MXA蛋白抑制HBV复制的体外研究

目的研究MXA蛋白抑制HBV复制的活性。方法将pcDNA3．1-MXA重组质粒和PU19-1．24HBV重组质粒分别按1：1、2：1共转染HepG2细胞（MXA组），对照组使用空pcDNA3．1、Salon DNA和PU19-1．24HBV重组质粒共转染，3d后Western blot检测MXA蛋白表达，Abbott法检测细胞上清HBeAg和HBsAg分泌量，定量PCR检测上清和胞内HBV DNA水平，统计学分析结果。pcDNA3．1-MXA与PU19-1．24HBV重组质粒共转染HepG2细胞，对照组为pcDNA3．1-MXA重组质粒、PU19空质粒和Salon DNA共转染．3d后裂解细胞Western blot检测MXA蛋白表达。结果Western blot显示MXA组有MXA蛋白表达：与对照组相比，pcDNA3．1-MXA和PU19—1．24HBV重组质粒按1：1转染时，MXA组HBeAg下降27％．上清HBV DNA和细胞内HBV DNA分别下降1个log值和0．6个log值；按2：1比例转染时MXA组HBeAg较对照组下降66％，上清HBV DNA和细胞内HBV DNA水平分别下降1．9个和1．7个log值，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。Western blot检测显示MXA蛋白抑制HBV组与对照组MXA蛋白表达没有明显差别。结论MXA蛋白在HepG2细胞具有抑制HBV复制活性，抑制活性与蛋白的表达量相关；在抑制HBV复制过程中MXA蛋白自身可能不发生降解。     

K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制体外研究

目的研究K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制活性。方法将pcDNA3.1-MxA(wild-type)重组质粒(WT组)、pcDNA3.1-MxA-K83A重组质粒(K83A组)和pcDNA3.1空质粒(对照组)分别与pU19-1.24HBV重组质粒按2∶1比例瞬时共转染HepG2细胞,转染3d后western blot检测MxA蛋白表达,Abbott检测各组细胞上清HBsAg和HBeAg表达,定量PCR检测上清和细胞内HBV DNA水平,统计学分析结果。结果MxA、K83A组有较好的MxA蛋白表达;与对照组相比,K83A组和MxA组上清HBeAg分别下降73%和71%(P<0.05),上清HBV DNA水平分别下降2.22lg和2.11lg(P<0.01),细胞内HBV DNA水平下降1.89lg和1.78lg(P<0.01)。结论K83A变异不影响MxA蛋白抑制HBV复制活性。     

屎肠球菌临床分离株生物膜形成与毒力基因及ST分型之间的关系

目的 研究临床分离屎肠球菌株生物膜形成与ST分型和毒力基因之间的关系。方法 收集深圳市南山医院2011—2017年临床分离的不重复屎肠球菌共122株,采用结晶紫染色法检测细菌生物膜形成能力,对分离株进行多位点序列分型(MLST)分析, PCR方法检测屎肠球菌临床株毒力基因表面蛋白(esp )、透明质酸酶(hyl )、表面聚集蛋白(asa1 )、明胶酶(gelE )、溶细胞素(cylA )等的分布。结果 122株屎肠球菌生物膜形成阳性率为49.2%,其生物膜形成能力主要表现为弱阳性。屎肠球菌毒力基因检测提示esp 和hyl 检出率分别为39.3%(48/122)和15.6%(19/122),所有菌株未检测到asa1 、gelE 、cylA ;其中esp 阳性与生物膜形成能力相关(P <0.05),而hyl 阳性与生物膜形成能力无相关性(P >0.05)。MLST分型提示屎肠球菌临床株主要为ST78及ST18型,分别为26株及18株,其中ST78与ST18之间生物膜形成能力差异无统计学意义(P >0.05),esp 更常见于ST78分离株。结论 临床分离屎肠球菌生物膜形成能力较弱,其毒力基因esp 阳性更容易形成生物膜,而hyl 与生物膜形成能力无明显相关性,ST78与ST18之间生物膜形成能力无明显差异,esp 更常见于ST78分离株。     

