大鼠抗GBM肾炎模型的建立及不同病期的生化指标和肾组织病理学观察

目的：为研究人类新月体抗肾炎的发病机制，建立大鼠抗肾小球基底膜（BGM）肾炎的动物模型，方法：提取S－D大鼠GBM抗原，将此抗原免疫新西兰白兔获得抗血清，再将此抗血清从尾静脉一次性注射给S－D大鼠。实验分2组：肾炎模型组及正常对照组。定期于第4天、第14天第第21天检测大鼠24h尿蛋白，血肌酐及血尿素的含量和肾组织病理学改变。结果：大鼠肾炎模型组：大鼠注射抗血清后于第4天出现大量蛋白尿，第14天血肌酐，血尿素显著升高，并持续上升，肾组织病理表现为肾小球内细胞数明显增加，大量新月体形成及蛋白管型，GBM呈不规则增厚，足突融合，内皮细胞脱落，坏死，免疫荧光检查见IgG、鼠IgG沿GBM线形分布，大鼠正常对照组以上指标均无明显改变。结论：通过动态观察大鼠抗GBM肾炎的病变变化，证实该模型病变与人类新月体性肾炎的病变较为一致，该模型可用于探讨人类新月体体肾炎的实验研究。     

闭角型青光眼虹膜超微结构观察

我们用透射电镜了闭角型青光眼６例７只眼的虹膜超微结构，发现青光眼我急性和慢性早期虹膜基质内色素细胞的线粒体和粗面内质网增生，前者色素细胞内黑色素颗粒大大相差悬殊，后者色素细胞常长假足样胞浆突起，胸浆分叶；进而发展，二者色素颗粒明显减少，内质网高度扩张，最后变性和萎缩。     

胞质因子对肿瘤细胞恶性的调控研究——小鼠骨髓瘤细胞与网织红细胞胞质体的胞质杂交实验

本研究选用无细胞核而富含珠蛋白mRNA的正常小鼠网织红细胞与骨髓瘤细胞系中的BW—胸腺淋巴肉瘤细胞系,NS—1浆细胞瘤细胞系和P388淋巴瘤细胞等分别进行胞质杂交的实验,以研究胞质因子调控肿瘤细胞恶性的可能性。实验结果表明三种淋巴瘤细胞在并入网织红细胞胞质体后所形成的杂交细胞呈现下列去恶性化的特征:1.杂交细胞出现组织化学反应及超微结构的形态改变;2.细胞分裂指数及生长速度明显下降;3.作异种移植至裸鼠后丧失发生肿瘤的能力;4.染色体数量明显减少,畸变率下降;5.出现基因产物血红蛋白的联苯胺阳性反应,并在BW—R杂交细胞传20多代过程中持续出现。对胞质体杂交细胞中基因产物血红蛋白的连续表现,染色体的丢失和在异种接种中丧失长瘤能力的可能机理予以讨论。     

人骨髓间质干细胞体外培养诱导成为心肌样细胞的实验研究

目的 研究人骨髓间质干细胞的体外培养及向心肌样细胞转化的条件。方法 取成人髂骨骨髓，分离出骨髓间质干细胞进行培养、传代。观察在培养液中添加诱导剂5-氮胞苷(5-aza)条件下骨髓间质干细胞的生长和分化。结果 成人骨髓间质干细胞贴壁呈集落生长，有成纤维细胞样外观。5-aza诱导人骨髓间质干细胞转化为心肌样细胞。结论 人骨髓间质干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞，是心肌组织工程良好的细胞来源。     

磁珠双阳性分选法在阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞体外扩增的应用

应用磁珠双阳性分选法在体外扩增阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患的CD34 CD59 细胞，为实现PNH患进行临床自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)奠定基础。流式细胞术分选虽然经常用于细胞纯化，但难于满足大规模临床细胞分选的需要。本研究利用免疫磁珠系统，应用隔夜孵育法去除第一次分选时CD34 细胞吸附的磁珠，经过两次磁珠双阳性分选，从PNH患骨髓中分离出足够数量的CD34 CD59 细胞，用于体外培养扩增。结果显示：磁珠双阳性法分选的CD34 CD59 细胞与磁珠—流式细胞术二步分选法比较，在细胞生存、增殖、扩增及形成造血集落形成单位(CFU)的能力上均无显性差异。结论：磁珠双阳性分选法可能推广应用于其它双阳性或多阳性细胞的分离纯化，尤其是造血干／祖细胞的分离纯化。     

