转化生长因子β1血清浓度及基因多态性与煤工尘肺的关系

目的探讨血清中转化生长因子β1(TGF-β1)的浓度与其-509位点基因多态性的关系在煤工尘肺发生发展中的作用。方法选择110例汉族煤工尘肺患者和110例煤尘接触者为研究对象,采集外周静脉血,应用TGF-β1酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清TGF-β1浓度,应用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测TGF-β1基因-509位点基因型。结果病例组煤工尘肺患者血清TGF-β1平均浓度为(65.108±29.354)pg/L,对照组为(57.296±16.603)pg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。病例组与对照组内各基因型组血清TGF-β1平均浓度差异有统计学意义(P<0.05)。进一步用q检验两两比较,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1-509位点为C/C、C/T基因型的两组血清TGF-β1的平均浓度之间差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1-509位点为T/T基因型的两组血清TGF-β1的平均浓度之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论煤工尘肺患者血清TGF-β1浓度与TGF-β1基因-509位点多态性可能有关。     

肺癌组织中黑色素瘤抗原-A3基因mRNA的表达及其序列点突变分析

目的检测肺癌组织中黑色素瘤抗原-3基因(MAGE-A3)mRNA的表达。方法用逆转录-套式聚合酶链反应(RT-PCR)对31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织MAGE-A3mRNA表达情况进行测定;PE-377DNA测序仪对5例10个RT-PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA序列测定。结果31例肺癌患者癌组织中26例表达MAGE-A3mRNA,阳性率为83.9%;相应的癌旁组织均未表达。DNA序列测定证明PCR扩增产物中目的基因片段均为MAGE-A3cDNA序列,所测5例样本中4例样本有两个相同位置的碱基发生了点突变(C2773→T2773;G2807→A2807),导致一个氨基酸残基改变(E143→K)。结论MAGE-A3mRNA在肺癌中呈高比例表达,提示此抗原有可能作为肺癌患者免疫治疗的靶抗原。我国肺癌患者中存在MAGE-A3基因个别位点的变异。     

半定量RT-PCR检测肺癌组织S100C的表达及其原核表达载体的构建和鉴定

目的分析S100C基因在肺癌组织中的表达情况,并构建S100C蛋白的原核表达载体。方法以β-actin为内参,运用半定量RT-PCR技术检测26例肺癌组织和配对癌旁组织S100C基因mRNA的表达水平;运用RT-PCR技术克隆S100C基因的cDNA全长片段,与PET30a连接构建原核表达载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,进行阳性克隆筛选鉴定。结果肺癌组织中S100C mRNA表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。成功构建了S100C原核表达载体,序列同源性达100%。结论S100C基因表达下调在肺癌的发生中可能起重要作用;成功构建了S100C原核表达载体。     

血清P53蛋白检测对职业性肺癌的预报价值

目的：探讨血清Ｐ５３蛋白作为职业性肺癌早期监测指标的可能性和应用价值。方法;对长期接触多环芳烃混合物（ＰＡＨＳ）的２３名焦炉工和１８名沥青工进行外周血淋巴细胞染色体畸变检查初筛,检出染色体畸变者各１６名,然后采用双抗夹心酶联免疫吸附试验方法９Ｓａｎｄｗｉｃｈ－ＥＫＬＩＳＡ）测定畸变者血清Ｐ５３蛋白水平。以１２名正常献血员为对照组。结果：焦炉工和沥青工血清Ｐ５３水平均值高于对照组（Ｐ〈０．０５）,其     

肺癌患者谷胱甘肽S-转移酶P1基因Ile105Val多态性分析

目的:分析肺癌患者谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)基因Ile105Val单核苷酸多态性.方法:采用病例-对照研究方法,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)技术,检测121例正常对照和121例肺癌患者GSTP1基因Ile105Val多态性基因型分布,并比较各基因型与肺癌易感性的关系.结果:肺癌患者中,携带GSTP1突变等位基因的基因型Ile/Val Val/Val的频率为51.2%,高于对照组的33.1%(P=0.004);至少携带一个Val等位基因的个体发生肺癌风险是Ile/Ile基因型个体的2.13倍(95%CI1.27～3.58),且病理分型分析显示风险增加主要在鳞癌组.经吸烟分层后,仅增加吸烟者的风险.结论:GSTP1基因Ile105Val多态可能与中国人肺癌易感性有关,可用于对肺癌易感个体的预警和预防.     

