肿瘤端粒酶靶向腺病毒载体的表达活性

目的　构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体 ,研究其介导目的基因在肿瘤细胞内的定向表达能力。方法　将端粒酶逆转录酶 (hTERT )启动子克隆入质粒 pDC3 12的多克隆位点构成外源基因表达盒 ,在基因表达盒上下游分别插入 1个绝缘子序列 ,构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体pSG TPE ;采用Luciferase报告基因进行hTERT启动子的活性分析 ;以pSG TPE携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因 ,重组腺病毒AdTPE EGFP ,观察其介导EGFP在肿瘤细胞内的定向表达能力 ,并与CMV启动子控制的腺病毒AdCMV EGFP作对照。结果　hTERT启动子在正常细胞内几乎没有活性 ,而在肿瘤细胞内的活性与SV 40启动子相近。腺病毒AdTPE EGFP能介导EGFP在肿瘤细胞内定向而稳定表达 ,在正常细胞内不表达 ,而对照腺病毒AdCMV EGFP在肿瘤和正常细胞内均表达EGFP。结论　靶向端粒酶阳性肿瘤的腺病毒载体 pSG TPE ,不但提高了对基因表达调控的特异性 ,而且降低了对正常细胞毒性作用。绝缘子的应用隔断了外源基因表达盒和病毒基因表达调控序列之间的互相干扰 ,进一步提高目的基因的表达效率。该载体对肿瘤的靶向基因治疗具有重要的应用价值。     

携带小鼠白细胞介素-12基因的增殖型腺病毒对胃癌细胞的作用

目的观察携带小鼠白细胞介素12(mIL12)基因的增殖型腺病毒载体对胃癌细胞的杀伤作用及mIL12表达情况。方法以携带目的基因的增殖型腺病毒CNHK200mIL12感染人胃癌细胞株SGC7901、人正常肝细胞株L02。首先,通过荧光显微镜下观察、细胞杀伤实验等观察病毒对细胞的杀伤能力;其次,通过Westernblot分析及双抗体夹心法(ELISA)检测mIL12表达情况。结果CNHK200mIL12感染SGC7901后,当MOI=10时即可杀伤大部分的肿瘤细胞,与ONYX015相当,而对正常细胞无明显杀伤。ELISA检测表明mIL12基因表达量达(267.2±34.6)ng/5×105个细胞/48h,较复制缺陷型腺病毒载体高近百倍。结论CNHK200mIL12能在胃癌细胞中复制及增殖杀死胃癌细胞,并高水平表达目的基因。     

桡骨小头切除术式远期疗效分析

分析24例桡骨小头骨折或骨骺分离桡骨小头切除术后7例存在4种并发症，并对此并发症原因、处理及预防进行分析和讨论。     

多重调控病毒.基因载体的构建及其体外抗肿瘤活性

目的 构建一种新型的病毒.基因治疗载体.方法 通过克隆技术将人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因插入质粒载体pBHGE3的E3区,得到由主要晚期启动子(MLP)调控的腺病毒质粒pPE3-hTRAIL,再通过与质粒pSGS00在293细胞中进行位点特异性重组得到E1A、E1B基因分别受hTERT启动子与HRE启动子双重调控的重组增殖型腺病毒,用TCID50方法测定病毒滴度.通过增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力.利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人TRAIL基因的表达.并进行噻唑蓝(MTT)比色法实验检测其杀伤肿瘤细胞的能力.结果 CNHK500-hTRAIL的病毒滴度为2.39×1010pfu/ml,增殖实验结果证实CNHK500-hTRAIL可以选择性地在端粒酶阳性的人肺癌细胞A549中增殖,其所携带的人TRAIL基因在A549中的表达量(183.12μg/L)明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad-hTRAIL(24.53μg/L,P<0.01).MTr显示CNHK500-hTRAIL对A549的杀伤能力明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad-hTRAIL,其半数抑制MOI值分别为17.825、0.197(P<0.01).结论 CNHKS00一hTRAIL是一种具备治疗肺癌潜力的新型病毒-基因治疗系统.     

扩大外侧入路治疗跟骨关节内骨折的临床观察

目的 探讨扩大外侧入路治疗跟骨关节内骨折的临床效果.方法 2009年6月～2011年6月本院采用扩大外侧入路治疗移位的跟骨关节内骨折70例87足,对患者进行相关影像检查并对术后效果进行评价.结果 手术前后两组患者B（o）hler角和Gissane角差异有统计学意义（P＜0.05）,70例患者单侧骨折49足复位情况较好.70例患者经过治疗,跟骨关节内骨折评分达到65～98分,平均87.9分,优良率为82.8％.结论 扩大外侧入路治疗移位的跟骨关节内骨折,临床效果满意.     

