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目的:利用昆虫杆状病毒表达系统表达早期快速反应基因5(IER5)蛋白,为后续蛋白质结晶及探索蛋白质三级结构提供线索。方法:以HeLa细胞cDNA为模板扩增出IER5基因片段,构建重组转移质粒pFastBac1-IER5;重组转移质粒经双酶切及测序鉴定后转化至感受态细胞DH10Bac,以获得重组的穿梭质粒rBacmid-IER5;将重组穿梭质粒感染Sf9细胞,待细胞出现明显病变时收集重组杆状病毒;用间接免疫荧光、SDS-PAGE及Western blot以及对表达产物进行分析鉴定。结果:重组转移质粒pFastBac1-IER5经双酶切后得到与预期相同的2条条带;重组穿梭质粒rBacmid-IER5经PCR鉴定在3 300 bp左右出现一条特异性条带;间接免疫荧光结果提示IER5蛋白在Sf9细胞中得到表达;SDS-PAGE结果显示,表达产物的相对分子质量约为48 k,Western blot结果表明表达产物能与IER5抗体特异性结合。结论:利用昆虫-杆状病毒表达系统成功表达了人IER5蛋白,获得了体外表达重组IER5蛋白的相对分子质量、溶解性等物理化学特性。 相似文献
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目的:研究根际促生菌——多粘类芽孢杆菌对油菜中锶富集和转移的影响。方法:实验分5组,设置4个不同锶浓度(1、2、3、4 mmol/L)处理组和1个对照组(水培养液)。利用水培方式培育油菜,水培养液中添加多粘类芽孢杆菌(0.333 g/L),于添加锶和菌后3个时间点(7、14、21 d)收获油菜,用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-AES)分别测定油菜的根和茎叶中锶含量,并计算转移系数和富集率。结果:与对照组相比,多粘类芽孢杆菌存在时,油菜根部和茎叶中88Sr含量随着培养液中锶浓度增高和作用时间的延长而升高(P < 0.05,油菜根部在1 mmol/L锶+菌作用21 d时除外),且油菜茎叶中的88Sr含量大于油菜根部(P < 0.05);多粘类芽孢杆菌使88Sr的转移系数增加、富集率降低(P < 0.05),可促进88Sr从根到茎叶的转移。4个处理组对88Sr的转移系数均增加(P < 0.05),且转移系数均在21 d达到最高。结论:多粘类芽孢杆菌能够影响油菜对锶的转移和富集,可降低油菜根和茎叶部分对88Sr的富集率,促进88Sr从根到茎叶的转移。 相似文献
3.
目的 构建GCF低表达的宫颈癌HeLa细胞系,在60Co γ射线照射下初步探究其细胞增殖以及调控宫颈癌放射敏感基因IER5的表达。 方法 经带有荧光标记的GCF低表达的质粒稳定转染HeLa细胞, G418筛选,蛋白印迹法、实时定量PCR法鉴定得到GCF-shRNA-HeLa单克隆细胞系。倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法探究不同剂量照射后的细胞增殖情况,在不同照射剂量下用蛋白印迹法检测GCF-shRNA-HeLa及对照细胞中IER5蛋白的表达情况。 结果 成功构建稳定表达的GCF-shRNA-HeLa单克隆细胞系,显微镜下观察GCF-shRNA-HeLa细胞比正常HeLa细胞体积小,细胞间隙较大,其中梭形细胞较多。蛋白印迹法及实时定量PCR验证了GCF-shRNA-HeLa的蛋白表达及mRNA转录水平均低于对照组(P<0.05)。辐射情况下实验结果显示在同一照射剂量、同一时间下GCF-shRNA-HeLa细胞比control对照细胞增殖缓慢(P=0.014)。不同剂量照射情况下蛋白印迹法检测HeLa细胞、control-shRNA-HeLa与GCF-shRNA-HeLa细胞IER5蛋白表达情况,结果同一辐照剂量下GCF沉默的细胞系中IER5的表达量比对照细胞高, 4Gy照射的GCF-shRNA-HeLa的IER5表达量最高(P<0.05)。 结论 本实验构建了低表达GCF的HeLa细胞系,初步探讨GCF作为IER5基因抑制性转录因子的作用。结合临床基因靶向治疗,可寻求可以降低GCF表达的方式,通过上调IER5表达这一双效途径来加速宫颈癌细胞凋亡。 相似文献
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菠菜和小白菜对核素锶的吸附与富集作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究菠菜和小白菜对核素锶(Sr)的吸附与富集作用,探索核素锶从土壤到植物中的转移过程和特征,寻找核素锶在土壤-植物系统中的迁移规律。方法:选用稳定性核素88Sr代替放射性核素90Sr进行室内盆栽种植菠菜和小白菜。试验共分6个组即5个试验组和1个对照组,每组设3个平行样。试验组分别为盆栽土壤中锶元素本底浓度的1.5、2.0、2.5、3.0和3.5倍,其含量分别为318.67、478.00、637.33、796.67、956.00 mg/kg。对照组土壤在避光通风处自然风干,捣碎过30目筛后直接应用。试验期间定期浇灌去离子水。在种植的第30天取样,分别剪取植株地上(茎、叶)部分和地下根部,烘干、粉碎、消化后定容至10 mL。采用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)检测两种蔬菜和土壤中核素锶、钙和铁的含量,并计算两种蔬菜中锶与钙、铁元素之间的相关性及对锶的富集率(CR)。