牙周炎基因疫苗佐剂IL⁃15对SD大鼠肠系膜淋巴结B细胞增殖的影响

目的：观察牙周炎疫苗佐剂白细胞介素?15（interleukin?15,IL?15）对SD大鼠肠系膜淋巴结B淋巴细胞增殖的影响,初步探讨用IL?15提高基因疫苗免疫效应的可能性。方法：将牙周炎基因疫苗pVAX1?HA2?FimA/IL?15（A组）、pVAX1?HA2?FimA（B组）和生理盐水（C组）鼻滴免疫SD大鼠,采用磁珠分选法分离纯化肠系膜淋巴结B细胞,CCK?8法检测B细胞的数量,RT?qPCR法检测CKs2基因相对表达量变化,ELISA法检测培养液中特异性IgA的表达水平。结果：A组B细胞增殖水平高于B组和C组（P < 0.05）;A组B淋巴细胞CKs2 mRNA相对表达量稍高于B组,但差异无统计学意义（P＞0.05）。A组B淋巴细胞分泌的特异性IgA水平均高于B、C组（P＜0.05）。结论：IL?15是一种有效的基因疫苗佐剂,使用本课题组构建的牙周炎基因疫苗能够促进B细胞增殖,进而提高特异性IgA抗体的表达水平。     

大叶茜草素诱导黑色素瘤B16F10凋亡

目的 研究大叶茜草素对黑色素瘤B16F10细胞的作用机制。方法 使用MTT法(其中大叶茜草素浓度为0、40、80、160和320μmol/L)、平板克隆(其中大叶茜草素浓度为0、10、20和40μmol/L)来检测B16F10的增殖能力,用划痕实验(其中大叶茜草素的浓度为0、75、150和300μmol/L)来检测B16F10的迁移能力,使用凋亡与坏死检测试剂盒(其中大叶茜草素的浓度为0、75、150和300μmol/L)来检测大叶茜草素是否诱导B16F10凋亡,使用蛋白免疫印迹法(其中大叶茜草素的浓度为0、75、150和300μmol/L)来检测B16F10细胞中MTA1基因蛋白水平的表达。结果 大叶茜草素可剂量依赖性抑制B16F10细胞的增殖和迁移,诱导B16F10凋亡;经大叶茜草素处理后B16F10细胞中MTA1具有下调趋势,且呈剂量依赖性。结论 大叶茜草素可以通过下调MTA1来抑制B16F10细胞的增殖、迁移并诱导凋亡。     

SD大鼠经鼻黏膜免疫牙周炎基因疫苗pVAX1-HA2-FimA-(IL-15)后Tfh细胞的变化

目的:观察SD大鼠经鼻黏膜免疫牙周炎基因疫苗后Tfh细胞的变化,探讨Tfh细胞在黏膜免疫应答产生特异性sIgA抗体中的作用。方法:采用鼻滴方式免疫SD大鼠,A组为生理盐水组,B组为空载体(pVAX1)组,C组为牙周炎疫苗pVAX1-HA2-FimA-(IL-15)组,ELISA法检测大鼠唾液中特异性sIgA抗体的水平;流式细胞技术检测鼻黏膜Tfh细胞及CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞的表达。结果:第3~7周C组大鼠唾液中特异性sIgA抗体表达水平高于A组和B组(P<0.05);C组FITC(CD4)和Aleax flour 594(CXCR5)融合后呈黄色荧光,A组和B组的免疫荧光双染结果中未见双阳性荧光信号;C组大鼠鼻黏膜细胞中CD4+CXCR5+Tfh及CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞的表达均高于A组和B组(P<0.05);且发现大鼠唾液中特异性sIgA与大鼠鼻黏膜CD4+CXCR5+Tfh及CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞均呈正相关关系。结论:牙周炎基因疫苗pVAX1-HA2-FimA-(IL-15)经鼻黏膜免疫大鼠后可激活Tfh细胞在鼻黏膜的表达,表达水平与特异性sIgA抗体水平呈正相关关系,说明Tfh细胞可能在促进机体产生特异性sIgA抗体的过程中起到重要作用。     

大麦芽碱盐酸盐通过诱导凋亡抑制 Hela细胞的恶性行为

目的 研究大麦芽碱盐酸盐对Hela细胞的抑制作用及作用机制。方法 使用MTT法、平板克隆来检测Hela细胞的增殖能力,用划痕实验、transwell实验来检测Hela细胞的迁移能力,使用凋亡与坏死检测试剂盒来检测大麦芽碱盐酸盐能否诱导Hela细胞出现凋亡,使用蛋白免疫印迹法来检测Hela细胞中Bax、Bcl-2和Caspase3蛋白水平的表达。结果 大麦芽碱盐酸盐可呈剂量依赖性抑制Hela细胞的增殖和迁移,诱导Hela细胞凋亡;经大麦芽碱盐酸盐处理后Hela细胞中Bcl-2呈下调趋势,Bax和Caspase3呈上调趋势,且有剂量依赖性。结论 大麦芽碱盐酸盐可抑制Hela细胞的增殖和迁移,且通过上调Bax、Caspase3和下调Bcl-2的表达来诱导该细胞凋亡。     