乙型肝炎病毒拉米夫定耐药株的重组逆转录病毒载体及其包装细胞系的建立

目的构建1.3拷贝乙型肝炎病毒(HBV)拉米夫定耐药株的重组逆转录病毒载体及其包装细胞系。方法在野毒株1.3拷贝HBV载体的基础上采用定点突变的方法将rtL180M,rtM204V位点突变,构建拉米夫定耐药病毒株,并通过PCR、限制性内切酶酶切,分别以正向和反向将野毒株和耐药株分别连接于逆转录病毒载体pLNCX2的相应酶切位点,构建成重组逆转录病毒载体,经双酶切及PCR扩增鉴定。重组载体转染包装细胞,筛选培养细胞克隆并进行病毒滴定。结果通过双酶切、PCR扩增、测序鉴定证实成功构建了1.3拷贝HBV拉米夫定耐药株的逆转录病毒载体。成功建立包装细胞系并测得病毒滴度均为1×105cuf/ml。结论含正向及反向1.3拷贝HBV拉米夫定耐药的重组逆转录病毒载体及其包装细胞系构建成功,可以用于拉米夫定耐药细胞模型研究。     

深圳市南山区人民医院2011年细菌耐药监测

[目的]了解本院2011年临床住院病人分离菌株对各种常用抗菌药物的耐药性,以指导临床合理用药.[方法]应用微量肉汤稀释法,检测临床分离菌对各种常用抗菌药物的耐药性,参照CLSI2010版判断结果,并用WHONET5.4软件统计分析.[结果]2011年1~12月收集的临床住院病人分离菌共2137株,其中革兰阳性(G+)菌占35.1%,革兰阴性(G-)菌占64.9%.金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中甲氧西林耐药株所占的比例分别为 24.1%和62.6%.葡萄球菌属中甲氧西林耐药株对β-内酰胺类抗生素和其他测试药的耐药率显著高于甲氧西林敏感株,但仍有约50%~80%的菌株对四环素、复方新诺明或利福平敏感,未发现万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药株.肠球菌属中粪肠球菌对大多数测试药物的耐药率低于屎肠球菌,粪肠球菌中发现2株对利奈唑胺耐药的菌株,经使用微量肉汤稀释法鉴定后确认为耐利奈唑胺的粪肠球菌,未发现万古霉素及替考拉宁耐药株.大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株所占比例分别平均为46.6%和25.5%.肠杆菌科细菌中产ESBLs菌株对测试药物的耐药率均比非产ESBLs菌株高.肠杆菌科细菌对碳青霉烯类仍高度敏感,总耐药率小于1.0%.铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为 32.2%和21.9%,不动杆菌属(鲍曼不动杆菌占90.8%)对两者的耐药率均为45.4%.嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明、左氧氟沙星敏感率均在80.0%以上.[结论]2011年本院分离的细菌以G-杆菌为主,细菌多重耐药性严重,利奈唑胺耐药肠球菌和碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌有增多趋势,尤其G-杆菌增多.鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的增加,对临床构成严重威胁.合理选用抗菌药,加强感染控制措施是当务之急,各医院采取有效控制措施刻不容缓.     

奥替溴铵抑制革兰阳性菌生长与生物被膜形成的活性及机制研究

目的 探究奥替溴铵抑制革兰阳性菌生长及抑制生物被膜活性和作用机制。方法 采用肉汤稀释法测定奥替溴铵对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌和无乳链球菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),并通过生长曲线分析奥替溴铵对浮游菌生长的影响,杀菌曲线评估奥替溴铵杀菌活性;结晶紫染色生物被膜含量测定和激光共聚焦显微镜检测奥替溴铵的抗生物被膜活性;定量蛋白质组学研究奥替溴铵对金黄色葡萄球菌的抗菌机制。结果 奥替溴铵对革兰阳性菌表现出广谱抗菌活性和杀菌活性,MIC₉₀≤12.5μmol/L,奥替溴铵在1/2×MIC浓度时对细菌生长有显著的抑制作用;此外,奥替溴铵能够以剂量依赖形式抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成,同时可灭杀成熟生物被膜中的细菌;蛋白质组分析显示奥替溴铵处理能够显著抑制细菌初级代谢过程,诱导过氧化应激。结论 奥替溴铵对革兰阳性菌具有较佳的抗菌活性和抗生物被膜活性,通过抑制细菌初级代谢和引发过氧化应激达到抑菌效果。     

