重症肺炎大鼠血清 肺和肠组织中表面活性蛋白-A的变化规律

目的 探讨表面活性蛋白-A(surfactant protein-A, SP-A)在重症肺炎大鼠模型血清、肺、结肠组织中的变化规律。方法 将60只SD健康雄性大鼠随机分为对照组和重症肺炎组,分别在造模成功后即刻、12 h、24 h、36 h、48 h处死大鼠并留取血液、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)、肺组织、肠组织标本。通过酶联免疫吸附(ELISA)方法检测血液和BLAF中SP-A和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α);蛋白质印迹法(Western blot)、免疫荧光和HE染色检测肺、肠组织中SP-A和TNF-α的表达。结果 与对照组比较,重症肺炎组各时间段BALF中的SP-A降低,而血清SP-A和TNF-α升高(P<0.05);与对照组比较,重症肺炎组各时间段肺组织SP-A表达降低,肠组织SP-A在建模后12 h短暂升高,在12 h后降低(P<0.05);而肺、肠组织中TNF-α的表达较对照组均升高(P<0.05);HE染色可见重症肺炎组肺、肠组织损伤呈逐渐加重趋...     

瓜蒌大黄汤对重症肺炎大鼠模型肺肠组织损伤的作用

目的 观察瓜蒌大黄汤对重症肺炎大鼠模型肺肠组织损伤的作用。方法 制备重症肺炎模型SD大鼠60只,随机分为盐水灌肠组、中药灌肠组,观察两组大鼠24、48、72 h 3个时间点的情况。再取10只健康SD大鼠作为空白组和10只重症肺炎模型大鼠作为模型组,造模成功后立即处死大鼠,采血并取肺、结肠组织。盐水灌肠组及中药灌肠组分别于造模成功后6、18、30、42、54、66 h进行盐水或中药灌肠,分别在24、48、72 h时处死大鼠,采血并取肺、结肠组织。HE染色观察肺肠组织病理损伤情况并评分;ELISA检测血清表面活性蛋白-A(SP-A)、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）;Western blotting、免疫荧光方法检测肺、肠组织中SP-A、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果 病理评分示：盐水灌肠组的肠组织病理评分高于各时间段中药灌肠组（P <0.05）;盐水灌肠组的肺组织病理评分与中药灌肠组比较无统计学差异（P> 0.05）。ELISA结果示：与空白组比较,模型组CRP、PCT、SP-A均升高（P <0.05）;与模型组比较,盐水灌肠组血清CRP、PCT、S...     

白细胞介素6通过抑制自噬促进人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：探讨IL-6对血管内皮细胞自噬和凋亡的影响以及自噬与凋亡的相互作用关系。方法：采用不同浓度IL-6诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs),Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖与活性,流式细胞术检测细胞凋亡变化,单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色观察细胞嗜酸性自噬泡情况,透射电镜观察细胞超微结构的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白激活型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase3)以及自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和(sequestosome 1, SQSTM1)/P62表达水平。进一步采用IL-6分别联合自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin,RP)诱导自噬或3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)抑制自噬,观察自噬对IL-6诱导血管内皮细胞凋亡的影响。结果：1. 与对照组相比,IL-6可以呈浓度依赖性降低血管内皮细胞的活性(P＜0.05),增加血管内皮细胞的凋亡(P＜0.05)和Cleaved-caspase3的表达(P＜0.05);2. IL-6浓度依赖性降低血管内皮细胞内LC3-II/LC3-I的表达(P＜0.05)而增加P62的表达(P＜0.05),在IL-6刺激下,MDC 染色观察可见血管内皮细胞内自噬泡逐渐减少(P＜0.05),荧光强度明显减弱,透射电镜下表现为自噬小体明显减少;3. 采用自噬抑制剂3-MA刺激血管内皮细胞,发现3-MA可以进一步抑制IL-6刺激下的血管内皮细胞的自噬水平而增加凋亡水平,表现为LC3-II/LC3-I的表达进一步下降(P＜0.05)和P62的表达进一步增加(P＜0.05),血管内皮细胞内的自噬泡和自噬小体数量明显减少(P＜0.05),并且3-MA可以进一步增加IL-6刺激下血管内皮细胞的凋亡(P＜0.05)和Cleaved-caspase3的表达(P＜0.05);4. 进一步采用自噬促进剂RP刺激血管内皮细胞,发现RP可以改善IL-6刺激下的血管内皮细胞的自噬水平而降低凋亡水平,表现为LC3-II/LC3-I的表达升高(P＜0.05)和P62的表达下降(P＜0.05),血管内皮细胞内的自噬泡和自噬小体数量的增多(P＜0.05),并且RP可以明显减少IL-6刺激下血管内皮细胞的凋亡(P＜0.05)和Cleaved-caspase3的表达(P＜0.05)。结论：白介素-6可通过抑制自噬而增加血管内皮细胞凋亡。     

