化学合成siRNA体外对柯萨奇B3病毒的影响

目的RNA干扰是近年来研究基因功能的重要工具。本研究是在培养HELA细胞中，体外化学合成siRNA（small interfering RNA）对柯萨奇B3病毒（Coxsackievirus B3，CVB3）的影响，探讨RNA干扰的抗病毒效应与其应用前景。方法根据siRNA靶序列设计原则，设计了一段针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA，并在体外通过化学合成形成siRNA。同时合成一段与CVB基因组序列无关的阴性对照siRNA。用CVB3感染培养HELA细胞，将其分为3组，即siRNA组（n=8），阴性siRNA组（n=8），病毒对照组（n=8），分别观察转染后第1天到第5天的细胞病变，并与未感染CVB3的空白对照组进行比较；采用RT-PCR技术检测感染CVB3各组的病毒RNA片断，观察病毒RNA与内参GAPDH的OD比值；用免疫荧光技术检测各组CVB3蛋白的表达。结果RT-PCR检测各组CVB3病毒5’端非编码区（5’UTR）RNA，siRNA组与阴性siRNA组和病毒对照组比较无明显变化（P〉0．05）；免疫荧光检测各组CVB3病毒蛋白也未见显著差异；细胞病理效应（cytophatic effects，CPE）各组问未见明显差异。结论本文选择针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA未能抑制CVB3病毒复制。     

Rapamycin Modulates the Maturation of Rat Bone Marrow-derived Dendritic Cells

The purpose of the study was to observe the effect of rapamycin （RAPA） on the differentiation and maturation of rat bone marrow-derived dendritic cells （BMDCs） in vitro. BMDCs from Wistar rats were cultured with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor plus interleukin-4 in the presence or absence of RAPA （20 ng/mL）, and stimulated with lipopolysaccharide （LPS） for 24 h before cells and supernatants were collected. Surface phenotype of BMDCs was flow-cytometrically detected to determine the expression of maturation markers, MHC class Ⅱ and CD86. Supernatants were analyzed for the production of IL-12 and IFN-γ cytokines by using ELISA. BMDCs were co-cultured with T cells from Lewis rats and mixed lymphocyte reaction was assessed by MTT method. The morphology of BMDCs stimulated with LPS remained immature after RAPA pretreatment. RAPA significantly decreased the CD86 expression, impaired the IL-12 and IFN-γ production of BMDCs stimulated with LPS, and inhibited the proliferation of allogeneic T cells. In conclusion, RAPA can inhibit the maturation of BMDCs stimulated with LPS in terms of the morphology, surface phenotype, cytokine production, and ability of BMDCs to stimulate the proliferation of allogeneic T cells in vitro.     

基于循证医学理念提升临床教学质量探讨

随着我国高等医学教育的迅速发展,其规模效率的弊端也日益突显,这主要表现在师资队伍的建设滞后、临床教学资源缺乏、临床一线教师抗风险能力较弱等方面。为此,基于循证医学的教育理念,对现有临床教学方法进行探讨,这不仅有利于医学生自主学习能力的培养,而且也有利于他们在今后的执业生涯中能自主收集、分析和使用临床证据,更好的为患者服务。     

非洛地平对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶的影响

目的:探讨钙通道阻断剂(CCB)非洛地平对载脂蛋白E基因敲除(apoEKO)小鼠动脉粥样硬化斑块及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸[NAD(P)H]氧化酶的影响。方法:apoEKO小鼠随机分为普通饮食组、高胆固醇饮食组、高胆固醇饮食加非洛地平组。无创血压系统测小鼠血压;内眦动脉取血检测血清TC和TG水平;冷冻切片光镜下定位主动脉根部,油红O染色评估斑块大小;实时定量PCR和Western blot方法检测主动脉中NAD(P)H氧化酶亚基p47phox和Rac-1表达。结果:高胆固醇饮食组小鼠血压没有明显变化,血脂明显升高(P<0.01),且斑块面积明显高于普食组(P<0.01);非洛地平可以明显减小斑块面积(P<0.01),同时还可以降低NAD(P)H氧化酶亚基p47phox和Rac-1表达(P<0.01)。结论:非洛地平可能通过阻断氧化应激反应抑制动脉粥样硬化发生发展。     

