野生型人LPL及联合突变体原核表达载体构建及抗体制备

目的构建野生型人脂蛋白脂酶(LPL)和联合突变体的pET28a( )原核表达载体,蛋白纯化后制备突变型多克隆抗体。方法采用RT-PCR技术从人肾周脂肪组织中获得野生型LPLcDNA,酶切和测序鉴定后插入原核表达载体pET28a( ),通过两次定点诱变得到pET28a( )-Asn291Ser和Lys312inC联合突变LPL,酶切和测序鉴定后分别转染大肠杆菌BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE电泳分析;镍柱亲和层析纯化,Western blotting鉴定;将纯化后的突变型LPL蛋白免疫新西兰大白兔,Western blotting检测血清突变型多克隆抗体滴度。结果经酶切和测序鉴定,所构建的野生型LPL及联合突变LPL的基因片段正确;两种重组质粒转染大肠杆菌BL21后,均呈高效表达;SDS-PAGE电泳分析及Western blotting鉴定表明,诱导纯化后的蛋白为目的蛋白;兔抗突变型LPL的多克隆抗体滴度达1∶100000。结论成功构建pET28a( )-野生型LPL及pET28a( )-Asn291Ser和Lys312inC联合突变LPL,同时利用获得的高纯度蛋白制备了高效价突变型LPL多克隆抗体,为进一步进行野生型LPL和突变型LPL蛋白的体内试验奠定了基础。     

野生型人LPL及联合突变体原核表达载体构建及抗体制备

目的 构建野生型人脂蛋白脂酶(LPL)和联合突变体的pET28a(+)原核表达载体,蛋白纯化后制备突变型多克隆抗体.方法 采用RT-PCR技术从人肾周脂肪组织中获得野生型LPLcDNA,酶切和测序鉴定后插入原核表达载体pET28a(+),通过两次定点诱变得到pET28a(+)-Asn291Ser和Lys312inC联合突变LPL,酶切和测序鉴定后分别转染大肠杆菌BL21.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE电泳分析;镍柱亲和层析纯化,Western blotting鉴定;将纯化后的突变型LPL蛋白免疫新西兰大白兔,Western blotting检测血清突变型多克隆抗体滴度.结果 经酶切和测序鉴定,所构建的野生型LPL及联合突变LPL的基因片段正确;两种重组质粒转染大肠杆菌BL21后,均呈高效表达;SDS-PAGE电泳分析及Western blotting鉴定表明,诱导纯化后的蛋白为目的 蛋白;兔抗突变型LPL的多克隆抗体滴度达1:100 000.结论 成功构建pET28a(+)-野生型LPL及pET28a(+)-Asn291Ser和Lys312inC联合突变LPL,同时利用获得的高纯度蛋白制备了高效价突变型LPL多克隆抗体,为进一步进行野生型LPL和突变型LPL蛋白的体内试验奠定了基础.     

小泛素相关修饰物与1型糖尿病

小泛素相关修饰物作为一个表达于全身多个器官的蛋白质家族,可对胞内多种转录因子、酶、蛋白质进行翻译后修饰.生理状态下,小泛素相关修饰物与胰岛β细胞的发育、成熟以及胰岛素的分泌密切相关.同时,它通过抑制机体自身免疫反应,减少胰岛β细胞凋亡而减缓1型糖尿病的发生、发展.对此家族蛋白及其修饰过程的深入研究为治疗1型糖尿病提供新的思路.     

胰岛素抗炎机制研究进展

胰岛素是体内唯一降低血糖的激素,目前,临床上主要使用胰岛素治疗糖尿病.然而,胰岛素不仅是一个重要的代谢调节激素,而且是一个重要的抗炎因子.其发挥抗炎作用的具体机制可能为:直接调节炎性反应因子,抑制氧化应激,调节一氧化氮的表达,在血管水平发挥抗炎作用,促进辅助性T细胞(Th)-2的转化,抑制白细胞介素-6-信号转导与转录激活因子(IL-6-STAT)炎性反应通路,降低C反应蛋白水平,下调Toll样受体等.     

Clinical analysis of inpatients with hyperglycemia in the medical intensive care units——Data of Shanghai Renji Hospital from 2002 to 2009

Objective To analyze the association of the morbidity,the management of blood glucose,and the prognosis of patients with hyperglycemia in the medical intensive care units(ICU).Methods Medical records of ICU patients of Renji Hospital from 2002 to 2009 were reviewed using Medical Record Inquiry System,and the data were retrospectively analyzed.Results(1)2631 subjects were included in the present study,blood glucose was determined at least once during hospitalization in 2168 of them.The incidence of hyperglycemia was 26.3%,in which 12.9% presented a known history of diabetes and 13.4% without.In the patients with diabetes history,93.2% of them received anti-diabetic treatment during hospitalization.mainly with oral anti-hyperglyeemic agents (53.0%)or subcutaneous insulin injection(24.9%).However,in the patients without diabetes history,84.4% were not treated against hyperglycemia.The mortality was increased in the latter group(30.4% vs13.9%,P<0.01).(2)In the patients with diabetes history,the mortality in patients whose blood glucose>10 mmol/L was higher than those with blood glucose≤7.0 mmol/L(20.5% vs 9.9%,P<0.05):while in the patients without diabetes history,the mortality began to rise as blood glucose>7.0 mmol/L(P<0.01).(3)Multiple stepwise regression analysis revealed that the average blood glucose level was an independent risk factor for death(OR=1.26).Conclusions The ICU patients showed a high prevalence of hyperglycemia,the management of hyperglycemia should be emphasized.Hyperglycemia in critically ill patients might be an independent risk factor of increased mortality.     

