乳酸脱氢酶与蚊虫对溴氰菊酯抗性相关性的研究

目的研究乳酸脱氢酶(LDH)与蚊溴氰菊酯抗性之间的关系。方法应用RT-PCR及cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA end,RACE)技术扩增白纹伊蚊LDH全长基因;用实时荧光定量PCR检测敏感和抗性蚊C6/36细胞中LDH基因的表达水平;用乳酸脱氢酶活性检测试剂盒检测敏感和抗性蚊细胞中LDH酶活性。结果 LDH基因全长共1831 bp,其中ORF为996 bp,共编码331个氨基酸。该基因与埃及伊蚊、黑腹果蝇、小家鼠和人的乳酸脱氢酶的同源性分别为89%、72%、66%和65%。实时荧光定量PCR结果表明,LDH基因在抗性蚊细胞中高表达,为敏感蚊细胞的1.87倍(P<0.05)。LDH酶活性检测结果显示,LDH在敏感蚊细胞中的酶活性范围为1～95 U/gprot,均值为40 U/gprot;在抗性蚊细胞中的酶活性范围为20～150 U/gprot,均值为75 U/gprot(n=15,P<0.01)。结论抗性蚊细胞中的LDH表达量和酶活性均高于敏感蚊细胞,提示LDH可能与蚊溴氰菊酯抗性相关。     

传染性单核细胞增多症患儿外周血象特点

目的:分析传染性单核细胞增多症患者外周血血象特点,探讨其在临床诊疗中的意义。方法:用五分类血液分析仪对43例传染性单核细胞增多症患者和20例健康儿童外周血进行分析,制作血涂片镜下观察异型淋巴细胞比例。结果:患者外周血白细胞总数显著增多,主要是淋巴细胞增多;容易发生贫血,但红细胞数与血红蛋白量常不一致,血红蛋白多低于参考值但红细胞多正常或仅轻微减低;血涂片中可见很高比例的异型淋巴细胞,以不规则型为主。结论:传染性单核细胞增多症患者外周血象有显著特点,有助于该病的临床诊疗,但也存在复杂多变性,需要注意鉴别诊断,以减少临床误诊漏诊。     

3种转染试剂介导siRNA转染蚊细胞的比较研究

目的比较3种不同转染试剂介导siRNA转染蚊细胞的优缺点,选择最优方法用于转染后细胞存活率检测试验。方法分别用FuGENE HD,X-tremeGENE和siPORT Amine 3种转染试剂介导特定siRNA转染蚊细胞,转染48 h后采用实时荧光定量PCR检测目的基因的表达。比较3种方法的干涉效率,转染试剂对细胞的毒性和不同方法的操作步骤对实验结果的影响。结果 FuGENE HD、X-tremeGENE和siPORT Amine转染后的干涉效率分别为70%、85%和29%;FuGENE HD和siPORT Amine对蚊C6/36抗性细胞毒性较小,X-tremeGENE对蚊细胞毒性较大;FuGENE HD的转染过程需要更换一次细胞培养液,X-tremeGENE的转染过程需要更换2次细胞培养液,siPORT A-mine的转染过程不需要更换培养液。结论转染试剂的转染效果对于实验结果有显著影响。在蚊细胞转染siRNA的实验中,FuGENE HD转染效率尚可,对细胞毒性小,转染过程只需1次换液操作;X-tremeGENE转染效率较高,对蚊细胞毒性较大,有2次换液操作;siPORT Amine毒性小且不需换液操作,...     

南京某医院成人耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出情况及耐药基因分析

目的了解江苏省中西医结合医院2011—2017年成人耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株的检出情况及其耐药基因,为临床合理用药提供参考依据。方法采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐方法鉴定MRSA。采用纸片扩散法对MRSA菌株进行药物敏感性试验。采用聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺类耐药基因mecA,氨基糖苷修饰酶基因aac(6′)/aph(2″)、aph(3)-Ⅲ,大环内酯类23s rRNA甲基化酶基因ermA/C,四环素类核糖体保护蛋白基因tetM/K,喹诺酮类耐药基因qnrA/B和耐消毒剂基因qacA/B。结果 MRSA的总检出率为31.95%,主要分离自痰液和创口分泌物样本;检出率居前3位的科室依次为呼吸科、外科和重症监护病房。未检出对万古霉素、利奈唑胺和替加环素耐药的MRSA菌株;仅有0.49%的MRSA对奎奴普汀耐药,对复方磺胺甲噁唑、利福平、环丙沙星、四环素、庆大霉素、克林霉素、红霉素的耐药率分别为11.18%、11.57%、21.47%、63.63%、44.31%、59.41%、62.35%。多重耐药基因mecA阳性率为100%,aac(6′)/aph(2″)、aph(3)-Ⅲ、ermA/C、tetM/K、qnrA/B、qacA/B基因检出率分别为36.67%、27.94%、68.43%、57.35%、23.63%和52.45%。结论 2011—2017年江苏省中西医结合医院成人MRSA多重耐药基因检出率高。MRSA对多种抗菌药物都不同程度耐药,临床应以药物敏感性试验结果为合理用药的最主要依据。     

