Toll样受体与疾病

天然免疫反应是机体抵御外界微生物感染的第一道防线。固有免疫系统通过模式识别受体(PRRs)识别病原微生物的病原相关分子模式(PAMPs)。PAMPs在结构上相对保守,主要存在于微生物。Toll样受体家族是最重要的PRRs,通过识别相应的PAMPs介导天然免疫反应,同时通过DCs启动适应性免疫应答。另外,TLRs能够识别某些内源性的TLR配体,这些配体称之为损伤相关分子模式(DAMPs)。研究发现TLRs在抗感染、变态反应、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病的发生发展过程中起着重要的作用。在深入研究Toll样受体及其信号通路的基础上,以其作为药物干预靶点,对治疗相关感染性疾病、自身免疫性疾病、变态反应性疾病等具有重要的科学意义和应用价值。     

环孢素A抑制正常人外周血记忆CD4~＋T细胞产生IL-22的实验研究

目的探讨环孢素A（CsA）是否能够抑制正常人CD4＋T细胞产生白细胞介素22（IL-22）。方法使用密度梯度离心法制备正常人外周血单个核淋巴细胞（PBMCs）,加入PMA＋Inomycin刺激细胞后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测正常人外周血PBMCs中产生IL-22的T细胞亚群,以及IL-17-IFN-γ-IL-22＋CD4＋T细胞亚群（Th22）;PMA＋Inomycin刺激正常人PBMCs,同时加或不加环孢素A（CsA）后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测IL-22＋CD4＋T细胞和IFN-γ＋CD4＋T细胞的比例,以及IL-22＋CD4＋T细胞表达记忆表型分子CD45RO情况。结果正常人外周血中产生IL-22的T细胞以CD4＋T细胞为主,且存在仅分泌IL-22,不分泌IL-17和IFN-γ的Th22亚群;CsA以剂量依赖方式抑制CD4＋T细胞产生IL-22和IFN-γ;CsA抑制外周血PBMCs中记忆CD4＋T细胞产生IL-22。结论 CsA能抑制正常人外周血中记忆CD4＋T细胞产生IL-22。     

TLR7/8配体R-848体外抑制小鼠纯化B细胞产生IgE的机制研究

目的:观察TLR7/8配体R-848对小鼠纯化B细胞产生IgE的调节作用及其可能机制.方法:制备小鼠脾细胞悬液,用磁珠分选出脾细胞中的CD19+B细胞;纯化的B细胞在基础培养液、含anti-CD40+IL-4加或不加R-848的培养液:采用ELISA的方法检测IgE的浓度;流式细胞术检测B细胞的活化情况;CFSE标记B...     

环孢素A抑制正常人外周血记忆CD4~+T细胞产生IL-22的实验研究

目的探讨环孢素A(CsA)是否能够抑制正常人CD4+T细胞产生白细胞介素22(IL-22)。方法使用密度梯度离心法制备正常人外周血单个核淋巴细胞(PBMCs),加入PMA+Inomycin刺激细胞后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测正常人外周血PBMCs中产生IL-22的T细胞亚群,以及IL-17-IFN-γ-IL-22+CD4+T细胞亚群(Th22);PMA+Inomycin刺激正常人PBMCs,同时加或不加环孢素A(CsA)后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测IL-22+CD4+T细胞和IFN-γ+CD4+T细胞的比例,以及IL-22+CD4+T细胞表达记忆表型分子CD45RO情况。结果正常人外周血中产生IL-22的T细胞以CD4+T细胞为主,且存在仅分泌IL-22,不分泌IL-17和IFN-γ的Th22亚群;CsA以剂量依赖方式抑制CD4+T细胞产生IL-22和IFN-γ;CsA抑制外周血PBMCs中记忆CD4+T细胞产生IL-22。结论 CsA能抑制正常人外周血中记忆CD4+T细胞产生IL-22。     

免疫磁珠两步法体外分离纯化小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞的应用研究

目的 研究免疫磁珠两步法体外分离纯化小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的效果.方法 将C57BL/6(H-2b)小鼠脾脏剪碎、过滤、去除红细胞后离心洗涤,获得小鼠脾细胞悬液.用Ficoll法分离获得单个核细胞后,通过免疫磁珠阴性加阳性选择两步法分离获得CD4+CD2...     