针灸对呼吸机相关肺炎大鼠肺泡灌洗液中中性粒细胞归巢及胞外诱捕网的影响

目的 探讨针灸对呼吸机相关肺炎大鼠支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞归巢及胞外诱捕网的影响。方法 将24只SPF级成年雄性健康SD大鼠随机分为模型组、针灸组、针灸+归巢抑制剂组、针灸+胞外诱捕网抑制剂组,每组6只。4组均进行呼吸机相关肺炎造模,造模成功后30 min,针灸组给予针灸治疗,针灸+归巢抑制组给予盐酸普乐沙福溶液腹腔注射后进行针灸治疗,针灸+胞外诱捕网抑制组给予盐酸尼索西汀溶液鞘内注射后进行针灸治疗,均2次/d,连续3 d。收集各组大鼠支气管肺泡灌洗液,激光共聚焦观察灌洗液中胞外诱捕网数量,ELISA法检测灌洗液中胍氨酸组蛋白H3(CITH3)和髓过氧化物酶(MPO)含量,流式细胞术检测灌洗液中中性粒细胞归巢比例。结果 各针灸组的胞外诱捕网数量均较模型组少,且针灸+归巢抑制组、针灸+胞外诱捕网抑制组的胞外诱捕网数量较针灸组少;各针灸组CITH3、MPO含量均明显低于模型组(P均<0.05),且针灸+归巢抑制组、针灸+胞外诱捕网抑制组均明显低于针灸组(P均<0.05);针灸组和针灸+归巢抑制组中性粒细胞归巢比例明显低于模型组和针灸+胞外诱捕网抑制组(P均<0.05)...     

表面活性蛋白-A 二胺氧化酶与重症肺炎患者急性肠损伤的相关性分析及病情评估价值

目的 探讨重症肺炎患者血清、气道深部痰液中的表面活性蛋白-A(SP-A)与血清二胺氧化酶(DAO)的相关性及对肺和肠组织损伤的评估价值。方法 选取2020年4月至2022年6月重庆市中医院重症医学科收治的重症肺炎患者72例为试验组,参照肺炎严重指数(PSI)、急性生理学与慢性健康状况评估系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分,分为中危组(18例)、高危组(25例)、极高危组(29例);根据急性胃肠损伤分级(AGI)分为Ⅰ级(12例)、Ⅱ级(19例)、Ⅲ级(17例)、Ⅳ级(24例)。另外选择同期健康体检者30例为对照组。收集入组患者的一般资料、血清SP-A、气道深部痰液SP-A及血清DAO水平。分析各检测指标的相关性,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析相关指标检测意义。结果 两类分组中血清DAO与血清SP-A均呈中度正相关(r=0.567,r=0.501,P<0.05)、与痰液SP-A均呈中度负相关(r=-0.675,r=-0.633,P<0.05);血清SP-A与痰液SP-A分别呈高度、中度负相关(r=-0.724,r=-0.648,P<0.05)。重症肺炎严重程度与血清D...     

自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞株（HK-2）凋亡中的作用。方法：培养HK-2细胞,根据培养环境氧浓度不同分为对照组（21%O2）和低氧组（1%O2）;根据低氧培养时间不同,低氧处理细胞进一步分为：低氧6 h亚组、低氧12 h亚组、低氧18 h亚组和低氧24 h亚组。Western blot检测HK-2细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和凋亡相关蛋白活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cleaved-caspase3）表达水平,流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡情况;采用低氧诱导稳定表达GFP-LC3的HK-2细胞18 h,在荧光显微镜下观察GFP-LC3自噬小体的变化;进一步采用低氧联合自噬诱导剂雷帕霉素（ra－pamycin,RP）或自噬抑制剂巴弗洛霉素A1（bafilomycin A1,BAfA1）处理HK-2细胞,细胞分为常氧对照组、常氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组、低氧对照组、低氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组。Western blot检测Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和cleaved-caspase3表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：与对照组（0.161±0.043）相比较,低氧12 h[（0.315±0.060）,P=0.019]、18 h[（0.586±0.063）,P=0.000]、24 h[（0.698±0.085）,P=0.000]亚组HK-2细胞cleaved-caspase3蛋白表达明显增多;低氧12 h、18 h、24 h亚组HK-2细胞凋亡率分别为（23.633±5.346）%、（25.200±4.782）%、（38.567±8.046）%,较对照组（11.800±3.966）%明显增多（P=0.036,P=0.021,P=0.000）。同时,低氧18 h、24 h亚组HK-2细胞表达Beclin1蛋白[（0.557±0.071）,（0.897±0.074）[较对照组（0.249±0.040）明显上调（P=0.001,P=0.000）;低氧6 h、12 h、18 h、24 h亚组细胞表达LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白[（1.795±0.143）,（2.873±0.078）,（3.029±0.089）,（3.735±0.059）]较对照组（1.322±0.191）明显上调（P=0.036,P=0.000,P=0.000,P=0.000）;细胞表达自噬底物P62蛋白[（0.776±0.061）,（0.602±0.119）,（0.419±0.117）,（0.384±0.068）]较对照组（0.957±0.035）明显下调（P=0.028,P=0.001,P=0.000,P=0.000）;低氧组细胞GFP-LC3斑点计数相对值为（40.667±6.028）,较对照组（18.667±5.508）明显增加（P=0.010）。雷帕霉素增加自噬后,低氧诱导的HK-2细胞凋亡（26.433±3.402）及cleaved-caspase3蛋白表达（0.265±0.066）较低氧对照组[（36.133±5.856）,（0.358±0.060）]明显减少（P=0.012,P=0.000）;巴弗洛霉素A1抑制自噬后,低氧诱导的HK-2细胞凋亡增多（49.233±3.412）及cleaved-caspase3蛋白表达（1.242±0.110）较低氧对照组[（25.933±3.650）,（0.659 ± 0.060）]明显增加（P=0.000,P=0.000）。结论：自噬在低氧诱导的HK-2细胞凋亡中起保护作用。