电子转移途径中芳香族氨基酸的引入提高了细胞色素P450s的催化性能（英文）

细胞色素P450s是用于生物合成的多功能催化剂.在P450催化循环中,需要两个电子来还原血红素铁,并通过电子转移途径(eTPs)激活随后的还原,该步骤是反应的限速步骤.本文重新设计了巨大芽孢杆菌P450 BM3的e TPs,大幅提高了其催化性能.通过在P450 BM3的e TP中引入芳香族氨基酸,“最佳”变体P2H02(A399Y/Q403F)的催化效率比P450 BM3野生型催化效率提高了12.9倍(k_cat/K_M从65.8 L mol^-1 s^-1提高到913.5 L mol^-1 s^-1).分子动力学模拟和电子传递分析表明,在辅因子FMN和血红素之间引入的芳香族氨基酸可以显著提高电子转移速率和酶催化性能.同时,在电子传递途径中引入酪氨酸可以保护P450的催化中心,使其避免被氧化性中间产物所破坏,从而提高其催化效率.此外,引入芳香族氨基酸的策略被证明对其他P450(如CYP116B3)同样有效,改造后的酶表现出显著提高的催化效率.综上,本文策略有望拓展到其...     

比色法测定Annexin Ⅴ变体冻干品中的氯化亚锡含量

测定自制的Annexin Ⅴ变体冻干品中的氯化亚锡含量.在酸性条件下,用钼酸钠-硫氰酸钾比色法测定,λ=460nm.亚锡在5-50μg内线性关系良好,低、中、高三浓度平均回收率分别为102.9％,99.9％,101.0％;RSD分别为6.4％,8.1％,5.1％（n=6）.用比色法测定Annexin Ⅴ变体冻干品中亚锡含量,方法简便、迅捷、试剂易得,可用于冻干品中氯化亚锡的质量控制.