斑点酶联免疫吸附试验检测伤寒特异性抗体

目的　验证斑点酶联免疫吸附试验 (Dot -ELISA)检测伤寒抗体的敏感性和特异性。方法　采用Dot -ELISA测定伤寒沙门菌包膜抗原V、菌体抗原O和鞭毛抗原Hd 的特异性抗体 ,并与肥达氏反应相比较。结果　肥达氏反应均为阴性 ,而经Dot -ELISA试验 ,疑似伤寒患者血清中检出 3种抗体阳性 1例 ,非伤寒发热病人血清中检出单项Hd 抗体阳性1例。Dot -ELISA法比肥达氏反应敏感 10倍以上 ,且无交叉反应。结论　该法有较高的特异性和敏感性 ,且操作简单、快速、无需特殊设备 ,宜于临床推广应用。     

脑损伤患者脑脊液和外周血中TNF-α、IL-6测定的意义

目的探讨脑损伤患者脑脊液和血液中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）表达水平的变化及其临床意义。方法采用双抗体夹心ELISA方法测定脑损伤患者急性期内TNF-α、IL-6在脑脊液和血液中相对含量。结果 TNF-α、IL-6在脑损伤急性期有较高表达,与对照组相比有统计学意义,且脑脊液中的表达明显强于外周血液。结论受外伤应激,神经细胞和神经胶质细胞迅速动员机体免疫系统作出反应,产生大量保护性细胞因子,参与损伤局部组织的免疫反应。     

亲水作用色谱-串联质谱法同时测定瓜蒌皮注射液中35种化合物

采用亲水作用色谱-串联质谱的动态多重反应监测模式建立瓜蒌皮注射液中35种化合物的同时定量分析方法。采用ACQUITY XBridge Amide色谱柱分离,以20 mmol·L^-1甲酸铵水溶液(pH 3.0)为流动相A, 20 mmol·L^-1甲酸铵溶液(pH 3.0)∶乙腈(1∶9)混合溶液为流动相B,进行梯度洗脱,采用外标法定量。结果表明, 35种化合物在各自浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数(R²)> 0.998 0,方法回收率范围为77.6%～118.5%。采用建立好的方法测定了10批样品,结果表明瓜蒌皮注射液中γ-氨基丁酸、葫芦巴碱、丙氨酸、苏氨酸、高丝氨酸、瓜氨酸、亮氨酸等成分含量较高,而烟酰胺、甲基琥珀酸、胞嘧啶、胆碱等成分含量较低。本研究为瓜蒌皮注射液的药效物质基础和质量标准提升研究提供了重要参考。     

PCR-SSCP检测白血病患者C/EBPζ基因突变方法学建立

目的建立一种快速、批量筛查白血病患者骨髓C/EBPζ基因外显子突变的多聚酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法。方法用Bio-Rad iCycler梯度PCR仪对25μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶等浓度及反应条件进行优化,并用2%琼脂糖电泳检验产物质量。在此基础上,再对中性聚丙烯酰胺凝胶浓度、上样缓冲液种类、上样量、上样次数及相隔时间、PCR产物稀释倍数、电压、电泳温度等因素进行探讨。同时比较80个健康体检者外周血与20个胸外科良恶性肿瘤患者肋骨骨髓DNA的PCR-SSCP图谱。结果 25μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶浓度分别为1.5～2.0mM和1.0～1.5U,退火温度为54℃～57℃时PCR扩增效率高;应用8%～10%非变性聚丙烯酰胺凝胶,低离子强度(LIS)上样缓冲液,PCR产物稀释4～5倍,上样量为5～10μL,同一块凝胶相隔0.5～1.0小时可上样2次产物,电压为320V挂冰,室温或4℃电泳5～7小时,SSCP分析可得到较为满意的图谱。80例健康体检者外周血与20例正常肋骨骨髓DNA的C/EBPζ基因图谱相同。结论可以用正常体检者外周血DNA代替正常肋骨骨髓DNA行SSCP分析,作为C/EBPζ基因突变检测的对照图谱,两次上样的PCR-SSCP方法节约了试剂、时间、人力,可用于快速大量筛查白血病患者C/EBPζ基因突变。     

RP-HPLC法测定血管紧张素的肽含量及有关物质

建立高效液相色谱法测定血管紧张素的肽含量及有关物质。采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以20 mmol/L磷酸二氢钾(磷酸调节pH值至3.0)为流动相A,乙腈-水(1∶1)为流动相B进行梯度洗脱,流速为1 mL/min,UV检测器波长为220 nm,进样体积20μL。结果在该条件下,血管紧张素在0.10～0.90 mg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),方法的重复性RSD(%)为0.39,平均回收率为98.5%。该方法简单,准确可靠,专属性好,结果稳定,适用于血管紧张素的质量控制。     