基于时间、OD600值及平板计数法测定嗜酸乳杆菌数量的方法

目的:通过将平板计数法与紫外分光光度计测定的OD₆₀₀值结合,寻找一种简易的测定嗜酸乳杆菌菌液浓度的方法。方法:①利用紫外分光光度计测定不同时间的嗜酸乳杆菌菌液的OD₆₀₀值;②以10为梯度对原始菌液进行稀释,将稀释菌液取0.1mL培养于固体培养板上,采用平板菌落计数法计算菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量可计算出样品中的含菌量。结果:采用紫外分光光度计(OD₆₀₀)与平板计数结合的方法进行菌液浓度的测定,在培养22h,OD₆₀₀值达到1.0时,稀释10⁷倍后菌落计数为3,可计算出原菌液浓度为3×10⁸CFU/mL,再将菌液与培养基取等体积稀释后浓度为1.5×10⁸CFU/mL,即相当于0.5号麦氏浊度标准管的细菌浓度,该浓度是进行纸片法、MIC的适宜细菌浓度。结论:该法简便、高效,准确性较单纯比浊法好,不需特殊仪器,为基础实验可提供帮助。     

大肠杆菌中质粒DNA大量提取条件的优化

应用碱裂解法原理大量提取大肠杆菌中的质粒DNA,对质粒提取试剂盒的相关步骤进行了优化。结果显示按优化的步骤该方法提取的质粒DNA浓度高、质量好,能够符合后续酶切等常规实验的要求。     

药物涂层预防种植体周围炎的研究与进展

背景：种植体/基台表面药物涂层可实现局部抗菌、促骨结合和促软组织封闭形成,预防种植体周围炎的发生,从而提高种植成功率。目的：归纳总结不同药物涂层预防种植体周围炎发生的研究现状和进展。方法：应用计算机检索中国知网、万方数据、PubMed及维普数据库,以“种植体周围炎、载药材料、涂层、抗菌、骨结合、软组织封闭”为中文检索词,以“peri-implantitis,drug loading materials,coating,antibacterial,osseointegration,soft-tissue integration/soft tissue sealing”为英文检索词,按照纳入和排除标准对文献进行筛选,最终纳入79篇文献进行综述分析。结果与结论：(1)目前的药物载体具有良好的机械、热化学和生物性能,能够通过加载和释放药物来改善种植体/基台表面抗菌、促骨结合及软组织封闭形成等功能,实现种植体周围炎的直接和/或间接预防,为种植体周围炎的预防提供了新的研究方向;例如基台表面载抗菌肽涂层既可抑制细菌的聚集和黏附,又可促进种植体软组织封闭的形成,阻止细菌侵犯下方的牙槽骨、避免骨组织的炎...     

牙周炎基因疫苗pVAX1⁃HA2⁃FimA、pVAX1⁃HA2⁃FimA/IL⁃15对大鼠实验性牙周炎保护作用研究

目的：观察牙周炎基因疫苗pVAX1?HA2?FimA、pVAX1?HA2?FimA/IL?15对SD大鼠实验性牙周炎的保护作用。方法：54只雄性SD大鼠随机分为9组,对照组：生理盐水组（A组）、空载质粒pVAX1组（B组）、牙周病组（C组）;实验组：50 μg、100 μg、150 μg pVAX1?HA2?FimA 组（D、E、F组）和50 μg、100 μg、150 μg pVAX1?HA2?FimA/IL?15组（G、H、I组）。 鼻滴免疫SD大鼠后建立实验性牙周炎模型,采用RT?qPCR法检测牙龈中炎症因子肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor?α,TNF?α）、基质金属蛋白酶8（matrix metalloproteinase?8,MMP?8）mRNA相对表达量;立体显微镜观察并测量牙槽骨吸收量。结果：①各实验组牙龈组织中TNF?α、MMP?8 mRNA低于牙周病组,且差异有统计学意义（P＜0.05）;②相同剂量的pVAX1?HA2?FimA/IL?15组较pVAX1?HA2?FimA组大鼠牙槽骨吸收量少,且差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：牙周炎基因疫苗pVAX1?HA2?FimA和 pVAX1?HA2?FimA/IL?15对SD大鼠实验性牙周炎具有保护作用。     

β-榄香铜酸对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用

目的 探究β-榄香铜酸对人食管癌细胞Eca-109增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制。方法 使用不同浓度的β-榄香铜酸(0、20、40、60μmol/L)处理Eca-109细胞,首先进行MTT、平板克隆、细胞划痕、transwell迁移、transwell侵袭实验检测β-榄香铜酸对Eca-109的细胞增殖、迁移、侵袭的影响;之后在60μmol/L浓度组使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)干预探索其作用机制。使用试剂盒检测Eca-109细胞中Fe²⁺、ROS、lipid ROS、GSH、MDA含量,使用Western blot实验检测Eca-109细胞中GPX4、PTGS2和4-HNE的蛋白表达。结果 β-榄香铜酸可呈剂量依赖性抑制Eca-109的细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭,激活Eca-109中铁死亡通路蛋白PTGS2和4-HNE,导致GPX4失活,出现铁依赖性的脂质过氧化。Ferrostatin-1可抑制整个进程,从而减少Eca-109细胞的铁死亡。结论 β-榄香铜酸可通过铁死亡通路抑制人食管癌细胞Eca-109,有望成为潜在抗食管癌的药物。     

一种SD大鼠实验性牙周炎模型的建立方法

目的 通过优化方法建立大鼠牙周炎动物模型,观察牙周炎动物模型牙槽骨吸收程度。方法 丝线结扎牙周炎组大鼠上颌第二磨牙。建模期间观察实验大鼠牙周情况,影像学检测大鼠牙槽骨吸收情况,体视显微镜测量牙槽骨吸收量。RT-qPCR法检测牙龈组织中TNF-α、MMP-8 mRNA的相对表达水平。结果 牙周病组大鼠上颌第二磨牙牙周组织炎症逐渐加重,牙槽骨吸收量增大,松动度逐渐加大,牙周病组TNF-α、MMP-8 mRNA相对表达量与对照组比较增高。结论 通过优化造模方法,成功建立SD大鼠牙周炎动物模型。