脂蛋白脂酶基因Ser447Ter多态性与2型糖尿病的相关性

目的 探讨上海地区汉族人群脂蛋白脂酶(LPL)基因Ser447Ter多态性与2型糖尿病患者糖、脂代谢的相关性.方法 随机选取上海地区无血缘关系汉族人437例.其中2型糖尿病患者240例(糖尿病组),糖耐量正常者197例(对照组).糖尿病组再根据空腹甘油三酯(TG)水平分为为正常TG组(T2DM-NTG亚组,TG《1.70 mmol/L)和高TG组(T2DM-HTG亚组,TG≥1.70 mmol/L).比较各组人群的糖、脂代谢指标;采用PCR-RFLP法检测各组LPL基因Ser447Ter多态性,并分析其与2型糖尿病患者糖、脂代谢指标的关系.结果 糖尿病组LPL基因Ser447Ter多态性位点等位基因、基因型频率显著低于对照组(P《0.01);T2DM-HTG亚组该位点等位基因、基因型频率显著低于T2DM-NTG亚组(P《0.05);糖尿病组Ter等位基因携带者与非携带者相比,空腹TG、总胆固醇、血糖、胰岛素水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均显著降低(P《0.05).结论 LPL基因Ser447Ter多态性在2型糖尿病发生过程中,可能是一保护性因素,表现为TG降低和胰岛素抵抗改善.     

人脂蛋白脂酶基因重组质粒的构建及其表达

目的研究野生型人脂蛋白脂酶(LPL)cDNA重组表达质粒的构建了及其在COS-1细胞中的表达。方法采用RT-PCR法从人大网膜脂肪组织获取LPL cDNA基因,以pcDNA3.1Zeo( )质粒作为载体,运用基因克隆技术构建野生型人LPLcDNA重组质粒,限制性内切酶酶切、PCR以及双向测序鉴定重组质粒;运用L ipofectam ine 2000TM将重组pcDNA3.1Zeo( )-LPLcDNA质粒导入COS-1细胞,RT-PCR法检测LPL mRNA,ELISA法和比色法分别检测细胞裂解液及细胞培养基中LPL浓度及活性。结果经限制性内切酶酶切及PCR鉴定,证实LPL基因已被连接到pcDNA3.1Zeo( )质粒中;DNA双向测序证实其产物与基因库中LPL基因序列完全一致。LPL mRNA和蛋白表达及其活性测定结果表明,pcDNA3.1Zeo( )-LPL cDNA重组质粒已转染入COS-1细胞中。结论实验成功构建野生型人LPL cDNA重组表达质粒,并证实其能在COS-1细胞中有效表达。     

从循证医学证据探讨糖尿病高血压治疗

本文根据多中心随机对照临床药物试验、系统评价、队列研究等循证医学证据，对近年糖尿病合并高血压患者临床常用的降压治疗（包括非药物治疗）以及常用的几类降压药物的降压疗效、预防肾脏病变、心脑血管事件、不良反应等进行介绍。     

糖尿病未必增加重症监护病房患者的死亡率

近年来一些研究结果显示在发生急性高血糖的重症监护病房(ICU)患者中,糖尿病患者的死亡率低于非糖尿病患者,而且无糖尿病史的患者更能从强化胰岛素治疗中获益.这似提示糖尿病对危重疾病潜在的"保护"作用.可能的"保护"机制包括糖尿病对慢性氧化应激状态的适应性反应、糖尿病患者危重疾病并发症的发生率下降及一些非生物学保护因素.因此对于无糖尿病史高血糖ICU患者的血糖管理应当给予更多的关注.     

阿斯匹林治疗2型糖尿病的系统评价

目的评价阿斯匹林在2型糖尿病(T2DM)治疗和延缓其并发症进展方面的疗效和安全性。方法对Med line数据库、Cochrane图书馆临床对照试验资料库、中国生物医学文献光盘数据库中建库至2005年10月间的所有文献进行检索,查找符合纳入标准的随机/半随机对照试验(RCT/CCT)进行质量评价,运用RevMan4.2.8统计软件对提取的相关数据进行Meta分析。结果共纳入14篇RCT/CCT研究资料,包括阿斯匹林治疗T2DM(n=7)、T2DM并发心血管病变(n=3)和T2DM并发视网膜病变(n=4)的研究文献。统计分析显示:与安慰剂相比较,阿斯匹林可改善T2DM患者的血糖控制状况[标准化均数差为-0.73,95%CI(-1.11,-0.36),P=0.000 1],减少心血管终点事件的发生[相对危险度为0.78,95%CI(0.68,0.98),P=0.03],对其视网膜病变无改善和(或)加重作用[相对危险度为1.02,95%CI(0.97,1.07),P=0.54];阿斯匹林不良反应发生率为6%~8%,与安慰剂组相比无明显差异。结论对于T2DM患者,尤其是伴有心血管疾病高危因素或已经伴有心血管疾病的患者,在排除使用禁忌证的情况下均可考虑使用阿斯匹林,其不仅可改善T2DM患者的血糖控制状况,同时可减少T2DM患者心血管终点事件的发生。