骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究

目的：通过体外细胞的培养方法将骨髓间充质干细胞由骨髓血中分离出来并加以纯化，进一步在体外培养条件下研究其增殖及生长特征，从而为探讨后续利用组织工程学方法修复肌肉骨骼系统组织缺损的可能性提供实验基础。方法：从骨髓血中提取间充质干细胞，体外培养扩增，再以相差显微镜、电镜观察并绘制生长曲线。结果：（1）通过离体培养，可以使体内环境下低丰度的骨髓间充质干细胞实现数目扩增。（2）体外培养条件下骨髓间充质干细胞具有成纤维细胞的生长特性。（3）体外单层培养条件下贴壁生长的骨髓间充质干细胞会出现“返祖现象”。（4）骨髓间充质干细胞内细胞器与其生物活性变化相一致。结论：骨髓间充质干细胞体外培养成功为今后利用自体间充质干细胞通过组织工程学方法修复肌肉骨骼系统的组织缺损提供功能细胞奠定了基础。     

pcDNA3—EGFP基因转染骨髓间充质干细胞的实验研究

目的 探讨外源性pcDNA3-EGFP基因转染修饰兔骨髓间充质干细胞的可行性。方法 用增荧光绿色蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP)cDNA作为报告基因,采用重组真核表达载体系统（pcDNA3-EGFP)以脂质体法转染原代骨髓间充质干细胞,观察转染结果、表达情况及对靶细胞活力的影响。结果 经荧光显微镜下观察证实：成功地对骨髓间充质干细胞实现了基因转染,持续表达时间超过8周;没有发现明显的细胞毒作用及对细胞活力的显著影响。结论 采用真核转染技术可以介导外源基因转染骨髓间充质干细胞,为今后采用基因增强组织工程方法治疗肌肉、骨骼系统疾病提供了实验基础。     

RNA干扰对Caspase-3基因表达的抑制作用

目的 观察RNA干扰(RNAi) 效应对Caspase-3基因表达的抑制作用.方法 根据Caspase-3 基因序列及其二级结构特征,设计3条含21个碱基的小分子干扰RNA片段(siRNA)(Si-Caspase-3-1、Si-Caspase-3-2和Si-Caspase-3-3),确定并合成针对Caspase-3基因的siRNAs;利用脂质体介导方法将合成的siRNAs 转染神经胶质细胞,以未转染的细胞为对照.细胞爬片后,用荧光Hoechst33258染色,TUNEL法观察凋亡细胞.应用半定量RT-PCR 法和Western免疫印迹法检测Caspase-3蛋白酶活性.结果 合成的siRNAs可以抑制Caspase-3基因的表达,Si-Caspase-3-3在星形胶质细胞内对Caspase-3 mRNA表达的抑制效率为86.32%.结论 在细胞水平上,合成的siRNAs可以抑制Caspase-3基因的表达.     

一期病灶清除植骨选择性内固定治疗脊柱结核伴神经损害

目的探讨一期病灶清除、植骨、选择性内固定治疗脊柱结核伴神经损害的疗效。方法对18例脊柱结核伴神经症状患者术前均行≥3周抗结核治疗,手术行前路、后路或肾切口入路等一期病灶清除植骨及选择性内固定。术后继续抗结核治疗1年。结果患者神经损害症状术后均有不同程度恢复。1例胸腰段(T12～L1)结核患者切口延迟愈合,经清创及调整药物结合换药愈合。患者植骨均融合。复查X线片未发现脊柱失稳现象,内固定物无断裂。随访期内未见结核复发及脊柱畸形发生。结论在有效抗结核药物基础上一期病灶清除、植骨、选择性内固定治疗脊柱结核伴神经损害是安全、有效的方法。     

