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目的:获得尘螨变应原Der f 2基因及其生物信息学资料.方法:提取粉尘螨总RNA,RT-PCR合成Der f 2的cDNA片段,回收PCR产物并连接至pMD19-T simple,经测序验证后亚克隆入表达载体pET-28a( ),转化大肠杆菌感受态细胞后提取质粒,双酶切鉴定.用ExPaSy,EBI,NCBI网站的在线软件对测序结果进行分析.结果:RT-PCR扩增获得了Der f 2 cDNA片段,酶切、电泳结果表明克隆和亚克隆获得成功.与参考序列相比,测序结果多了87 bp(77~163),但Blastn发现中国广州和德国Reinbek报道的序列中也含此87bp.同源性、相似性、序列比对及分子进化分析提示,该序列与中国广州和德国Reinbek报道的序列亲缘关系较近.推测该变应原由176个氨基酸组成,与附睾分泌蛋白E1具有同源性,信号肽位于1~17aa处,在6~24aa处有一跨膜螺旋.二级结构由a-螺旋(16.57%),延伸链(32.57%)和随机卷曲(50.86%)组成.结论:获得了粉尘螨变应原Der f 2编码基因及其分子特征,为进一步生产基因工程变应原用于临床诊治变态反应性疾病奠定了基础. 相似文献
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ABC-ELISA检测血清粉尘螨特异性IgE 总被引:1,自引:0,他引:1
崔玉宝 《中国人兽共患病杂志》2004,20(7):617-618,623
目的 应用ABC -ELISA法检测粉尘螨特异性IgE。 方法 按常规ABC -ELISA法操作 ,以阳性血清光密度值1 0时所需要的条件为最适条件 ,经预实验选择最适抗原包被浓度、血清稀释度和酶结合物浓度 ,并经特异性抑制试验验证。用ABC -ELISA法对 76例哮喘患者和 30例正常人进行粉尘螨特异性IgE检测 ,并与皮肤挑刺试验结果比较。 结果 ABC -ELISA法检测粉尘螨特异性IgE最适抗原包被浓度为 10 μg/ml,血清稀释倍数为 1∶4 0 ,Avidin -HRP为 1∶6 0 0 ,粉尘螨浸液和鼠抗人IgE均能抑制阳性反应。支气管哮喘患者和正常人粉尘螨特异性IgE校正OD值分别为 2 4 1± 1 13和 1 2 5± 0 5 6 ,差异具显著性 (χ2 =5 36 ,P <0 0 1)。粉尘螨浸液皮试与螨特异性IgE测定的符合率为 93 4 0 % (99/10 6 )。 结论 ABC -ELISA法检测粉尘螨特异性IgE耗时短 ,且具有较好的抗原特异性 ,建议临床推广应用。 相似文献
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目的了解江苏省盐城地区居室环境中尘螨孳生现状。方法 2013年5月使用吸尘器收集居民卧室及大学生宿舍内的床面灰尘和枕尘,共采集尘样200份。采用直接镜检法对灰尘样品中的螨类进行分离、鉴定和计数。结果共检获螨类1 284只,隶属于5科8属,总孳生率为51.00%(102/200),平均孳生密度为37.95只/g,其中学生宿舍孳生率及孳生密度均高于居民卧室(P0.05)。屋尘螨和粉尘螨占种群比例分别为36.68%和22.74%。结论屋尘螨和粉尘螨是盐城地区人居环境中的优势螨种。 相似文献
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目的探索双师制带教方法在医学检验实验教学中的应用。方法把2010级医学检验技术班76名同学,按学号分成两组,学号为奇数组实行双师制带教,另一组实行传统带教。比较两组学生病理检验技术、免疫学检验和微生物学检验的平时实验、实验技能和理论考试的成绩。结果病理检验技术、免疫学检验和微生物学检验三门课程中双师制组学生的平时实验、实验技能和理论考试成绩均明显高于传统带教组学生(P<0.05)。结论双师制教学有助于提高和规范学生的实验操作技能,加深对理论知识的理解。 相似文献
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随着高等教育的迅速发展,实训室已成为现代大学中培养动手能力、实现创新教育的平台,实训室的地位和作用愈来愈不可替代。本文介绍了我院建设医学检验技术专业实训室的目的、理念、构成、功能,总结了实施所带来的效果。对今后更好的开展实验实训工作,加强学生实践操作能力的培养具有实际意义。 相似文献
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两种粉螨分离方法的对比研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 比较电热集螨法和振筛分离法分离粉螨的效果。方法 以 2 5W和 60W灯泡作电热集螨器的热源 ,分别收集 3、6、9、12、15、18、2 1和 2 4h 8个时间段分离出的螨 ;分别收集 5、10、 15、2 0、2 5和 3 0min 6个时间段振筛分离法分离出的螨。