114 趋化性细胞因子与淋巴细胞

淋巴细胞的生成、游走、归巢、分化和淋巴组织的发育过程是一个十分复杂的过程，近年来的研究表明趋化因于及其受体的相互作用对其发挥着重要的作用。本文主要综述了趋化因于及其受体的分类和对淋巴细胞的调节作用。     

科研反哺教学——科研型案例在我校卓越班本科生免疫学讨论课中的应用初探

推动科研服务教学、科研反哺教学,强化科研育人功能,推动高校及时把最新科研成果转化为教学内容,进而激发学生专业学习兴趣是2019年全国教育大会精神中的一项重要内容.医学免疫学是一门重要的基础医学课程,其发展快、层次深、交叉广,但目前的教材内容及疾病案例已经不能满足学生学习的需求.我教研室组成专门的教学团队,将科学研究深入...     

催乳素对外周血T细胞巨噬细胞移动抑制因子表达的影响

目的:观察催乳素(PRL)对人外周血T细胞分泌巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibition factor, MIF)的调节作用.方法:采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,再经尼龙棉柱过滤法纯化T细胞.采用植物凝集素(PHA,10 μg/ml)和乙酸豆寇佛波酯(PMA,5 μg/ml)刺激T细胞活化,再分别加入不同浓度的催乳素(20,300,1 000 ng/ml)进行干预.细胞培养24 h后收集细胞,RT-PCR法检测外周血T细胞MIF基因表达水平;ELISA法检测T细胞培养液上清中的MIF含量.同时将MIF荧光素酶报告基因(pGl3-Basic-MIF)转染各组T细胞,检测各转染组的荧光素酶相对活性.结果:各催乳素处理组的MIF基因的表达水平、细胞培养上清的MIF浓度和MIF-lucr报告基因的荧光素酶相对活性比对照组显著增高.结论:催乳素可增强外周血T细胞表达和分泌巨噬细胞移动抑制因子.     

高脂饮食对小鼠内脏脂肪组织T细胞亚群的影响

目的:探讨高脂饮食诱导的营养性肥胖小鼠脂肪组织内CD4+T淋巴细胞的变化。方法:将6周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分成2组,即正常对照组和高脂饮食组,分别饲养16周后眼底取血分离血清检测血糖、CHOL、TG、HDL和LDL水平,ELISA检测血清中TNF-α水平;游离附睾垫脂肪组织分离细胞,流式检测CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的数量及亚群的比例。结果:与对照组比较,高脂饮食组体重、增加体重、附睾垫脂肪重量、肾周脂肪重量、血脂、血糖和TNF-α水平均有显著增加,但胸腺指数和脾脏指数两组间没有显著差别。脂肪组织内CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞数均较对照组有所增高,其中CD8+T淋巴细胞增多最显著。在CD4+T淋巴细胞中,Th1和Th17细胞显著增多,而Th2细胞未见显著变化。结论:高脂饮食可诱导脂肪组织内T淋巴细胞的增多,并向Th1和Th17方向极化。     

兔抗人重组生长激素rhGH多克隆抗体的制备、纯化及鉴定

目的制备抗人生长激素(growth hormone,GH)的多克隆抗体并鉴定其性能。方法真核细胞表达质粒pcDNA3.0-GHcDNA免疫家兔,制备rhGH多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价。亲和层析法纯化后,进行Western blot、免疫组织化学和激光共聚焦显微镜检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果得到兔抗人重组人生长激素rhGH多克隆抗体,效价达1:40000。纯化后的抗体可特异识别超表达的hGH和人内源性GH,可用于免疫组织化学实验、Western blot及激光共聚焦。结论用质粒免疫家兔制备的抗GH抗体具有较高的效价以及特异性,为hGH的功能性研究提供了有力的支持。     

八珍神农饮对肿瘤患者LAK细胞和IL-2活性的影响

八珍神农饮具有调理气血、扶正去邪的作用。本文通过实验研究 ,观察八珍神农饮对肿瘤患者血中ＬＡＫ细胞和ＩＬ 2活性的影响 ,以探讨其抗肿瘤的作用。1　对象与方法1 1　对象①病人 :随机选择恶性肿瘤患者 78例 ,其中原发性肝癌10例 ,肺癌 12例 ,胃癌 13例 ,食管贲门癌 19例 ,何杰金淋巴瘤 6例 ,慢性粒细胞性白血病 6例 ,结肠癌 7例 ,鼻咽癌 3例 ,脑胶质细胞瘤 2例。男 40例 ,女 38例 ;年龄 18～ 72岁 ,中位年龄 5 2岁。全部病例均经细胞学和 (或 )病理学确诊为恶性肿瘤。②八珍神农饮口服液由人参、当归、白术、茯苓、红花、大黄等经过特殊…     