大鼠PEDF基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的 构建针对大鼠PEDF 基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体并进行鉴定,探讨PEDF基因对缺血心肌血管新生的影响.方法 构建PEDF基因过表达质粒,测序鉴定.针对PEDF基因不同干扰靶点构建4种RNAi 病毒载体质粒pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA,测序鉴定.过表达质粒和RNAi质粒共转染293T细胞后应用Western blot方法进行外源筛靶确定PEDF基因RNAi 有效靶序列.有效RNAi 病毒质粒和其他3种辅助包装原件载体质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞,培养48 h后, 收集细胞培养上清液,将其浓缩后用孔稀释法测定病毒滴度.结果 过表达质粒及4种RNAi质粒构建成功.Western blot外源筛靶显示2个靶点能有效敲减目的基因的表达.PEDF shRNA慢病毒表达载体Serpinf1-RNAi-LV经293T细胞包装成功,收集293T细胞分泌的病毒上清测定浓缩病毒悬液的滴度为2×1012Tu/L.结论 成功构建了PEDF基因的RNAi慢病毒载体,为研究PEDF基因对缺血心肌血管新生的影响打下基础.     

氧相关HRE启动子控制下表达hVEGF165基因重组2型腺相关病毒的获得及鉴定

目的包装及鉴定低氧反应元件（HRE）启动子控制下缺氧诱导目的基因hVEGF165基因表达的2型重组腺相关病毒。方法磷酸钙三质粒共转染方法将pAAV—HRE9-VEGF165、pAAV—Rep／cap、pHelper质粒转染HEK293T细胞，制备2型重组腺病毒相关病毒（rAAV2）。分离培养S—D大鼠心肌细胞，转染rAAV，细胞固定后做免疫细胞荧光染色，检测细胞内血管内皮细胞生长因子（VEGF165）蛋白的表达。结果pAAV—HRE9-VEGF165质粒经测序鉴定，结果与NCBIGenBank公布的人VEGF165 eDNA核苷酸序列（AB021221）完全一致，含HRE启动子及目的基因hVEGF165的2型重组非复制型腺相关病毒包装成功，可感染原代培养的大鼠心肌细胞，缺氧可诱导VEGF165蛋白表达。结论成功包装并鉴定了rAAV—HRE9-hVEGF165载体，可有效转染心肌细胞，VEGF165基因的适时表达，为缺血性心肌疾病的“分子搭桥”治疗提供了更可能的安全性。     

晶体停搏液中Ca^2＋浓度对未成熟心肌细胞超微结构的影响

目的采用离体心脏灌注模型探讨了不同Ｃａ２＋浓度的Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ停搏液对未成熟心肌细胞超微结构的影响。方法采用日本长耳幼兔，根据停搏液中Ｃａ２＋浓度的不同，实验分为４组：无Ｃａ２＋组，［Ｃａ２＋］０ｍｍｏｌ／Ｌ；低Ｃａ２＋组，［Ｃａ２＋］０．６ｍｍｏｌ／Ｌ；中Ｃａ２＋组，［Ｃａ２＋］１．２ｍｍｏｌ／Ｌ；高Ｃａ２＋组，［Ｃａ２＋］２．４ｍｍｏｌ／Ｌ．；另设对照组。离体灌注心脏经２０℃、９０ｍｉｎ缺血后，３７℃再灌注３０ｍｉｎ。结果各实验组心肌细胞超微结构呈现为轻度可逆性损伤。高Ｃａ２＋组细胞内糖元颗粒极少见，肌原纤维张力较高，线粒体损伤较其他组显著。结论高Ｃａ２＋浓度的Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ停搏液对未成熟心肌不能提供满意的心肌保护作用。     

β2-肾上腺素能受体基因转染改善慢性缺氧兔心肌细胞收缩功能及细胞保护作用

长期慢性缺氧可刺激交感神经,血中儿茶酚胺(CA)水平持续升高,导致心肌细胞β-AR脱敏及活性改变[1].本研究旨在观察β2-肾上腺素能受体(β2-AR)基因转染对慢性缺氧心肌细胞收缩功能及细胞凋亡的影响.     

EICU护士如何做好与患者家属的交流与沟通

EICU收治的都是病情危重需随时进行抢救治疗的重症患者,由于病情危重,患者常处于危险状态,而EICU病室为防止交叉感染,保护患者,不允许家属陪同.由于患者病情重,家属害怕失去亲人,家属不能陪同,不了解情况,心情十分焦虑,烦躁不安,有时会做出不礼貌的举动,所以护士正确及时与患者家属进行有效的沟通,了解EICU患者家属的心理需求,帮助引导家属正确面对是非常重要的,也可避免不必要的纠纷.