扭伤散联合纸夹板外固定治疗急性踝关节扭伤的疗效及优势

目的:探讨扭伤散联合纸夹板外固定治疗急性踝关节扭伤(Acute Ankle Sprain, AAS)的临床疗效和安全性,为其推广应用提供临床数据。方法:选取2020年1月至2022年12月就诊的急性踝关节扭伤患者作为研究对象,按照随机数字表法分为基础组、对照组和治疗组。所有患者均遵循POLICE原则,基础组按基础治疗处理,对照组和治疗组在基础治疗的基础上,分别予氟比洛芬凝胶贴膏和扭伤散外敷进行治疗。各组均使用纸夹板进行外固定,治疗疗程为14 d,第3,7,14天复查随访,比较三组患者的临床疗效,记录治疗前、治疗后第3,7,14天的疼痛视觉模拟量表(VAS)评分、踝关节评分量表评分(Kofoed评分)、肿胀评分和不良反应,以评估其疗效及安全性。结果:本试验共纳入获得完整随访的急性踝关节扭伤患者180例,其中基础组58例,对照组62例,治疗组60例,各组患者的基线资料、VAS评分、Kofoed评分和肿胀评分差异无统计学意义(P>0.05)。治疗结束后,三组的总有效率分别为75.87%,91.94%和90.00%,对照组和治疗组间的疗效差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,三...     

阿加曲班注射液联合法舒地尔治疗急性脑梗死的效果

目的 探讨阿加曲班注射液联合法舒地尔治疗急性脑梗死(acute cerebral infarct, ACI)的临床效果及对美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale, NIHSS)评分、巴氏(Barthel)指数评分的影响。方法 选取106例ACI患者,采用简单随机分组法将患者分为观察组和对照组,各53例。对照组患者采用法舒地尔注射液静脉滴注治疗,观察组在对照组治疗的基础上联合阿加曲班注射液静脉滴注治疗,均持续治疗2周。治疗后,比较2组ACI患者的临床疗效和治疗前后NIHSS评分、Barthel指数评分和血液流变学指标(红细胞聚集指数、血小板聚集指数、全血还原黏度、纤维蛋白原及血浆黏度)变化,比较2组ACI患者治疗期间不良反应发生情况。结果 观察组ACI患者治疗有效率为90.57%,高于对照组的73.58%,组间比较差异有统计学意义(χ²=5.194,P<0.05);治疗后,与对照组ACI患者比较,观察组NIHSS评分明显下降,Barthel指数评分则显著升高(t=9.601、7.687,...     

胃癌术后化疗患者实施福沙吡坦防治恶心呕吐的效果

〔摘 要〕 目的：研究尿毒症患者实施三种血液净化对外周血清中毒素水平的影响及安全性。 方法： 选择 2016 年 6 月至2017 年 6 月于许昌市中心医院接受尿毒症治疗的 90 例患者作为研究对象,采用抽签法将其分为低通量血液透析组、高通量血液透析组、血液透析滤过组,每组均 30 例,比较三组患者治疗后血清毒素水平及安全性。 结果： 与低通量血液透析组相比,高通量血液透析组、血液透析滤过组血肌酐、β2 微球蛋白、甲状旁腺激素、血尿素氮较低,高通量血液透析组、血液透析滤过组皮肤瘙痒、食欲不振、失眠、血压异常等表现发生率与低通量血液透析组相比均较低,差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05）。 结论：三种血液净化方式中,高通量血液透析、血液透析滤过治疗形式能够有效清除患者外周血清中毒素水平,且其安全性较高。     

基因-病毒治疗系统CNHK300-小鼠内皮抑素对裸鼠胃癌的抗肿瘤作用

目的探讨新构建的基因-病毒治疗系统CNHK300-小鼠内皮抑素murineendostatin（CNHK300-mE）对胃癌的抑制作用。方法通过胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤模型观察该病毒治疗系统对胃癌生长和肿瘤血管生成的抑制作用。用电镜观察该病毒在肿瘤细胞中的复制情况及肿瘤细胞的超微结构改变。用酶联免疫吸附（ELISA）法检测mE基因在体内的表达。用免疫组织化学的方法检测腺病毒外壳蛋白六邻体（hexon）、增殖细胞核抗原（PCNA）及vWF因子相关抗原的表达情况。采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果CNHK300-mE能在肿瘤细胞内复制,高表达mE,在第7天时,达到（2115±770）ng/ml（范围1745～3000ng/ml）;明显抑制胃癌皮下移植瘤的生长及瘤内的血管生成,并可引起胃癌细胞的凋亡[治疗组小鼠肿瘤细胞凋亡率（78.4±9.1）%,对照组仅（15.2±0.5）%,P〈0.01],抑制肿瘤细胞增殖[治疗组小鼠PCNA指数（55.0±1.4）%,对照组为（74.1±0.4）%,P〈0.05]。结论CNHK300-mE能在小鼠胃癌内增殖复制,高效表达mE基因,抑制胃癌生长。     

携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡

目的: 评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法: CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力, 并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量, 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效, 流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果: CNHK500-h TRAI L能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖; 感染72 h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22 ng/L; 在MOI = 0.1时, CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞, 并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL; 而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论: 携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达, 明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体, 应用前景广阔.