结果:经不同浓度核素锶处理后,与对照组相比,两种蔬菜中核素锶的含量除了低浓度组(318.67 mg/kg)外,其他各组均显著升高,且随着浓度增加而增加(P<0.05),高浓度组(796.67和956.00 mg/kg)中菠菜锶含量显著高于小白菜(P<0.05);小白菜茎叶部分锶含量与钙元素含量呈负相关(r=-0.198),菠菜根部锶含量与铁亦呈负相关(r=-0.271),其余均为正相关关系;两种蔬菜对核素锶的富集率,除了菠菜低浓度组(318.67 mg/kg)和小白菜低浓度组(318.67和478.00 mg/kg)外,其他各组与对照组相比均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);两种蔬菜之间富集率相比,在高浓度组(796.67和956.00 mg/kg)中菠菜对锶的富集率显著高于小白菜(P<0.05)。结论:菠菜和小白菜对稳定性核素锶均有较强的富集和吸附作用,且高浓度组的菠菜对锶的富集率显著高于小白菜。 相似文献
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目的:利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,构建稳定敲降NF-YB基因的HeLa细胞系。方法:设计shRNA-NF-YB引物,利用分子克隆技术构建H1/GFP-Puro-shRNA-NF-YB质粒,转染293T后收集病毒感染HeLa细胞;用嘌呤霉素筛选细胞得到稳定敲降细胞株;利用Western blot和实时荧光定量PCR对细胞系进行鉴定。结果:构建的质粒经测序后与设计的引物对比序列一致,Western blot和实时荧光定量PCR结果表明构建细胞的NF-YB蛋白和mRNA表达抑制效果明显。结论:本实验成功构建了NF-YB-shRNA-HeLa细胞系,获得了特异性NF-YB基因敲降的HeLa细胞。 相似文献
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利用RNA干扰技术构建IER5-SiRNA-Hela细胞系 总被引:2,自引:0,他引:2
目的观察小干扰RNA(siRNA)转染Hela细胞后,对IER5基因抑制效果,筛选出高效的siRNA转染质粒。方法利用siRNA设计软件,将设计好的RNA片断插入到siRNA表达质粒载体PsilencerTM 3.1-H1 hygro中,测序正确后转染至Hela细胞中。利用Real-time PCR的方法 ,测定siRNA对Hela细胞中IRE5的抑制效果。结果在mRNA水平及Western blot测试,IER5-siRNA-Hela细胞的IER5基因mRNA表达抑制效果明显。从细胞形态上讲,IER5-siRNA-Hela细胞与正常Hela细胞相比,IER5-siRNA-Hela细胞比Hela细胞体积大。结论本实验成功的获得了特异性抑制IER5基因的IER5-siRNA-Hela细胞系。 相似文献
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基于网络平台的科研管理软件的开发 总被引:1,自引:0,他引:1
基于网络平台的院级科研管理信息系统,主要任务是针对科研项目与科研成果等信息进行高效率的网络传输、处理与输出,其中包括科研信息发布、科研项目与科研成果的管理、实验室建设等主要内容.科研项目管理是整个科研管理软件的重要组成部分,其主要功能是实现在网络上对科研项目进行高效率处理,并与科研仪器管理、科研信息管理和学生工作管理共同构成了科研管理软件的有机整体.本论文运用数据库技术和网络技术,开发基于数字化校园的高校科研管理信息系统,对实现首都医科大学科研信息管理的现代化,提高科研管理水平,科技创新服务有重要意义. 相似文献
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利用大鼠脑缺血及再灌注模型 ,探讨血液粘度、红细胞变形性指标 (DI)在脑缺血及再灌注情况下的变化。实验表明 :在缺血过程中 ,主要由于RBC的代偿作用 ,全血粘度减低 ,RBC变形性增强 ;在再灌注过程中 ,全血与血浆的粘度都升高 ,到再灌注 1 2h发现有恢复正常的趋势 ;说明在缺血、缺氧情况下 ,三磷腺苷减少及一些化学因子的释放促使了这种改变 ,长时间的再灌注会起到修复作用。随着切变率的增加 ,同组实验组中DI的测量值均呈指数函数递增 ,对此建立该模型下的数学方程 :φ =a +b×e[-c(x-x0 ) ] ;同时对同一切变率不同实验组的RBC变形性也做了研究 ,发现DI变化不仅与缺氧及代谢性酸中毒有关 ,而且与RBC自身的特性有关。 相似文献
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目的研究水杨酸、对甲氧基苯甲酸和甲硝唑等化合物拉曼光谱的波长选择性。方法分别采用近红外、可见和紫外区3种波长的激光激发获得不同的拉曼光谱,受照样品包括水杨酸、对甲氧基苯甲酸以及临床常用药物甲硝唑。结果水杨酸、对甲氧基苯甲酸的水溶液在可见和近红外激发下无法获得任何拉曼信息,但在紫外激发下可获得信息丰富的拉曼光谱,且与其固体拉曼谱对应良好。而甲硝唑在紫外激发下没有明显的拉曼峰但在近红外和可见光激发下能获得一致的拉曼信息。结论水杨酸、对甲氧基苯甲酸水溶液的拉曼光谱证明了紫外激发的优越性,甲硝唑的拉曼光谱提示样品对激发波长的选择性。 相似文献
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