人白细胞介素15基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人白细胞介素（IL）15全长cDNA,并在大肠杆菌中表达。方法从人外周血分离的淋巴细胞中提取总RNA,通过RT—PCR扩增出hIL-15全长cDNA。构建到原核表达载体pET28a（＋）中,通过卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,扩增后IPTG诱导表达。通过SDS-PAEG及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。结果 成功构建人IL-15表达载体,并表达于大肠杆菌中。SDS—PAEG及Western-blot分析显示表达的融合蛋白分子量为16．1ku,与理论值相符。结论 获得了hIL-15融合蛋白,为hIL-15单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础。     

人白细胞介素-21 cDNA克隆及其在大肠杆菌系统的表达

目的：克隆人细胞因子IL-2l全长cDNA及其在大肠杆菌中表达，并进一步检测其表达产物的功能。方法：抽取外周血，分离淋巴细胞；抗CD3抗体刺激后，提取总RNA，通过RT-PCR获得两个部分重叠的IL-21 cDNA片段(分别为5′端242bp，3′端425bp)，重组PCR扩增出IL-21全长cDNA：DNA测序正确后，将成熟IL-21 cDNA的编码框序列构建到原核表达载体pET28a( )中。卡那霉素平板筛选及PCR鉴定，挑出阳性克隆进行扩增、转化大肠杆菌进行IPTG诱导表达：SDS—PAGE、Western blotting鉴定，亲和层析分离纯化得到M，为18600的带有组氨酸标签重组人IL-21融合蛋白。透析法重折叠复性，MTT法测定其对T细胞增殖活性。结果：成功获得人IL-21全长cDNA，并以包涵体形式表达于大肠杆菌中。重折叠后的rhIL-21融合蛋白具有与抗CD3抗体共刺激T细胞增殖作用。结论：获得具有生物学活性的rhIL-21细胞因子，为进一步研究其功能奠定基础。     

A,B血型单克隆抗体临床应用的研究

为了探索人血型分型试剂工业化生产的可能性，应用人Ａ、Ｂ血型单克隆抗体，进行了抗体特性及临床血型分型的研究。经血凝特性试验，测得Ｄ２８６－Ｅ１２单克隆抗体仅以Ａ血型特异，６－１－Ｇ１１单克隆抗体仅对Ｂ血型特异。由盐水试管法测得它们的血凝滴度均为１：５１２。以血库常规人抗Ａ、抗Ｂ血清为标准对照，采用盐水试管法，对３７０４例血液样品进行了临床血型分型试验。结果显示，Ａ、Ｂ血型单克隆抗体分型试剂与标准人血     

A、B血型单克隆抗体临床应用的研究

为了探索人血型分型试剂工业化生产的可能性，应用人Ａ、Ｂ血型单克隆抗体，进行了抗体特性及临床血型分型的研究。经血凝特性试验，测得Ｄ２８６－Ｅ１２单克隆抗体仅对Ａ血型特异，６－１－Ｇ１１单克隆抗体仅对Ｂ血型特异。由盐水试管法测得它们的血凝滴度均为１：５１２。以血库常规人抗Ａ、抗Ｂ血清为标准对照，采用盐水试管法，对３７０４例血液样品进行了临床血型分型试验。结果显示，Ａ、Ｂ血型单克隆抗体分型试剂与标准人血清１００％相符。证明：Ｄ２８６－Ｅ１２和６－１－Ｇ１１两株杂交瘤分泌的Ａ、Ｂ血型单克隆抗体可作为非常优越的血型分型试剂。具有工业化生产血型单克隆抗体的潜力。     

新药坎地沙坦酯的核磁共振谱分析

目的 用核磁共振方法鉴定新药坎地沙坦酯的结构。方法 应用HMQC、HMBC等二维核磁共振技术进行测定。结果 对新药坎地沙坦酯的1H—NMR和13C—NMR谱信号进行了全归属。结论 通过二维核磁共振技术确证了新药坎地沙坦酯的结构。     

hVEGF165基因克隆及其在COS-7细胞中的表达

目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,聚合酶链反应(PCR)法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体。用脂质体介导将其转染COS-7细胞,蛋白印迹(Westernblotting)法检测rhVEGF165的表达蛋白。结果用RT-PCR方法从胎儿心肌组织中获得了正确的hVEGF165基因序列,并成功构建pcDNA3.1/hVEGF165,且实现转染COS-7细胞的瞬时表达。结论构建的pcDNA3.1/hVEGF165转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白。     

医学院校生化教学面临的问题和改革的探讨

生物化学是医学院校重要的基础课，也是当代医学和生物学中的前沿学科。然而医学院校的生化教学面临许多问题和挑战。本论述了医学院校生物化学教学面临的五个问题，并对生物化学教学改革进行了探讨。     

β-酪啡肽-7对大鼠生长、相关激素及生长素受体mRNA表达的影响

目的: 探讨β-酪啡肽-7(β-CM-7)对大鼠生长、生长相关激素和生长因子以及生长素受体(GHR)mRNA表达的影响。方法: 将30只生长期雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组,分别被灌饲生理盐水和β-CM-7,并记录大鼠日采食量。饲养1个月后检测大鼠的增重情况,应用放射免疫法测定血清中生长相关激素和生长因子的含量,用相对定量RT-PCR法研究两组大鼠肝脏GHR mRNA表达水平的差异。结果: 实验组大鼠与对照组比,增重有提高的趋势,增重率提高8.67%。实验组大鼠的日采食量增加了13.08%(P<0.05)。与对照组相比,实验组大鼠血清中生长激素(GH)和胰岛素显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),三碘甲腺原氨酸(T3)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)有升高趋势,而甲状腺素(T4)有下降趋势。实验组大鼠肝脏的GHR mRNA表达水平显著提高(P<0.05),增加了19.83%。结论: β-CM-7能促进生长期大鼠的生长,增加采食量,影响生长相关激素和生长因子的分泌,并且上调肝脏GHR mRNA表达水平,从而增加生长激素的敏感性。     

关于实验室试剂库房管理问题的分析及解决方法的探讨

随着高校教学改革的不断深入,实验教学日益受到各方面的重视.同时,对实验室的各项工作要求更高,管理更规范.越来越多的实验室正申请或已通过了实验室评估.近年来在我校申请并通过省高教厅实验室评估的过程中,我们发现以往以教研组为基础的实验室物质管理模式,特别是试剂库房的管理中,由于其管理的繁杂以及对其重要性的认识不够,存在着许多薄弱环节.     

放疗对肿瘤患者体内抗氧化酶与过氧化物的影响

为了研究放射治疗对氧化还原系统的变化并观察放射治疗期间是否需要抗氧化剂治疗 ,我们自 1997年 10月 -1999年 3月检测了 30例肿瘤患者放疗前后血液中抗氧化酶及过氧化物的变化。一、材料和方法1 肿瘤患者 30例 ,男 ,2 7例 ;女 ,3例 ,年龄 32～ 72岁 ,平均年龄 5 2岁。其中食管癌 17例 ,鼻咽癌 8例 ,脑胶质瘤 (术后 ) 2例 ,宫颈癌 2例 ,肺癌 1例 ,均经病理确诊后进行根治性放射治疗 ,放射治疗前均未行化疗 ,采用 6ＭＶ Ｘ直线加速器 ,照射剂量在 6 0～ 70Ｇｙ 30～ 35次 ,每周 5次 ,每次 2Ｇｙ ,放疗前测定各指标的值 ,放疗结束后 1月再复…