表观健康儿童人类白细胞分化抗原B27参考区间的建立

目的建立健康儿童人白细胞抗原B27(HLA-B27)的参考区间,为幼年特发型关节炎(JIA)附着点炎症相关型(ERA)的诊断和鉴别诊断提供实验室依据。方法选取460例无自觉脊柱、外周关节、关节周围组织炎症或其他病变的儿童作为参考区间建立人群,另选取200名表观健康儿童和50例ERA患儿作为参考区间验证人群。检测所有对象的外周血HLA-B27,建立参考区间,并进行验证。结果 460例儿童HLA-B27平均荧光强度检测结果呈偏态分布(Z=1.615,P=0.011),采用中位数(M)[百分位数(P2.5～P97.5)]表示,结果为100(78～121)。不同年龄和性别儿童HLA-B27平均荧光强度差异均无统计学意义(P0.05)。采用百分位数法建立单侧97.5%的参考区间,HLA-B27参考区间为121。一致性比较结果显示,建立的新参考区间与厂商提供的HLA-B27参考区间(0～147)之间一致性较差(kappa=0.013,P0.001)。根据新参考区间,200名表观健康儿童HLA-B27的异常率为5%,50例ERA患儿的HLA-B27阳性率为78%;根据厂商提供的参考区间,200名表观健康儿童HLA-B27的异常率为3%,50例ERA患儿的HLA-B27阳性率为26%;二者异常率差异无统计学意义(χ~2=1.41,P0.05),阳性率差异有统计学意义(χ~2=49.18,P0.001)。结论建立了南京地区儿童外周血HLA-B27的参考区间,依据该参考区间诊断ERA的特异性与厂商提供的参考区间无差异,但提高了诊断敏感性,降低了漏诊率。     

核糖体蛋白S29与人肝癌细胞Bel－7402耐5－氟尿嘧啶的关系

目的：探讨核糖体蛋白S29（ RPS29）与人肝癌细胞Bel－7402耐5－氟尿嘧啶（5－FU ）的关系。方法采用大剂量冲击法和逐渐增加剂量法构建人肝癌Bel－7402／5－FU耐药细胞系;用荧光定量PCR和West－ern blot检测RPS29基因和蛋白在敏感和耐药细胞中的表达;用siRNA干涉耐药细胞的RPS29,CCK－8法检测细胞存活率变化。用肝癌HepG2／5－FU耐药细胞株验证阻断RPS29表达与5－FU耐药的关系。结果 Bel－7402／5－FU耐药细胞对5－FU的IC50为62μmol／L,耐药指数为22．7。 RPS29基因和蛋白在耐药细胞中高表达,分别为敏感细胞的（2．21±0．19）倍和（1．79±0．28）倍（P＜0．01）。干涉RPS29后,耐药细胞在一系列浓度梯度的5－FU作用下存活率分别比对照组下降（15．1±6．5）％、（24．3±4．2）％、（19．2±5．1）％、（16．3±6．8）％（ P ＜0．05）。干涉RPS29表达后,肝癌HepG2／5－FU耐药细胞株在一系列浓度梯度的5－FU作用下存活率分别比对照组下降（8．4±1．2）％、（13．0±2．3）％、（17．1±3．1）％和（12．2±1．5）％（P＜0．05）。结论 RPS29基因和蛋白均在Bel－7402／5－FU耐药细胞高表达;低表达RPS29可提高Bel－7402／5－FU耐药细胞对5－FU的敏感性。低表达RPS29可提高Hep G2／5－FU耐药细胞对5－FU的敏感性。 RPS29与肝癌细胞对5－FU的耐药性有关。     

