从噬菌体肽库中筛选生长因子模拟肽的研究进展

生长因子通过膜受体可将胞外信号转导至胞内,现已发现一些小分子肽能够作为受体的配体模拟天然配体的生物学作用.以可溶性受体的纯化蛋白或转染了膜受体的完整细胞为靶标,人们从噬茵体肽库中筛选出多种模拟肽,对这些肽的序列和生物学功能进行分析,发现它们能够竞争受体与天然配体相结合,可作为生长因子受体的拮抗剂或激动剂.噬菌体展示技术的应用不仅为生物大分子间的结构和功能关系提供信息,而且为新药的研究提供了新思路.本文对从噬菌体肽库中筛选生长因子受体肽类拮抗剂或激动剂的研究进展作一综述.     

人截断型LBP基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

目的 构建人N端截断型脂多糖结合蛋白（tLBP)基因的杆状病毒表达载体,为后续的蛋白表达及其抗内毒素保护作用研究奠定基础。方法 采用PCR技术从人全长LBP基因cDNA中扩增长度为695bp的基因片段,经pGEM-T载体亚克隆筛选和序列分析后,应用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统,基因重组和外源基因转座分别构建转移质粒pFASTBACtLBP和穿梭质粒pBac-midtLBP。结果 经PCR、琼脂糖凝胶电泳、酶切分析及序列测定,所克隆的基因片段为700bp左右的tLBP,并证实其目的基因重组载体发生了特异转座和病毒重组。结论 本实验成功克隆了tLBP目的基因片段并构建其杆状病毒表达载体。     

基于骨架蛋白的噬菌体肽库研究

噬菌体展示肽库技术是研究蛋白质分子进化的理想工具，从选择合适的蛋白骨架入手，构建在此结构基础上的构象型肽库，结合高通量大规模的筛选技术，可以方便地获得具有新功能的蛋白质，这些新功能蛋白因具有高亲和力和高特异性，将有可能在许多生物技术领域中替代天然抗体。     

外周型苯二氮卓受体在大鼠各组织中相对含量的比较

使用〔~3H〕PK11195做为配体,比较大鼠组织中外周型苯二氮卓受体的相对含量,结果表明,大鼠各组织中受体密度的大小顺序为:肺>睾丸、脾、输精管、血小板、心>肾>肝>脑。这一观察有助于进一步研究外周型苯二氮卓受体的生理意义。     

昆虫防御素A的分子改造及其在噬菌体表面的展示

目的：实现对昆虫防御素A的分子改造及改造后分子的噬菌体表面展示，为进一步设计构象型肽库，研究分子间相互作用奠定基础。方法：分子改造包括以下内容；分子截短，突变碱性氨基酸，减少半胱氨酸的数目等。利用InsightⅡHomology系统对改造后分子结构进行预测。然后再将合成的改造蛋白基因插入到pCANTAB5E载体中，采用Western印迹鉴定该蛋白在噬菌体表面展示。结果与结论：模建结果显示改造后蛋白仍保持原有三维结构不变，并且成功实现了昆虫防御素分子在噬菌体表面的展示。     

人酸性成纤维细胞生长因子双抗体夹心测定方法

用纯化的人酸性成纤维细胞生长因子（ｈａＦＧＦ）免疫家兔，获得了兔抗ｈａＦＧＦ血清。另从含ｈａＦＧＦ单克隆抗体的小鼠腹水中纯化了ＩｇＧ。用纯化的单抗ＩｇＧ和多抗血清建立了ｈａＦＧＦ的双抗体夹心测定方法，检测水平可达０．２５ｎｇ／ｍｌ。用此方法测定了Ｎ端截断型ｈａＦＧＦ和牛酸性成纤维细胞生长因子（ｂａＦＧＦ），结果显示截断型ｈａＦＧＦ的检测灵敏度较低，ｂａＦＧＦ更低，提示单克隆抗体的抗原识别部位在ｈａＦＧＦ的Ｎ端附近。另外，肝素对ｈａＦＧＦ的检测有明显的影响，说明单抗的抗原识别部位与肝素的结合部位有关．     

人N端脂多糖结合蛋白基因在sf21昆虫细胞中的表达

目的 表达重组人N端脂多糖结合蛋白（truncated lipopolysaccharide binding proten,tIBP）。方法 通过病毒鉴定、SDS-PAGE、western blot、毛细管电泳、体外结合实验、细胞活性实验对重组病毒及重组蛋白tLBP的分子量、纯度和生物学活性进行分析。结果 重组病毒空斑分析确定MOI(multiplicity of infection)为8～10,SDS-PAGE显示感染时间65～72h为最佳表达分析;凝胶扫描显示特异表达蛋白占总产物的9.8%,纯化蛋白的分子量约27000u,纯度达95%以上;毛细管电泳显示表达产物呈单一峰型;Lowry法测定约1L上清液可获9mg纯化蛋白;Western blot间接显示表达产物反应带与预期值相符;酶联体外结合实验证实该蛋白可特异结合LPS。应用U937细胞,经LPS(1ng/mL）刺激与LPS（1mg/mL）刺激加纯化蛋白细胞中获得高效表达,并观察到它在体外具有结合或中和内毒素的活性作用。     

用噬菌体随机肽库探讨IGF受体及结合蛋白上的IGF—1结合位点

胰岛素样生长因子（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ，ＩＧＦｓ）是一类多功能细胞增殖调控因子，在胚胎和个体的发育过程中，ＩＧＦｓ有着极其重要而广泛的生物学作用，不仅有促有丝分裂作用，而且也能诱导分化或促进分化功能的表达，其精确的生物学效应取决于细胞发育的状态及其他激素或生长因子的存在。ＩＧＦｓ通过细胞表面的受体而发生作用。除了ＩＧＦ受体（ＩＧＦ－Ｒ）外，在体液中还存在一类ＩＧＦ结合蛋白（ＩＧＦｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＩＧＦＢＰｓ），它们以高亲和力结合ＩＧＦ，并对ＩＧＦ活性…     

IGF1R在介导IGF1促糖代谢过程中的作用研究

目的 研究胰岛素样生长因子１受体（ＩＧＦ１Ｒ）在介导ＩＧＦ１促糖代谢过程中的作用。方法 建立胰岛素抗性细胞模型,ＩＧＦＩＲ封闭细胞模型和ＩＧＦＩＲ高表达细胞模型,对这３个细胞模型的促糖代谢作用。结果（１）ＩＧＦ１对胰岛素抗性细胞的促糖代谢效应没有被阻抑。（２）ＩＧＦ１对ＩＧＦ１Ｒ封闭细胞的降糖效应得到了明显的阻抑。（３）ＩＧＦＩＲ的表达,大大增强了ＩＧＦ１的促糖代谢效应。结论 ＩＧＦＩＲ在ＩＧＦ１