恐惧应激对大鼠睾丸中Annexin5表达的影响

目的观察大鼠应激条件下睾丸组织中Annexin5表达的变化。方法建立SD大鼠的恐惧应激模型，分别取急性应激、急性对照、慢性应激、慢性对照SD大鼠睾丸，免疫组织化学和Western blotting分析Annexin5免疫定位和蛋白表达。结果急性应激组与对照组相比，免疫组化显示Annexin5都定位在间质细胞、支持细胞和成熟的精子头部，Western blotting分析发现Annexin5的表达降低了10．8％；慢性应激组与对照组相比，免疫组化结果显示Annexin5在精子头部的定位逐渐减少，应激1w和2w组，未见到Annexin5定位于精子头部，到了应激的3w和4w，发现Annexin5重新定位于精子的头部，而在间质细胞和支持细胞上的定位模式没有显著变化。Western blotting分析发现Annexin5的表达降低了17．4％。结论大鼠睾丸Annexin5参与了应激过程，急性应激条件下Annexin5表达降低。随着应激时间的延长，在慢性应激条件下，Annexin5的表达由减少之后而开始有缓慢增加。     

恐惧应激对雄性大鼠生殖激素的影响

目的：观察比较不同恐惧应激状态下,大鼠血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）和睾酮（T）的变化。方法：建立SD大鼠的急性应激、亚急性应激和慢性应激模型,分别在麻醉后心脏取血,酶联免疫分析法测定并比较各实验组及相应对照组大鼠血清FSH、LH和T的含量。结果：急性应激组大鼠血清FSH、LH和T水平略高于对照组大鼠,但无显著差异（P〉0.05）;亚急性应激组大鼠血清FSH、LH和T水平均低于其对照组,但都无显著差异（P〉0.05）;慢性应激组大鼠血清FSH、LH和T均低于对照组大鼠,其中LH水平的变化有显著差异（P〈0.05）;而T水平有极显著差异（P〈0.001）。结论：急性应激、亚急性应激和慢性应激能影响大鼠血清FSH、LH和T浓度,尤其慢性应激引起的体内激素的变化最大,提示应激对大鼠生理功能的维持以及生殖保护具有干扰作用。     

解脲脲原体感染与精子DNA完整性的相关性的研究

目的:探讨不育男性解脲脲原体(Uu)感染与精子核DNA完整性及精液各参数的相关性。方法:95例不育症患者的精液用Uu培养液进行解脲脲原体的培养,按WHO的标准,用计算机辅助精液分析系统(CASA)进行精液各参数的分析,然后通过精子低渗肿胀实验,吖啶橙(AO)荧光染色检测精子膜的完整性和精子核DNA的完整性。结果:Uu阳性40例,Uu阴性55例,Uu阳性组与阴性组比较,精子核DNA完整性与精子的密度、a+b级精子百分率以及精子的肿胀率都有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。同时Uu阳性组与阴性组的精子核DNA完整性与精子的肿胀率存在显著的正相关性(r=0.438,P=0.014;r=0.438,P=0.01)。结论:Uu感染能够降低精子膜的完整性以及精子核DNA的完整性,这可能是Uu致男性不育的又一因素。     

10家临床实验室定值冰冻人血清校准前后γ-GT测定结果分析

由多家实验室用参考方法对覆盖该测定方法测量范围的多份新鲜混合血清进行检测获得参考值结果,用于校准不同检测系统是酶学测定标准化工作的重要部分,可提高临床酶学活性测定的准确性和实验室间的可比性。本研究对贵阳地区10家二级以上医院的生化实验室,采用由北京大学第一医院和北京中生公司依据IFCC推荐方法联合定值γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）冰冻人血清校准γ-GT不同检测系统,分析校准前后不同检测系统-GT测定结果室间变异及其与参考方法测定间的偏差。以证明采用冰冻人血清统一校准γ-GT的可行性。材料：γ-GT校准品：-70℃冰冻保存人血清,用定值γ-GT活性浓度为74.16U/L,0.5ml/eppendorf管分装。血清样本：5支不同浓度冰冻混合人血清样本,参考方法定值γ-GT活性浓度,依次为43.01、74.16、125.47183.36、258.84U/L,0.5ml/eppendorf管分装,-70℃冰冻密封保存。贵阳市10家二甲以上医院生化实验室的10套检测系统。方法：参考方法定值：用参考方法测定制备分装的6瓶酶校准品,由北京两家酶学参考实验室共同定值,每瓶重复测定2次,取其平均值作为酶校准品定值,5个不同浓度混...     