厄贝沙坦对高胆固醇饮食载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块及NAD(P)H氧化酶的影响

目的探讨血管紧张素受体拮抗剂(ARB)厄贝沙坦对载脂蛋白E基因敲除(ApoE KO)小鼠动脉粥样硬化斑块及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸[NAD(P)H]氧化酶的影响。方法ApoE KO小鼠随机分为普食组、高胆固醇饮食组、高胆固醇饮食+厄贝沙坦组,每组15只,分别予蒸馏水、蒸馏水、厄贝沙坦10mg·kg-1.d-1灌胃12wk。无创血压系统测小鼠血压;内眦动脉取血检测血清胆固醇和甘油三脂水平;冰冻切片光镜下定位主动脉根部,油红O染色评估斑块大小;实时定量PCR和Western blot方法检测主动脉中NAD(P)H氧化酶亚基p47phox和Rac-1表达。结果高胆固醇饮食组小鼠血脂明显升高(P<0.01),且斑块面积明显高于普食组(P<0.01);厄贝沙坦可以明显减小斑块面积(P<0.01),同时还可以降低NAD(P)H氧化酶亚基p47phox和Rac-1表达(P<0.01)。结论血管紧张素受体拮抗剂厄贝沙坦可能通过阻断氧化应激反应抑制动脉粥样硬化发生发展。     

肾癌治疗中索拉非尼相关性腹泻的临床观察

目的 观察索拉非尼治疗肾癌过程中腹泻的发生、治疗及其转归,探讨腹泻对索拉非尼疗效的预测作用.方法 对肾癌患者给予索拉非尼治疗,观察腹泻的发生,并进行分级,对症治疗后观察其转归,采用单因素分析法评估腹泻对索拉非尼疗效的预测作用.结果 33例肾癌患者采用索拉非尼治疗,腹泻发生的中位时间为13天(4～65天),发生率为33.3％(11/33),其中90.9％的患者为1～2级,对症治疗常可缓解.因腹泻导致索拉非尼减量l例,因腹泻终止索拉非尼治疗1例.索拉非尼的疗效在有或无腹泻发生的患者间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 索拉非尼治疗肾癌时,相关性腹泻的发生率较高,但多为轻、中度,对症治疗效果好.腹泻对索拉非尼疗效未能显示出预测作用.     

索拉非尼治疗晚期肾癌患者33例长期临床观察

目的评估索拉非尼治疗晚期肾癌的长期疗效和安全性。方法对33例晚期肾癌患者给予索拉非尼口眼治疗,观察其肿瘤控制及长期生存状况、不良反应的发生、分级及转归。结果 33例晚期肾癌患者口服索拉非尼治疗,中位随访时间56周(12～98周)。其中完全缓解(CR)1例(3.0%)、部分缓解(PR)5例(15.2%)、疾病稳定(SD)21例(63.6%)、疾病进展(PD)6例(18.2%)。评估客观反应率(ORR)为18.2%,疾病控制率(DCR)为81.8%,中位无进展生存(PFS)时间为15.0个月(95%CI 6.5～23.5),中位总生存(OS)时间为24.0个月(95%CI 7.6～40.4)。主要不良反应包括手足皮肤反应、腹泻、高血压、皮疹、脱发和疲乏,除手足皮肤反应外,其他多为1～2级,对症处理大多可以缓解。结论索拉非尼治疗晚期肾癌的近期及远期疗效良好,长期使用不良反应可以耐受,安全性较好。     