转移性骨肿瘤发生机制的研究进展

转移性骨肿瘤的发生率大约占全身转移性肿瘤的１５％～２０％，仅次于肺转移和肝转移，居第三位犤１犦，其中常见的是脊柱、骨盆、股骨及肱骨近端的转移。原发病灶以乳腺、肺、前列腺、肾及甲状腺等恶性肿瘤最为常见，约占所有病例的８０％犤１，２犦。因此对转移性骨肿瘤发生机制的认识就显得十分重要，这直接关系到其预防和治疗。Paget虽然早在一个世纪前就提出了肿瘤细胞转移侵蚀的“种子和土壤”学说，可直到目前为止人们对骨转移性肿瘤发生机制的认识还十分有限；一般认为它可能涉及多种因素并可能是多种因素互相影响的结果犤３犦，这…     

应用Zero-p颈椎融合器cage治疗颈椎外伤合并脊髓型颈椎病

脊髓型颈椎病(CSM)指颈椎间盘向后突出、椎体后缘骨赘、甚至黄韧带钙化压迫脊髓而产生的一系列神经症状。笔者自2009年12月~2010年12月应用AO公司Zero-p颈椎cage手术治疗颈椎外伤伴脊髓型颈椎病20例,术后神经功能均恢复良好,临床效果满意。     

人半月板纤维软骨细胞培养及生物学特性研究

为探索分离培养人半月板纤维软骨细胞的简便实用方法，采用胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法，简便快速地获得大量成活率高的人半月板纤维软骨细胞，在F－12培养液中进行原代和传代培养，并对传代培养纤维软骨细胞进行了免疫组化鉴定，光镜及超微结构的观察，结果显示，光镜下，原代培养细胞呈线形，单层排列，电镜可见细胞内有丰富的粗面内质网及线粒体，细胞呈多极性，表面有突起，纤维软骨细胞免疫组化Ⅱ型胶原染色阳性，提示本实验建立的人纤维软骨细胞分离培养方法是一种可行的方法。，     

胸椎椎弓根螺钉置入技术研究进展

椎弓根螺钉（pedicle screw，PS）固定技术是脊柱后路内固定方法最显著的进展。近年来，椎弓根螺钉内固定系统已广泛应用于脊柱畸形、脊柱骨折脱位、脊椎滑脱和退变性椎间盘病变等多种疾病的治疗，极大地推进了脊柱外科的进展。胸椎作为脊柱的重要组成部分，其位置和解剖结构都有较大的特殊性，椎弓根矢状径、横向宽度及矢状面角度变化较大，而且其周围有较多重要的血管和神经。胸椎椎弓根螺钉固定失败后极易造成严重后果。因此，对胸椎椎弓根螺钉固定技术的研究显得尤为重要。笔者就胸椎解剖特点及胸椎椎弓根螺钉置人方法和相关的辅助技术进行综述。     

经关节镜松解治疗全膝关节置换术后粘连的康复训练

目的探讨经关节镜松解治疗全膝关节置换术后粘连及术后康复训练的疗效。方法对7例平均年龄57(41～70)岁的全膝关节置换术后关节粘连病例实行了关节镜松解术及术后有针对性的康复训练。结果关节镜术后当时膝关节活动度平均116°(100°～130°),致最后随访时为105°(90°～115°)。关节活动度平均提高35°。本组未出现并发症。结论关节镜松解术和术后针对性康复训练处理非疼痛性及非感染性,单纯因纤维粘连导致的膝关节僵硬是一项有效、可靠和安全的技术。     

内固定加植骨融合治疗腰椎间盘突出合并腰椎失稳

目的：探讨腰椎间盘突出症合并腰椎不稳的手术疗效。方法：自2000年6月至2006年6月,采用后路减压、椎间盘摘除、植骨融合、椎弓根系统内固定手术治疗腰椎间盘突出症合并腰椎不稳46例,男33例,女13例;年龄37～68岁,平均48岁。病程4个月～20年,平均3.5年。单节段21例,双节段22例,3节段3例。结果：46例均获得随访,时间12～45个月,平均25个月。植骨全部愈合,临床症状明显改善,按疗效评定标准：优32例,良8例,可6例,优良率86.9%。结论：对明确诊断存在腰椎不稳合并腰椎间盘突出症的患者,施行髓核摘除、内固定加植骨融合、重建脊柱的稳定性,能获得满意的临床疗效。