Agilent 2100 Bioanalyzer在人乳头瘤病毒检测中的应用

目的：探讨Agilent2100Bioanalyzer芯片分析系统（简称Bioanalyzer)在人乳头瘤病毒（HPV）的PCR检测和分组中的应用。方法：先分别进行通用引物介导PCR（GP－PCR）和型特异性引物介导PCR，扩增HPV高保守区（L1区）的共同序列和各型（包括HPV6，11，16和18型）的特型性序列，然后分别用常规的琼脂糖凝胶电泳技术和Bioanalyzer对PCR产物进行检测，并比较两种检测方法的准确度，重复性和灵敏度。结果：Bioanalyzer在确定片段长度时的准确度和重复性比琼脂糖凝胶电泳高，前者的准确度在95％以上，后者仅为85％，Bioanalyzer的检测灵敏度比琼脂糖凝胶电泳高100倍，结论：Bioanalyzer芯片分析系统结合PCR方法可对HPV进行特异，准确，稳定，灵敏的检测和型别鉴定，具有重要的推广价值。     

Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的 为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片，提高检测灵敏性，对Patrick Brown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法 玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化，然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层，经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能，并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果 方法改进后芯片表面性能优良：固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论 利用共价连接，方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸，解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷，提高了芯片检测的灵敏性。     

限制性显示技术在制备丙型肝炎病毒分型芯片探针的应用性研究

目的探讨限制性显示(restriction display,RD)技术在制备丙型肝炎病毒(HCV)分型芯片探针的可行性.方法用限制性内切酶Sau3A I消化HCV1a、1b、2a亚型全长cDNA,所得的限制性内切酶片段与通用接头相连,通过10个选择性引物进行分组PCR,使得各片段得以扩增并分布于10个亚组中,经聚丙烯酰胺电泳(PAGE)结合银染法进行分离.切胶回收后作3次PCR,得到较纯净的HCV cDNA限制性片段.对这些片段做分子克隆,并测序鉴定.结果由HCV 3个亚型1a、2a、1b的全长cDNA得到66个大小相对均一(200～900bp)的限制性片段,平均每个亚型约22个.测序结果表明,属于HCV基因,可以作为HCV分型芯片的探针.结论RD技术能快速收集大量长度适宜、大小均一的病毒基因片段,适合于分型诊断基因芯片探针的收集.     

基因芯片诊断技术最新进展及市场应用分析

基因芯片技术是近年来兴起的生物高新技术,把数以万计的基因片段以显微点阵的方式排列在固体介质表面,可以实现基因检测的快速、高通量、敏感和高效率检测,将可能为临床疾病诊断和健康监测等领域,带来全新的技术并开拓广阔的市场。     

Agilent 2100 Bioanalyzer在基因差异表达研究中的应用

目的：观察Agilent2100 Bioanalyzer芯片分析系统（以下简称Bioanalyzer）在基因差异表达研究中的应用。方法：应用限制性显示技术分别从正常和热休克处理后的酿酒酵母细胞中分离出cDNA片段，然后再用Bioanalyzer和传统的琼脂糖凝胶电泳技术对RD-PCR产物进行检测分析。结果：Bioanalyzer能更快速、敏感地分离和显示差异表达的基因片段，并且通过对差异片段进行定量比较，发现了数个表达有明显差异的基因片段。结论：Bioanalyzer在基因差异表达研究中具有重要的应用价值。     

人癌胚抗原重组痘苗病毒转染树突状细胞体外诱导的抗肿瘤免疫

目的：研究人癌胚抗原重组痘苗病毒（rV-CEA)转染外周血树突状细胞（DC）后在外体诱导的抗CEA分泌性肿瘤免疫。方法：分离晚期结肠癌患者的外周血单核细胞，在体外用人重组粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白细胞介素4（IL－4）培养成DC，再用rV-CEA转染DC后激发自体T细胞，观察其体外激发自体T细胞的增殖能力及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对自体CEA分泌性肿瘤细胞的杀伤活性，并与野生型痘苗病毒（W－VV）及无病毒转染的DC所激发的T细胞进行比较。结果：经rV-CEA转染的DC能显著刺激自体T细胞的增殖，其激活的T细胞对CEA分泌性自体肿瘤细胞具有特异性杀伤作用。结论：rV-CEA转染的DC可以诱导体CEA分泌性肿瘤免疫。     

人血管生成素的基因克隆及真核表达

血管生成素 (angiogenin ,ANG)是存在于正常血浆及实体肿瘤组织中的一种属于核糖核酸酶超家族[1] ,分子量为 14 1kD、pI9 5的蛋白质 ,基因定位于染色体 14q11。ANG是一种能有效促进新生血管形成的刺激因子 ,具有很强的促血管生成作用。因此开展ANG的相关研究在损伤修复及组织工程学中极有意义。本文旨在构建ANG真核表达载体 ,转染人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,研究其在HUVEC中的表达情况 ,为进一步研究ANG对HUVEC生长状况的影响以及ANG在组织工程学中的应用奠定基础。1　材料与方法1 1　材料　EcoRⅠ、BamHⅠ为Promega产品 ,…     

抗SARS-CoV抗原的人源Fab段噬菌体抗体库的构建

目的 :利用抗SARS冠状病毒IgG抗体阳性的SARS康复患者外周血淋巴细胞 ,构建人源Fab段抗体文库。方法 :制备外周血淋巴细胞总RNA ,逆转录成cDNA。以其为模板 ,利用针对家族特异性Ig基因的引物扩增重链Fd段和轻链基因 ,并重组到噬菌粒载体pComb3中 ,将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌XL 1Blue,酶切鉴定抗体库的重组率 ,并测定噬菌体抗体库的库容量。结果 :构建了源于SARS康复患者血清中抗Fab段的抗体文库 ,轻链、重链Fd段基因的重组率分别为91%和 75 % ,库容量为 7.2 3× 10 7。结论 :成功地构建了抗SARS CoV抗原的人源Fab段噬菌体抗体库     

HIV—1基因限制性显示片段的克隆与序列分析

目的：克隆并分析经限制性显示－聚合酶链反应（RD－PCR）扩增的HIV－1基因片段。方法：将所有HIV－1基因片段分成10组并进行RD－RCR扩增,纯化各组PCR产物后将之克隆至T载体上并快速鉴定。从阳性克隆中提取质粒,扩增靶片段并测序。结果：序列分析表明,所扩增的片段均属于HIV基因。结论：改良了一种多片段的克隆及鉴定方法并用于限制性显示扩增片段的克隆。     

PhoB缺失突变株的构建及其性状的初步研究

目的为探索B族链球菌（group B streptococcus，GBS）的毒力全局性调控机制，对GBS中的双组分信号传导调控系统PhoR—PhoB的成分之一PhoB的功能进行了初步研究。方法首先应用计算机软件对GBS基因组进行分析，寻找PhoB同源基因，接着通过同源交换法在GBSⅠa515和V2603菌株中构建PhoB缺失突变株，并通过Southem杂交分析对其基因型进行了确证，通过RT—PCR法、菌落印迹分析、生长曲线测定等方法对其表型特性进行了初步研究。结果在GBS中发现了PhoB同源基因并成功地在GBSⅠa515和V2603菌株中构建了PhoB缺失突变株ΔPhoB，对其基因型、表型特性及功能的初步研究结果表明此突变株为非极性缺失突变株，其缺失突变不影响其下游基因的表达；此缺失突变不影响GBS在THY及CDM培养基中生长速度的改变。结论在GBS中构建并确证了非极性PhoB基因缺失突变株，为GBS中毒力全局性调控机制的进一步研究提供了有利的工具。