慢性心力衰竭患者血清白细胞介素-12及白细胞介素-18水平及意义

目的:检测慢性心力衰竭患者(CHF)外周血白细胞介素(IL)-12和IL-18的水平并探讨其意义.方法:CHF患者72例,按照NYHA心功能分级,分为HF1(NYHAⅡ～Ⅲ级),HF2组(NYHA Ⅳ级).按照病因分类,分为缺血性心脏病(IHD)组(43例)和非缺血性心脏病(NIHD)组(29例).选取29例健康志愿者作为正常对照组(C组).采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-12和IL-18的水平,用彩色多普勒超声诊断仪测定左室舒张末期内径(LVEDd)和左室射血分数(LVEF).结果:HFI、HF2、IHD和NIHD组IL-12的水平显著升高,分别为(34.56±19.10),(35.12±15.18),(31.18±7.80),(32.73±11.54)ng/L,与C组(28.73±13.43)ng/L比较,均差异有统计学意义(P＜0.05),IL-18的水平分别为(39.50±5.66),(46.76±12.66),(40.58±13.10),(42.53±6.16)ng/L,明显高于C组(31.82±5.79)ng/L,均差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),HF2组血清IL-18水平显著高于HF1组(P＜0.05).与C组比较,HF1、HF2、IHD和NIHD组的LVEDd明显增大.LVEF显著降低.IL-12水平与LVEDd呈低度正相关(P＜0.01),IL-18水平与LVEDd呈中度正相关(P＜0.01),与LVEF呈中度负相关.结论:IL-12和IL-18在CHF患者血清中表达升高;IL-12的水平与患者基础病因和心功能均无明显相关性;IL-18的水平与CHF的基础病因无明显相关性,但与患者的CHF程度呈正相关.     

多聚ADP核糖合成酶抑制剂降低高同型半胱氨酸血症诱发ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块面积

目的:检测多聚ADP核糖合成酶[Poly (ADP-ribose) polymerase,PARP]抑制剂3-aminobenzamide (3-AB)是否能够降低由高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia, Hhcy)诱发ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的斑块面积.方法:健康6周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为普通饮食组(n=30)或高甲硫氨酸饮食组(n=30),每组再分别给予隔天腹腔注射10 mg/kg 3-AB(n=20)或0.9%氯化钠(n=20),持续12周.12周末,检测血脂及血浆同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)含量,分离心脏及主动脉,测量斑块面积,检测斑块局部NADPH氧化酶亚单位p47phox含量、PARP活性及表达.结果:高甲硫氨酸饮食诱导ApoE-/-小鼠产生Hhcy,促进氧化应激相关p47phox表达及PARP活化,显著增加斑块面积;PARP抑制剂3-AB虽然对普食组ApoE-/-小鼠抑制效果不明显,却能在不影响血浆Hcy和脂质含量的情况下,抑制Hhcy诱导的PARP活化,显著降低其粥样斑块面积达40%.结论:PARP抑制剂3-AB显著降低Hhcy诱导的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块面积,可作为有效抑制粥样斑块进程的治疗方法之一.     

索拉非尼在晚期肾癌治疗中所致高血压及其处理

目的:观察索拉非尼治疗晚期肾癌期间高血压的发生及其处理,评估高血压对索拉非尼疗效的预测作用.方法:对30例晚期肾癌患者给予索拉非尼治疗,观察不良反应高血压的发生情况,对高血压进行分级并采取相应的降压治疗措施,观察索拉非尼所致高血压对降压治疗的反应,并采用单因素分析评估高血压对索拉非尼疗效的预测作用.结果:30例晚期肾癌患者服用索拉非尼后,发生高血压的中位时间为15d (6～58d),高血压发生率为30.0％ (9/30),其中大多数(8/9,88.9％)为1～2级.降压治疗后血压控制稳定,未出现高血压危象及相关心脏事件.无患者因严重高血压导致索拉非尼治疗减量或中断.发生高血压对索拉非尼疗效的预测无统计学意义(x2=0.635,P=0.637).结论:索拉非尼治疗晚期肾癌的高血压发生率较高,但以轻至中度为主,降压治疗效果较好.高血压对索拉非尼疗效无预测作用.