甲型H1N1流行性感冒70例临床特征及转归分析

目的 分析甲型H1N1流行性感冒住院患者的临床特征及治疗转归.方法 回顾性分析本院70例H1N1流行性感冒住院患者的临床资料,探讨其临床表现、实验室检查以及治疗和预后等特点.结果 患者男31例（44.3%）,儿童23例（32.9%）,孕妇7例（10%）.主要临床表现为发热（98.6%）、咳嗽（94.3%）、咳痰（58.6%）、咽痛（40.0%）、头痛（35.7%）、四肢酸痛（25.7%）等,住院发热患者平均热程（4.2±2.8）d.疾病早期白细胞总数正常45例（64.3%）,20例（28.6%）下降,24例（34.3%）淋巴细胞比例升高;血培养均阴性,16例（22.9%）合并其他病毒感染.43例（61.4%）出现肺部影像学改变,主要表现为单侧或双侧斑片状高密度影.29例（41.4%）患者有明确接触史,5例（7.1%）并存其他内科疾病.70例患者经综合治疗后均好转或痊愈出院,其中仅17例（24.3%）给予奥司他韦口服.结论 甲型H1N1流感多数病例病情轻,即使合并肺部感染,经积极综合治疗预后仍良好;奥司他韦应用指征有待进一步探讨.     

慢性重型乙型肝炎患者隐孢子虫感染的研究

目的探讨慢性重型肝炎与隐孢子虫感染的关系，为防治该病提供依据。方法用金胺-酚染色法(AA—P)和改良抗酸染色法(MAF)检测218例慢性重型乙型肝炎(慢重肝)患者和140例腹泻儿童粪便标本隐孢子虫卵囊，用PCR技术检测其DNA，并进行内切酶分析；对隐孢子虫感染影响因素进行分析。结果经AA-p、MAF和PCR检测，慢重肝患者隐孢子虫感染率分别为4．1％、3．2％和6．0％；腹泻儿童感染率为0．7％、0．7％和1．4％、PCR结果显示，慢重肝患者隐孢子虫感染率高于腹泻儿童；阳性患者腹泻史、动物接触史明显高于阴性患者，农村患者感染率高于城市患者结论慢性重型肝炎患者对隐孢子虫的易感性增加，隐孢子虫感染是引起慢性重型肝炎患者腹泻和可能加重其病情的因素之一。     

靶向性血小板衍生生长因子siRNA表达质粒的构建及鉴定

目的 构建靶向性血小板衍生生长因子(PDGF)B链的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,为进一步研究PDGF基因功能奠定基础.方法 根据PDGF-B链序列设计合成含靶向PDGF基因siRNA转录模板的茎环结构,与两端分别有Bam HI、HindIII酶切位点的pSilencer3.1-Hlhygro质粒连接,转化大肠杆菌,扩增、纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列.结果 PCR扩增片段与预期结果相符,双酶切证实PDGF siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致.结论 成功构建了靶向性PDGF基因的siRNAs表达质粒. Abstract： Objective To construct the small interfering RNA (siRNA) expressing plasmids targeting platelet-derived growth factor(PDGF)and study the function of PDGF with RNA interference technology. Methods Two complementary 63-nt oligonucleotides targeting PDGF were synthesized with 5 single-stranded over-hangs according to the PDGF-B gene sequence in the Genebank and the kit manual,which were ligated with the linearized pSilencer3.1-Hlhygro.The plasmids were transformed into DH5α bacteria to amplify and then purified.The purified plasmids were identified by gel electrophoresis and sequencing.Results PDGF siRNA expression vectors were successfully constructed and identified by double endonuclease digestion.Sequence analysis of inserted fragment revealed the same sequence as synthesized siRNA oligonucleotides.Conclusions siRNA expression plasmids targeting PDGF have been successfully constructed.     

小鼠日本血吸虫病肝纤维化肝脏CTGF的表达及意义

目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏中的表达状况及意义。方法用昆明小鼠感染尾蚴复制小鼠日本血吸虫病肝纤维化模型;RT-PCR和免疫组化分别检测小鼠肝脏CTGFmRNA和蛋白的表达,免疫组化方法观察各阶段肝脏α-SMA阳性细胞的表达。结果模型组10周时形成典型的肝纤维化,此时模型组小鼠肝脏CTGFmRNA和蛋白表达、α-SMA 细胞数达高峰,10周、14周、18周时与治疗组相比均有明显的统计学差异(P均>0.05);CTGFmRNA和蛋白表达水平与α-SMA 细胞数均呈直线相关性。结论CTGF基因和蛋白表达增高与小鼠日本血吸虫病肝纤维化形成有密切关系;CTGF在小鼠日本血吸虫病肝纤维化形成过程中的作用可能主要通过作用于活化的肝星状细胞来实现的。