催乳素对葡萄球菌肠毒素A诱导T细胞凋亡的影响

目的:观察作为重要细胞因子的催乳素在T细胞活化诱导凋亡过程中的作用。方法:实验于2005-03/2006-06在校级实验室新乡医学院免疫学实验室完成。实验材料:正常人外周血由新乡医学院第一附属医院提供,葡萄球菌肠毒素A(sigma)。实验方法:①T细胞活化诱导凋亡模型的建立:取健康人外周血5mL,加入等体积淋巴细胞分离液,采用密度梯度离心法获得淋巴细胞。完全1640培养基重悬细胞,加入葡萄球菌肠毒素A(SEA),置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养,至第4天,800r/min离心10min,以新鲜完全1640培养基换液,尽可能除去SEA。培养液中加入人白细胞介素2继续培养2周待用。②催乳素干预:将获得细胞离心并弃去培养液,用新鲜完全1640培养基重悬,调整细胞密度为5×109L-1,加入24孔板中,分别加入4mg/LSEA诱导细胞凋亡,同时加入20,300,1000μg/L催乳素,以不加催乳素的为对照组。③实验评估:于培养0,16,24h时采用MTT法检测T细胞增殖情况。培养16h时用流式技术检测细胞凋亡情况,并通过琼脂糖凝胶电泳检测T细胞凋亡DNA,并采用流式细胞术检测T细胞膜表面Fas和FasL,WesternBlot法检测T细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax。结果:①MTT法检测T细胞增殖:不同质量浓度催乳素干预组在16,24h的T细胞数量较对照组明显增多[吸光度值:对照组:0.65±0.02,0.54±0.04;20μg/L催乳素组:0.81±0.04,0.71±0.11;300μg/L催乳素组:1.14±0.10,1.22±0.10;1000μg/L催乳素组:1.12±0.12,1.22±0.12,P<0.01]。0～24h内300,1000μg/L催乳素组T细胞数量呈上升趋势(P<0.01),20μg/L催乳素组T细胞数量呈下降趋势(P<0.01)。②流式细胞术检测T细胞凋亡率:培养16h时,与对照组比较,各质量浓度催乳素干预组T细胞凋亡率降低[(46.80±9.21)%,(31.40±7.03)%,(17.50±4.29)%,(10.20±3.84)%,P<0.05]。③流式细胞术检测T细胞膜表面Fas、FasL:与对照组比较,各质量浓度催乳素干预组Fas和FasL细胞阳性率均下降[Fas:(88.0±17.3)%,(43.0±13.1)%,(22.0±6.7)%,(25.0±8.2)%,P<0.01;FasL:(46.0±17.5)%,(33.0±11.4)%,(31.0±14.0)%,(28.0±13.8)%,P<0.05]。④WesternBlot检测T细胞Bcl-2、Bax:与对照组比较,20μg/L催乳素组Bax和Bcl-2表达均无明显差异(P>0.05),300μg/L,1000μg/L催乳素组Bax表达明显降低(P<0.05),Bcl-2表达明显升高(P<0.05)。结论:在葡萄球菌肠毒素A诱导的T细胞活化诱导凋亡过程中,催乳素以细胞因子的身份,可通过抑制Fas、FasL和Bax表达,提高Bcl-2表达,来抑制T细胞凋亡,维持T细胞增殖。     

蝎素组分Ⅲ对THP1细胞NF-κB转录因子的影响

目的:研究蝎素组分Ⅲ(Scorpion venom crudeⅢ,SVC-Ⅲ)对THP1细胞中NFκ-B转录因子的影响。方法:用RT-PCR方法检测THP1细胞中p65和IKK1基因的表达;Western blot检测细胞p65蛋白的表达;荧光素酶报告基因的方法观察NF-κB的转录活性。结果:1μg/L浓度的SVC-Ⅲ在mRNA和蛋白水平均对NFκ-B有促进表达作用,并增强NFκ-B的转录活性;10μg/L浓度的SVC-Ⅲ则未显示出促进作用;100μg/L浓度的SVC-Ⅲ反而表现出一定的抑制作用。结论:SVC-Ⅲ能以剂量依赖的方式调节THP1细胞NFκ-B转录因子的表达和活性。     

rhGH对Jurkat细胞中NF-κB活性的影响

目的:探讨重组人生长激素(rhGH)对Jurkat细胞核因子-κB(NF-κB)信号通路活化的影响.方法:(1)将含荧光素酶报告基因的质粒pNF-κB-luc转染入T淋巴细胞系-Jurkat E6-1细胞中,在培养液中加入梯度浓度rhGH.(2)用梯度浓度rhGH直接刺激Jurkat细胞,然后用RT-PCR方法检测IκBα、IKK1 mRNA表达情况.结果:各浓度rhGH对转染pNF-κB-luc的Jurkat细胞中荧光素酶表达有促进作用,而对IκBα、IKK1 mRNA表达无显著影响.结论:rhGH对PHA活化的T细胞NF-κB的活化有促进作用,而对与NF-κB活化相关的IκBα和IKK1的mRNA表达无显著影响.