在分枝的分生孢子梗上,瓶梗基部膨大,顶部急剧变细,部分颈部弯曲,孢子小且透亮,孢子有出芽现象,常形成聚集孢子头,分生孢子球形,亚球形至椭圆形。ITS和18SrDNA序列分析表明,弯颈霉属为单系发生,菌株SFYT002与膨大弯颈霉聚为一支。研究其抑菌作用表明,菌株SFYT002发酵液及其不同极性的提取物对4种常见致病菌,均有很强的抑制作用。结论：通过形态学和分子生物学特征将菌株SFYT002鉴定为膨大弯颈霉,具有较强的抑菌活性。     

云南金钗石斛居群DALP遗传变异研究

对云南7个金钗石斛居群和1个喇叭唇石斛居群,用5组DALP引物扩增得到140条清晰条带,其中102条为多态位点,多态比率72.86%,平均每组引物扩增所得多态条带为20.4。金钗石斛居群水平平均多态位点47.96%,多态位点在22.86%~68.57%;物种水平多态位点72.86%。DALP分析显示,金钗石斛物种水平的遗传多样性指数分别为PPB 72.86%,H 0.288 9,I 0.424 2;居群水平遗传多样性指数分别为PPB 47.96%,H 0.186 1,I 0.273 9。金钗石斛基因遗传分化系数G_st为0.338 6,即66.14%的遗传变异来自居群内,33.86%的遗传变异来自居群间,居群间存在较高水平的遗传分化。