结果 2 5W和 60W电热集螨器 2 4h集螨数分别为 (1164 2 .74± 415 5 .62 )只 /份和 (1982 4.5 7±2 168.3 3 )只 /份 ,差异有非常显著性 (t =9.5 6,P <0 .0 1) ;60W灯泡作为电热集螨器的热源 ,分离 3 0份样本 ,前 2个时间段 (3、6h)分离螨数为 5 2 813 1只 ,占 2 4h获取螨数 (5 9473 7只 )的 88.80 % ;以振筛分离法分离 3 0份样本 ,前 4个时间段(5、10、15和 2 0min)分离出螨 5 75 5 63只 ,占 3 0min所获螨数 (5 8782 0只 )的 97.91% ;3 0份样本以 60W灯泡为电热集螨器热源分离 6h获螨 (1760 4.3 7± 2 82 6.5 4)只 /份 ,3 0份样本采用振筛分离法分离 2 0min获螨 (19185 .43± 3 2 87.62 )只 /份 ,差异无显著性 (t =2 .0 0 ,P >0 .0 5 )。结论 电热集螨器以 60W灯泡为热源分离 6h较适宜 ,振筛分离法以 2 0min为适宜分离时间 ;两种方法收集螨的数量差异无显著性 ,但振筛分离法耗时短、收集到的螨纯度高 ,适宜粉螨抗原制备过程中使用。 相似文献
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腹泻患者粉螨感染调查 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨粉螨致腹泻的发生特点。方法对腹泻患者进行粪螨分离、皮肤挑刺试验、血清总IgE、螨特异性IgE检测。其中粪螨分离采用饱和盐水漂浮法,抗体检测使用ELISA法。结果共检查241例腹泻患者,粪螨阳性率为17.01%(41/241),男、女粪螨阳性率分别为15.86%(23/145)和18.75%(18/96),差异无显著性(χ2=0.34,P>0.05);皮肤挑刺试验"、"、"+"、"±"和"?"者分别占9.13%(22/241)、7.47%(18/241)、5.81%(14/241)、4.98%(12/241)和72.61%(175/241)。粪螨阳性和阴性腹泻患者血清总IgE、螨特异性IgE分别为(165.72±78.55)IU/ml、(132.44±26.80)IU/ml和(145.22±82.47)IU/ml、(67.35±45.28)IU/ml,差异均具显著性(P<0.01)。从事中药材、粮食储藏和加工者粪螨阳性率为26.74%(23/86),其他职业人群粪螨阳性率为11.61%(18/155),差异具显著性(χ2=8.97,P<0.01)。结论粉螨寄生人体肠道可导致粉螨性腹泻,并使患者血清总IgE、螨特异性IgE升高,粉螨浸液皮肤挑刺试验阳性。腹泻患者粉螨感染的发生与所从事的职业有一定关系,但与性别无关。 相似文献
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目的 原核表达尘螨主要变应原DerP 2。方法分离屋尘螨总RNA,根据GenBank已公布的DerP2核酸序列设计引物用RT-PcR扩增DerP2编码基因,克隆至pMD19-T载体、亚克隆至表达载体pET28a(+),将表达质粒转化至Escherichia coliBL21(DE3)并用IFFG诱导表达,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果成功构建了表达质粒pET28a(+)-DerP2,SDS-PAGE和Western blotting显示原核表达获得成功。序列分析表明所获得的DerP2编码基因与参考序列同源性达99.54%,推测其编码氨基酸130个,相对分子质量约为14348.5。结论尘螨变应原DerP2原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础。 相似文献
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患儿 ,男 ,9岁 ,安徽籍。因下颌部皮下肿块疼痛 2d入院。主诉 :两个多月前左侧小腿无明显诱因下出现红肿疼痛 ,此后肿块先后移至左腿内侧、背部、颈部、下颌部 ,肿块局部表现有红、肿、热、痛 ,患儿自觉皮肤虫爬感和皮下游走性疼痛、酸痛等 ,同时伴有轻度发热、头晕、头痛 ,近 3~ 4d肿块颈部明显肿胀。体检 :T 3 7℃ ,P 94次 /min ,左小腿肿胀 ,触及数个硬结。下颌部肿胀处见鲜红色斑块 ,边缘清晰 ,质稍硬。实验室检查 :Hb 12 5g/L ,WBC 14× 10 9/L ,中性粒细胞 47% ,淋巴细胞 2 2 % ,嗜酸粒细胞 3 1%。某医院以大剂量抗生素处理 ,1d… 相似文献
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为探讨粉尘螨(Dermatophagoides farinae)、屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)和梅氏嗜霉螨(Euroglyphus maynei)的分类,采用PCR扩增获得粉尘螨1类(Der f 1)和2类变应原(Der f 2)的cDNA片段,经测序后推导氨基酸序列, 与GenBank中的屋尘螨Der p 1、Der p 2和梅氏嗜霉螨Eur m 1、Eur m 2氨基酸序列进行比对,分别构建1类和2类变应原分子进化树。结果显示变应原之间相似度,Der p 1与Eur m 1为86%,Der p 1与Der f 1为83%;Der p 2与Eur m 2为87%,Der p 2与Der f 2为67%。用变应原氨基酸序列构建分子进化树,1类变应原Der p 1与Eur m 1聚成一簇,2类变应原Der p 2与Eur m 2聚成一簇。结果表明屋尘螨和梅氏嗜霉螨亲缘关系较近,而与粉尘螨较远。 相似文献