瓜蒌皮注射液及其中间体中17种氨基酸含量测定及其变化规律研究

目的 测定瓜蒌皮注射液及其中间体中天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、瓜氨酸、精氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸、酪氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、鸟氨酸、亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸的含量,并分析其变化规律。方法 OPA-FMOC在线衍生化分析采用Waters XBridge C₁₈色谱柱(4.6 mm×100 mm, 3.5μm);流动相磷酸盐缓冲液-[甲醇-乙腈-水(45∶45∶10)],梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温45℃;检测波长262、338 nm。主成分分析、热图分析对10道工序相应中间体的6批样品进行化学模式识别。结果 17种氨基酸在各自范围内线性关系良好(R²>0.998 0),平均加样回收率83.4%～119.5%,RSD 0.91%～7.94%。相同工序不同批次样品较聚集,不同工序相应中间体聚为3组。醇沉和阳离子交换柱对氨基酸组成影响最大。结论 本实验可为瓜蒌皮注射液质量控制的关键因素提供重要参考,以保证终产品的稳定性和均一性。     

基于网络药理学和分子对接探讨瓜蒌皮注射液治疗冠心病的作用机制

[目的]通过网络药理学及分子对接的方法,探究瓜蒌皮注射液治疗冠心病的分子机制。[方法]首先通过查阅文献汇总瓜蒌皮注射液中的主要化学成分,通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、SwissADME数据库筛选其活性成分并预测其作用靶点,与在GeneCards数据库、OMIM数据库中获取的冠心病的相关靶点交集获得核心靶点;其次通过String数据库构建靶点蛋白互作网络,转换格式导入Cytoscape3.7.2软件构建蛋白互作网络和“相关活性成分-潜在作用靶点”网络并分析关键靶点蛋白与活性成分;然后通过Metascape数据库对靶点基因进行基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;最后通过AutoDock Vina软件将活性成分与核心靶点进行分子对接来对网络药理学预测的准确性进行虚拟验证。[结果]研究获得瓜蒌皮注射液治疗冠心病的可能相关活性成分10个,核心靶点7个。瓜蒌皮注射液的活性成分可能通过调控蛋白激酶B抗体（AKT1）、表皮生长因子受体（EGFR）、非受体酪氨酸激酶（SRC）、热休克蛋白90AA1(HSP90AA1)、半胱氨酸蛋白酶3(CA...     

三种检测系统测定血清电解质的方法学对比与评估

目的:对Olympus Au-2700全自动生化分析仪、迅达XD-685电解质分析仪和美国强生VITROS350全自动干式生化仪3种血清电解质(K ,Na ,Cl-)测定方法进行对比与偏差评估.方法:依据美国国家临床实验室标准化委员会EP9-A2文件,每天选取临床标本8份,分别用3种检测系统测定标本K ,Na ,Cl-含量,共测定5天,记录检验结果,检查离散点,计算线性方程和相关系数(r),并对其进行偏倚评估.结果:Olympus Au-2700与VITROS350测K ,Na ,Cl-的r分别为0.999,0.987和0.982, Olympus Au-2700与XD-685测K ,Na ,Cl-的r为0.999,0.983和0.975, VITROS 350与XD-685与测K ,Na ,Cl-的r为0.999,0.987和0.986,三者比较的相关性都较好,临床可接受性评价均未超过CLIA'88允许误差的一半.结论:XD-685,Olympus Au-2700和VITROS350 3种检测系统测定血清电解质K ,Na ,Cl-结果基本一致.同一实验室的检测系统应进行方法对比和偏差评估从而判断其临床可接受性以保证检验结果的可比性.     

促甲状腺激素在不同化学发光分析系统间的对比分析和偏倚评估

目的用电化学发光分析仪Cobase601和化学发光分析仪贝克曼ACCESS-2两种检测系统测定促甲状腙激素（TSH），并对其进行方法对比与偏差评估。方法依据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP9-A2文件方案，每天选取临床样本8份，分别用Cobase601和ACCESS-2两分析系统进行测定，5d共测定40个样本，以Cobase601分析系统为比较方法，ACCESS-2分析系统作为实验方法，对检测结果进行对比分析和偏倚评估。结果Cobase601和ACCESS-2测定aSH的检测结果高度相关（r值为0．987），两种检测方法无统计学意义（P〉0．05）。结论Cobase601和强生ACCESS-2两种检测系统测定TSH结果基本一致，可以接受。