人肺腺癌A549细胞株中HSP70多肽复合物的分离与纯化

目的:探讨肺腺癌细胞中热休克蛋白70多肽复合物分离及纯化的方法.方法:采用裂解液裂解、超声破碎、ConA-Sepharose亲和层析、ADP-agarose亲和层析结合DEAE阴离子交换层析方法,从体外培养的热休克(43℃)处理后的人肺腺癌细胞株A549中分离纯化HSP70多肽复合物,通过SDS-PAGE电泳、Western-blot检测获得蛋白.结果:获得蛋白的相对分子质量约为70 000,能与抗HSP70特异单抗结合.结论:采用ConA-Sepharose亲和层析、ADP-agarose亲和层析结合DEAE阴离子交换层析从肺腺癌细胞株A549中可获得高纯度的HSP70多肽复合物,为进一步研究以HSP70多肽复合物为基础的肺癌免疫治疗提供了依据.     

快速蛋白液相色谱系统纯化肺癌组织热休克蛋白70及其鉴定

目的:从肺癌组织中纯化并鉴定热休克蛋白70(HSP70),为研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗奠定基础.方法:用组织蛋白裂解液从肺癌组织中提取总蛋白,应用ConA-sepharose亲和层析和快速蛋白液相色谱系统(FRLC)连续分离、梯度洗脱获得蛋白,应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western-blot进行蛋白相对分子质量及免疫原性鉴定.结果与结论:所获蛋白的相对分子质量为70 000,经Western-blot鉴定为HSP70.     

TaqMan PCR技术同步检测沙眼衣原体及肺炎衣原体的DNA

我们自行设计了针对沙眼衣原体、肺炎衣原体的特异性引物、Taq Man荧光探针,对这2种病原体核酸进行双重扩增荧光探针杂交检测,取得满意结果。     

GC/MS法分析煤焦沥青加热烟气提取物成分

目的 分析煤焦沥青加热烟气提取物的成分.方法 用粉尘采样器采集煤焦沥青加热300和400℃的挥发烟气,包括大颗粒和大小颗粒混合物,溶解于二甲基亚砜(DMSO)溶液,并应用气相色谱/质谱(GC/MS)联用技术,利用NIST谱库对4组主要成分进行分析.结果 4组成分主要包括多环芳烃类(PAHS)、杂环类、单环芳烃类和脂环族...     

RASSF1A和p16 转录本在非小细胞肺癌中的表达及启动子区甲基化

 目的 研究RASSF1A和p16基因在国人非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的转录及启动子区甲基化情况，探讨其转录失活的机制，为NSCLC的诊断和治疗寻找新的途径。方法 应用半定量RTPCR和甲基化特异性PCR法分析96例NSCLC及远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因mRNA的表达和启动子区甲基化情况。结果 （1）53．12％（51／96）的NSCLC中RASSF1A表达明显下调或缺失；36．46％（35／96）的p16表达下调或缺失，而远癌正常肺组织均表达良好。（2）96例NSCLC中RASSF1A甲基化率48．96％（47／96），该基因表达明显下调或缺失的51例中39例（76．5％）出现甲基化，表达正常的45例中8例（17．8％）出现甲基化，两组对比差异有统计学意义（P〈0．05）；96例NSCLC中33例（34．38％）检测到p16启动予区甲基化，p16基因表达明显下调的35例中20例（57．1％）出现该基因CPG岛的甲基化，而表达正常的61例中13例（21．3％）出现甲基化，两组比较差异显著（P〈0．05）。96例远癌正常肺组织均未检测到此两基因启动子有甲基化。结论 RASSF1A和p16基因mRNA在国人NSCLC中较高比例的表达下调或缺失；甲基化可能是两基因表达失活的主要原因。