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目的:建立有效的钩端螺旋体 PCR 检测方法,并对树鼩((tree shrew, Tupaia belangeri))、长爪沙鼠( Meriones unguiculatus; Mongolian gerbil)和灰仓鼠( Cricetulus migratorius)等三种新型实验动物进行感染情况调查。方法针对 NCBI 公布的钩端螺旋体序列,设计并筛选特异性引物,优化 PCR 体系,进行特异性和敏感性测试;并运用优化 PCR 方法对树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠样品进行检测。结果成功建立钩端螺旋体 PCR 检测方法,序列测定验证了该方法的特异性。普通级树鼩钩端螺旋体的阳性率为8.33%,普通级长爪沙鼠钩端螺旋体为100%,清洁级长爪沙鼠和清洁级灰仓鼠钩端螺旋体的阳性率为0%。结论本研究建立了钩端螺旋体 PCR 检测方法,调查了树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠三种新型实验动物的感染情况,为这三种实验动物的研究和使用奠定基础。 相似文献
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目的 对近年来我国实验猴BV(猴疱疹病毒Ⅰ型)抗体检测结果进行比较分析,以了解我国实验猴BV感染情况及其抗体水平变化规律,为我国实验猴质量控制及标准化提供依据.方法 根据国标中ELISA方法,对2003~2008年我国11个单位送检的2个品种猴血清进行BV抗体检测,并对检测结果进行统计分析.结果 检测的4612份猴血清中,有1843份BV抗体呈阳性,阳性率为39.96%;6年中检测猴群BV抗体阳性率基本在30%~50%.幼年(≤2岁)、青年(2.1~4.0岁)、成年(4.1~6.5岁)、老年(≥6.5岁)4个不同年龄段猴BV感染率分别为26.28%、31.53%、53.74%、87.27%.不同年龄感染率差异显著(P<0.01).雌猴BV感染率(35.91%)高于雄猴(34.93%),但两者差异不显著(P>0.05).结论 不同年龄猴BV感染率不同,随着年龄的增长BV感染率升高. 相似文献
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目的 建立犬CDV抗体ELISA检测方法.方法培养vero细胞,接种CDV病毒,制备vero正常抗原和CDV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验.结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为1∶32 000、10 μg/mL和1∶8 000;正常、特异抗原批内变异系数分别为9.1%和5.8%,批间平均变异系数分别为8.8%和6.6%;检测灵敏度为1∶2 560;与犬细小病毒(CPV)、犬肝炎病毒(ICHV)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25%.结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强.可用于犬CDV抗体的检测. 相似文献
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弓形虫是一种人兽共患病的病原寄生虫,是一级实验动物必须检测的项目之一。目前最常用的检查方法是检测血清抗体。抗原检查应该是最直接、直观的手段,但是直接涂片、饱和盐水漂浮和动物接种等方法或检出率低或步骤繁琐。制备制异性的McAb,用于弓形虫抗原检测是这个研究的出发点。我们通过小鼠腹腔繁殖弓形虫速殖子,利用G2砂蕊漏斗过滤,提纯速殖子,反复冻融及超声波粉碎,制备可溶性抗原。常规方法免疫BALB/c小鼠,免疫剂量为100μg/只,取免疫后小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法筛选,有限稀… 相似文献
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目的 建立以弓形虫重组抗原的豚鼠弓形虫抗体ELISA方法,并进行初步应用.方法 根据重组抗原的工作浓度包被酶标板,确定酶标二抗浓度,对方法的特异性、灵敏度、稳定性和重复性等进行测试.结果 确定酶标二抗最佳稀释度为1∶8000;与豚鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCM)、仙台病毒(SV)、肺炎病毒(PVM)及呼肠孤3型(Reo3)阳性血清均无交叉反应;对已知阳性血清的检测上限可达1∶2560;6个月的稳定性试验显示A490值的相对偏差均小于15%;批内变异系数(CV)5.7% ~ 9.5%,批间变异系数(CV)1.9%~9.0%;对182份样本的检测表明豚鼠弓形虫抗体阳性率为7.14%(13/182),与IFA检测结果的符合率为100%,与商品化试剂盒的阳性符合率为92.3%,阴性符合率为100%.结论 建立的豚鼠弓形虫重组抗原ELISA检测方法可用以弓形虫抗体的常规检测. 相似文献
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目的:通过实验小鼠肾匀浆中肽酶-3检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法:按照CNAS批准的能力验证方案,通过样品制备,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品标准结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果:共有11个实验室参加本次能力验证项目,其中提交满意结果的实验室有9个,占总参加机构的81.8%,不满意的实验室有2个,占18.2%。结论:实验动物质量检测机构在实验小鼠肾匀浆中肽酶-3的检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。 相似文献
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目的 建立鸡胚致死孤儿病毒(CELO)和鸡减蛋综合症病毒(EDS)的多重PCR检测方法并进行初步应用.方法 参照GenBank提供的基因序列,设计了2对特异性引物分别扩增CELO长纤突蛋白和EDS六邻体蛋白的基因序列,建立检测CELO和EDS的多重PCR方法,考察该方法的特异性和敏感性,并使用该方法检测流感疫苗主种子批病毒是否存在外源性禽腺病毒的污染.结果 该多重PCR方法成功扩增得到了两条特异性目的条带,并经测序验证.该方法特异性好,灵敏度显示核酸最低检测量可达10-4μg/mL.使用该方法检测12批次流感疫苗主种子批病毒,外源性禽腺病毒的检测结果均为阴性.结论 成功建立鸡胚致死孤儿病毒和鸡减蛋综合症病毒的多重PCR检测方法,灵敏度高,特异性好.在流感疫苗主种子批病毒的外源性禽腺病毒的检测中具有很高的使用价值和应用前景. 相似文献
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活疫苗及其生产基质中Sendai病毒RT-PCR检测方法的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
对我国六个主要单位饲养的KM小鼠的体重及10种脏器重量进行测定,并计算其脏器重量系数。结果显示,六个KM小鼠群体间体重及10种脏器重量均有差异(P<0.05),在屏障环境下饲养的KM小鼠群体的体生长及大部分脏器发育比较快;而脾脏和肾上腺发育显得较为缓慢,与其它5个群体相比存在极显著性差异。作者认为,加速我国KM小鼠的标准化研究迫在眉睫。 相似文献
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目的建立检测兔出血症病毒的RT-PCR方法。方法自感染RHDV致死的兔肝脏组织中提纯病毒,提取病毒总RNA,以RT-PCR方法扩增出368bp的基因片段。将RT-PCR产物克隆到T载体中,并对重组质粒测序。结果PCR产物的测序结果与文献报道的序列一致,敏感性试验结果表明,可检测到10^-7病毒滴度。结论建立的检测RHDVRT-PCR方法具有很高的特异性和敏感性。 相似文献