删除CD4^＋CD25^＋T细胞对OVA诱导的小鼠体液免疫应答的影响

目的观察删除CD4＋CD25＋T细胞对OVA免疫小鼠体液免疫应答的影响。方法小鼠腹腔注射抗CD25单克隆抗体,分别于3天、10天、27天采血流式检测外周血中CD4＋CD25＋T细胞的比例;注射抗CD25单克隆抗体3天后,OVA加铝佐剂免疫未删除和删除CD4＋CD25＋T细胞小鼠,7天后加强免疫一次,分别于初次免疫后7天,加强免疫后14天采血制备血清,ELISA法检测血清中OVA特异性IgE和IgG1的浓度。结果注射抗CD25单克隆抗体3天和10天,外周血中无CD4＋CD25＋T细胞;27天后CD4＋CD25＋T细胞的比例部分恢复。初次免疫7天后,删除CD4＋CD25＋T细胞小鼠总IgE、OVA特异性IgE和IgG1浓度较未删除组升高;加强免疫14天后,删除CD4＋CD25＋T细胞小鼠OVA特异性IgE较未删除组升高。结论删除CD4＋CD25＋T细胞能够影响小鼠OVA特异性体液免疫应答。     

删除CD4~+CD25~+T细胞对OVA诱导的小鼠体液免疫应答的影响

目的观察删除CD4+CD25+T细胞对OVA免疫小鼠体液免疫应答的影响。方法小鼠腹腔注射抗CD25单克隆抗体,分别于3天、10天、27天采血流式检测外周血中CD4+CD25+T细胞的比例;注射抗CD25单克隆抗体3天后,OVA加铝佐剂免疫未删除和删除CD4+CD25+T细胞小鼠,7天后加强免疫一次,分别于初次免疫后7天,加强免疫后14天采血制备血清,ELISA法检测血清中OVA特异性IgE和IgG1的浓度。结果注射抗CD25单克隆抗体3天和10天,外周血中无CD4+CD25+T细胞;27天后CD4+CD25+T细胞的比例部分恢复。初次免疫7天后,删除CD4+CD25+T细胞小鼠总IgE、OVA特异性IgE和IgG1浓度较未删除组升高;加强免疫14天后,删除CD4+CD25+T细胞小鼠OVA特异性IgE较未删除组升高。结论删除CD4+CD25+T细胞能够影响小鼠OVA特异性体液免疫应答。     

广州管圆线虫感染小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和细胞因子的变化

摘 要：目的 观察小鼠感染广州管圆线虫后脾脏T淋巴细胞亚群及其细胞因子分泌水平的变化。方法 用从褐云玛瑙螺体内检获的广州管圆线虫第3期幼虫感染BALB/c小鼠, 感染后第19d及第25d分批处死小鼠, 分离脾细胞,使用细胞内细胞因子荧光染色方法, 用流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞中的T细胞亚群的含量,用双抗夹心ELISA法检测脾细胞培养上清细胞因子的浓度。结果 与对照组比较,感染小鼠脾脏CD4+、CD4+IL-4+T淋巴细胞比例显著上升,而CD4+ IL-17 +、CD4+IFN-γ+T淋巴细胞比例显著下降;脾细胞培养上清细胞因子IL-4水平明显升高,而IL-17水平明显下降。同时,感染程度和感染时间等因素也可造成脾脏T淋巴细胞亚群及其细胞因子分泌水平的变化。结论 小鼠感染广州管圆线虫后,表现以脾脏CD4+T淋巴细胞大量增殖和Th2型淋巴细胞极化为特点。     

儿童哮喘危险因素的Meta分析及归因危险度百分比的探讨

目的:分析儿童哮喘发病相关危险因素,为临床早期干预提供依据.方法；收集国内1995年1月～ 2012年11月公开发表的关于儿童哮喘发病危险因素的研究文献进行Meta分析及人群归因危险度百分比,查找儿童哮喘发病危险因素.结果:个人过敏史、特应性体质、家族哮喘史、一二级家族过敏史、感冒、呼吸道感染、环境因素包括异味、吸烟、吸人物等是发生儿童哮喘的危险因素,母乳喂养是保护因素.危险因素权重估计分别为个人过敏史11.15％,特应性体质14.29％,家族哮喘史19.17％,一二级家族过敏史21.44％,诱因1感冒、呼吸道感染26.22％,诱因2环境异味、吸烟、吸入物等7.73％.结论:对于特应性体质儿童提倡母乳喂养,尽量避免呼吸道感染,避开常见吸人性过敏原或可预防儿童哮喘发生.     

TLR7/8配体R-848体外诱导小鼠脾细胞产生IgG2a的研究

目的检测TLR7/8配体R-848是否能够诱导naive小鼠的脾B细胞和纯化B细胞活化、增殖及产生抗体。方法磁珠分选出纯化的B细胞,将制备好的脾细胞或纯化B细胞,与R-848共培养,流式细胞术检测R-848对B细胞活化和增殖的影响;ELISA检测R-848是否能够诱导脾细胞产生IgG2a和IgG1,并检测与抗体产生相关的细胞因子的产生。结果 R-848上调B细胞表面活化分子CD25和CD80的表达,促进B细胞活化和分裂;R-848以剂量依赖方式诱导小鼠脾细胞产生IgG2a和IgG1;同时诱导脾细胞产生IFN-γ、IL-12P40、IL-10和IL-6。结论 R-848直接作用于B细胞促进其活化和分裂;R-848促进脾细胞产生大量的IgG2a,可能与其增强IFN-γ、IL-6和IL-10的产生有关。