川芎嗪诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的用川芎嗪(ligustrazin hydrochloride)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells，rMSCs)分化为神经元样细胞。方法用低糖DMEM冲洗骨髓腔，收集骨髓细胞悬液，接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化，选用第5代后的骨髓间质干细胞进行诱导分化。用10μg／LbFcF预诱导24h，更换成含川芎嗪的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞。用免疫组织化学SABC法鉴定神经丝蛋白(NF—M)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)、微管联合蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果第5代间质干细胞形态达到均一，呈梭形。用川芎嗪诱导15min到3h，间质干细胞胞体逐渐增大，并伸出细长突起形似神经元样细胞。免疫组织化学显示NF-M、NSE、nestin、MAP-2和GAP-43表达阳性，而GFAP阴性。对照组上述染色均为阴性。结论川芎嗪可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。     

探讨神经组织的讲授方法

<正>每年对学生讲授神经组织时,他们尚未学过神经解剖学.在这种条件下,如何使学生在较短时间内从大体结构→显微结构→超微结构,以至分子水平,清楚认识神经组织的结构及功能,乃是每位讲授教师的艰巨任务.为了改进这一项教学的效果,近几年我们对教学方法,进行了一些尝试,现介绍于下.1.建立局部与整体的关系神经组织组成神经系统,神经系统又分中枢神经系统和周围神经系统,利用图1作简单介绍,神经组织是由神经元及神经胶质细胞组成,神经元的胞体在中枢及神经节内,它们的突起则组成中枢神经系统内的神经通路和神经网络以及遍布全身的神经.这样大局明了之后,讲神经元分类、分布、形态和功     

脑啡肽与生长抑素在鸡视网膜无长突细胞共存的免疫组织化学研究

本文介绍用免疫组织化学的单标和双标技术研究脑啡肽(ENK)和生长抑素(SOM)在鸡视网膜无长突细胞的定位和共存。单标的实验结果表明,一些SOM免疫反应阳性无长突细胞的形态、胞体在内核层的位置及其突起在内网层的分支式样与某些ENK免疫反应阳性无长突细胞相似,虽然其突起在内网层的第3、4亚层形成的丛网不象ENK免疫反应阳性突起那样丛密,在内网层的第5亚层也未见SOM免疫阳性突起。双标的实验结果表明,一些无长突细胞显示ENK和SOM两种免疫阳性反应,而另一些无长突细胞分别只显示ENK或SOM阳性免疫反应。文中还对视网膜神经多肽间或与经典神经递质的共存进行了讨论。     

施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响

目的：探讨移植的施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响。方法：50只成年SD大鼠被分为实验组和对照组。在胸11脊髓段半横切后立即在损伤处移植入施万细胞。结果：脊髓半横切后，15d和25d对照组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数均比未损伤侧的明显减少。存活的神经元胞体出现明显皱缩，有些神经元呈现NADPH－d阳性。15d和25d施万细胞组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数则比同期对照组的明显增加，表达NOS的存活神经元数也随之增多。但存活的神经元胞体仍然是皱缩的。结论：移植的SCs可促进受损伤的背核神经元存活及其表达NOS，但不能阻止其胞体出现皱缩。     

Forskolin对成年金黄地鼠视网膜节细胞存活的影响

本研究应用荧光逆行示踪技术观察了Forskolin玻璃体内注射对视神经切断后视网膜节细胞存活的影响。结果表明：（1）正常视网膜节细胞平均密度为2113±120／mm2;（2）视神经切断5、7、14d后,视网膜节细胞平均密度分别下降至：1530±192／mm2、881±160／mm2和181±31／mm2;（3）给予DMSO／生理盐水的对照组在上述各时间组视网膜节细胞平均密度与单纯视神经切断组结果相似;（4）给予Forskolin的实验组在5、7、14d视网膜节细胞的平均密度分别为1863±131／mm2、1639±183／mm2和442±60／mm2,与视神经切断组和DMSO／生理盐水对照组相比,在各时间组均存在显著性差异（P＜0．05）。本研究提示．Forskolin有提高视神经切断后的视网膜节细胞存活的作用。     