Caspase-3抑制剂所致氧化应激状态下肾小管上皮细胞差异表达基因的筛选及功能验证

目的：研究caspase-3抑制剂引起的氧化应激状态下肾小管上皮细胞基因表达特点,筛选潜在的候选基因,为揭示caspase-3调控活性氧（reactive oxygen species,ROS）损伤肾小管上皮细胞的机制奠定基础。方法：将人肾小管上皮细胞HK-2用H2O2(300μmol/L)处理6 h后,随机分为对照组和caspase-3抑制剂组（Ac-DEVD-CHO,15μmol/L）,运用Illumina Hiseq 2500测序平台完成基因测序,筛选差异基因并进行相关富集分析,用定量PCR对筛选到的前10位差异表达基因（differentially expressed gene,DEG）进行验证。将H2O2(300μmol/L)处理6 h后的HK-2细胞随机分为对照组、caspase-3抑制剂组（Ac-DEVDCHO,15μmol/L）、CTNNB1组[pcDNA3.1（+）-CTNNB1]、caspase-3抑制剂+CTNNB1组[Ac-DEVD-CHO,15μmol/L+pcDNA3.1（+）-CTNNB1]以及caspase-3抑制剂+CTNNB1 NC组[Ac-DEVD...     

Caspase依赖的氧化应激对脓毒症肾小管上皮细胞损伤的作用及机制

目的：观察不同活性氧（reactive oxygen species,ROS）及氧化应激水平对脓毒症肾小管上皮细胞增殖、凋亡、周期等生物学效应的影响,探索氧化应激水平和线粒体?Caspase途径能否作为脓毒症肾小管上皮损伤的治疗靶点。方法：用终浓度为10 μg/mL的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）处理人肾小管上皮HK?2 细胞 12 h建立脓毒症细胞模型,将细胞模型随机分为H2O2组（H2O2,300 μmol/L）、Caspase 抑制剂组（Ac?DEVD?CHO,15 μmol/L）、Caspase抑制剂+H2O2组（H2O2,300 μmol/L+Ac?DEVD?CHO,15 μmol/L）和阴性对照组（不处理）;另以正常培养的HK?2细胞为空白对照组。Western blot检测Cleaved?Caspase 3和Cleaved?多聚ADP核糖多聚酶（poly ADP?ribose polymerase,PARP）蛋白表达,MTT 检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞 ROS水平、细胞凋亡和细胞周期。结果：阴性对照组细胞ROS水平、凋亡率、凋亡相关蛋白Cleaved?Caspase 3和Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较空白对照组升高（P均 < 0.05）,增殖率较空白对照组降低（P < 0.05）。H2O2组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved?Caspase 3和Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较阴性对照组升高（P均 < 0.05）,而增殖率较阴性对照组降低（P < 0.05）。Caspase抑制剂+H2O2组细胞ROS 水平、凋亡率、Cleaved?Caspase 3和 Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较 H2O2组降低（P均 < 0.05）,但均高于阴性对照组（P均 < 0.05））;增殖率较H2O2组升高（P <0.05）,但仍低于阴性对照组（P < 0.05）。结论：脓毒症细胞模型中存在异常升高的氧化应激反应。ROS能通过线粒体?Caspase凋亡途径抑制脓毒症肾小管上皮细胞增殖,促进细胞凋亡和引起细胞周期G1期阻滞。抑制Caspase对ROS引起的脓毒症肾小管上皮细胞损伤有一定保护作用。     

微小RNA-23靶向线粒体分裂蛋白1调控炎症反应和氧化应激保护脓毒症肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨微小RNA-23(microRNA-23,miR-23)和线粒体分裂蛋白1(fission protein1,FIS1)在脓毒症肾小管上皮细胞中的作用关系以及miR-23靶向FIS1对细胞炎症反应和氧化应激的调控。方法 体外培养人肾小管上皮细胞（human kidney-2,HK-2）,用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导建立脓毒症模型;利用双荧光素酶报告基因验证miR-23和FIS1的相互作用。将HK-2细胞采用随机数字表法随机分组,用miR-23的模拟物/抑制物和FIS1的真核表达载体/小干扰RNA单独或联合处理,细胞计数试剂检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡和活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平、丙二醛（malondialdehyde,MDA）试剂盒检测细胞MDA水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素（interleukin, IL）1β、IL-6和IL-10水平。结果 LPS诱导的HK-2细胞miR-23 mRNA表达量为对照组的（0...