Forskolin抗金黄地鼠视网膜节细胞凋亡作用与cAMP和JNK关系的研究

利用 Hoechst332 5 8荧光核染色和琼脂糖凝胶电泳、免疫印迹技术以及 Brown放射免疫法等实验手段 ,分别观察了forskolin对视网膜节细胞凋亡、视网膜细胞 phospho-JNK的表达以及 c AMP水平的影响。结果表明 :在近端切断金黄地鼠的视神经 ,视网膜 c AMP水平降低 ,phospho-JNK水平升高 ,视网膜节细胞发生凋亡 ;玻璃体内注射 forskolin可使 c AMP水平升高 ,phospho-JNK水平下降 ,凋亡的视网膜节细胞密度降低。提示 ,forskolin可能通过升高 c AMP水平而抑制 JNK的活性和产生抗凋亡的作用     

福斯可林和3—异丁基—1—甲基黄呤嘌对成年金黄地鼠视网膜节细胞再生的影响

探讨福斯可林(forskolin)或/和3-异丁基-1-甲基黄呤嘌(IBMX)玻璃体内注射对视网膜节细胞再生的作用。材料和方法采用逆行示踪标记术,研究外周神经缝接的对照组和外周神经缝接后,玻璃体内注射forskolin和/或IBMX的实验组视网膜节细胞再生情况。结果(1)对照组(AG)术后4、6周,每个视网膜再生的节细胞数分别为1260±137个和957±175个;(2)在上述两个时间点上各实验组每个视网膜再生的节细胞数分别为①forskolin组(AG+F)1803±648个和1068±388个;②IBMX组(AG+I)2284±1005个和1002±157个;③forskolin和IBMX联合应用组(AG+I+F)4804±375个和3161±605个;其中,AG+I+F组同AG,AG+F,AG+I组相比在这两个时间点上均存在显著性差异(P＜0.001)。结论研究结果提示联合应用forskolin和IBMX可大幅提高视网膜节细胞的再生。     

三七总皂苷对成年地鼠视网膜节细胞存活的影响

【目的】探讨玻璃体注射三七总皂苷（tPNS）对视神经切断后视网膜节细胞（RGCs）存活的作用。【方法】用荧光素逆行示踪标记法和定量解剖学技术观察正常和经tPNS处理的金黄地鼠于视神经切断后5、7、14d时RGCs的密度。动物分为正常组、单纯切断视神经组（未注射组）、tPNS处理组和生理盐水对照组。【结果】正常RGCs平均密度为（1970±82）/mm^2;视神经切断后5、7、14 d时RGCs平均密度分别下降至（983±48）/mm^2、（788±44）/mm^2和（216±37）/mm^2;生理盐水对照组在各时间点RGCs平均密度与未注射组结果相似;tPNS处理组结果分别为（1363±56）/mm^2、（1169±70）/mm^2和（477±25）/mm^2,与未注射组和生理盐水对照组相比在各时间点上均存在显著性差异（P〈0.05）。【结论】玻璃体注射tPNS可提高成年地鼠视神经切断后RGCs的短期存活率。     

ES细胞源性表皮干细胞与类真皮构建组织工程皮肤的体内分化

目的以ES细胞源性表皮干细胞为种子细胞与类真皮构建组织工程皮肤,探讨其在体内的分化。方法胎鼠皮肤成纤维细胞和大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs),分别与复合凝胶-明胶海绵构建类真皮(类真皮Ⅰ、Ⅱ),植入小鼠全层皮肤缺损创面,以生物膜为载体,把羊膜诱导后带有核标记的表皮干细胞覆盖在类真皮上,术后1～8周连续取材,苏木精-伊红染色,β1整合素、CK15、CK19、CK10和CEA免疫荧光双标和免疫组化观察。结果两组组织工程皮肤植入皮肤缺损3～4周后,创面完全长合,较厚新生皮完全覆盖创面,基底层细胞增生,形成短的细胞柱突向真皮层。新生表皮中可见核标记的细胞呈β1整合素、CK15、CK19阳性,真皮中的管腔样结构呈核荧光和CEA免疫组化双标阳性,4～8周新生表皮基底层细胞呈CK19、CK10阳性,新生表皮下可见毛囊样、皮脂腺样结构。结论ES细胞源性表皮干细胞为种子细胞与类真皮构建的两种组织工程皮肤在体内具有修复缺损皮肤及分化为表皮及毛囊样、皮脂腺样和汗腺样等皮肤附属结构的潜能。