促性腺激素释放激素激动剂对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD的表达影响

目的：探讨阿拉瑞林（GnRHa）对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V（annexin5）和3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）的表达的影响。方法：建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用不同终浓度的GnRHa（分别为1×10^,1×10^-6,1×10^-1moL／L）作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexig 5和3β-HSD的表达变化情况．结果：间质细胞经GnRHa处理后,Western Blot结果显示,与对照组相比,当GnRHa终浓度为1×10^-5 moL／L时,anenxin5的表达量显著升高了69．2％（P〈0．01）,3B—HSD的表达量也升高了25．2％（P〈0．05）;当GnRHa的终浓度为1×10^-6mol／L和1×10mol／L时,anenxin5的表达量分别升高了61．5％（P〈0．05）和16．64％（P〉0．05）,3β-HSD的表达量则无显著性变化,分别升高了7．7％（P〉0．05）和2．22％（P〉0．05）．结论：GnRHa在原代培养的睾丸问质细胞中,对annexin5,3β-HSD的表达具有调节作用。     

孕酮调节谷胱甘肽S-转移酶Omega-1在小鼠妊娠早期子宫腔上皮及腺上皮中的表达

目的研究谷胱甘肽S-转移酶Omega-1(Gsto 1)在小鼠胚胎着床过程中的表达和孕酮的调节。方法105只CD1小鼠,分为正常妊娠模型和类固醇激素处理模型。正常妊娠模型中,收集妊娠第1~第5天子宫,采用Real-time PCR、原位杂交和Western blotting 3种方法检测Gsto1的表达变化;类固醇激素处理模型均采用卵巢切除2周后的小鼠,又分为雌孕激素处理组、孕酮处理不同时间组和孕酮受体拮抗剂Ru486处理组,所有组中的对照均用芝麻油处理。雌孕激素处理组中,收集芝麻油、雌激素、孕酮、雌激素加孕酮分别处理12h后的子宫;孕酮处理不同时间组中,收集芝麻油和孕酮分别处理1、3、12、24 h后的子宫;Ru486处理组中,收集芝麻油、Ru486、孕酮、Ru486加孕酮分别处理12 h后的子宫。类固醇激素处理模型使用Real-time PCR和Western blotting两种方法检测Gsto1的表达变化。结果 Gsto1主要在妊娠第1~4天的子宫腔上皮及腺上皮中表达,其中,妊娠第1~3天表达量较高,第4天表达量较低,第5天着床点和非着床点均不表达。孕酮诱导Gsto1的表达,雌激素不能诱导Gsto1的表达,并能抑制孕酮对Gsto1的诱导。Ru486降低孕酮对Gsto1的诱导,孕酮处理1、3、12 h均促进Gsto1的表达,但作用24 h后,抑制Gsto1的表达。结论 Gsto1在小鼠妊娠早期子宫腔上皮及腺上皮中表达,雌激素能够拮抗孕酮对Gsto1的诱导,孕酮可以通过孕酮受体调节Gsto1的表达,并且具有短时调节作用。     

急性疼痛应激对雄性SD大鼠生殖相关指标的影响

目的:多种应激方式均能抑制生殖功能,建立甲醛诱导的急性疼痛模型,观察急性疼痛应激对雄性SD大鼠精子计数、生殖器官重量及睾丸内3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)表达的影响,并对急性疼痛应激状态下雄性大鼠生殖系统伤害程度进行评价,为寻找应激状态下保护生殖系统的方法提供依据. 方法:单侧后足底皮下注射5%甲醛0.2ml,建立SD大鼠急性疼痛应激模型,分别取对照组和急性疼痛应激组SD大鼠睾丸、附睾进行称重,并对附睾尾精子计数.苏木精-伊红染色观察睾丸结构.免疫组化染色后经Imageproplus 6.0软件分析平均光密度,比较不同组大鼠睾丸内3β-HSD的表达. 结果:与对照组相比,应激组大鼠体质量、睾丸质量、睾丸指数、附睾尾重和精子计数无统计学意义(P>0.05).附睾指数在甲醛注射后1、6、24h显著高于对照组(P<0.05).苏木精-伊红染色显示睾丸形态结构没有明显差异.免疫组化平均光密度分析显示,与对照组相比,在甲醛注射后1h,3β-HSD平均光密度显著低于对照组(P<0.05),其余各时间段均无明显差异(P>0.05).比较甲醛注射后不同时间段3β-HSD表达情况,发现注射后1、6、24、72h,随时间变化3β-HSD表达先降低再逐渐升高,且注射后1h较72h差异显著(P<0.05). 结论:甲醛诱导的急性疼痛应激对睾丸、附睾体质量及生精功能无明显影响,而对睾丸分泌睾酮功能主要表现为影响睾丸内3β-HSD的表达.急性疼痛应激对睾丸分泌功能的影响能在机体内稳态机制调节下恢复.     

去颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5表达的影响

目的：观察切除颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5（annexin 5）表达的影响.方法：切除大鼠颌下腺,分别于术后14、28和42d处死大鼠,Western blotting和免疫组织化学分析大鼠睾丸annexin 5表达及分布的改变.结果：Western blotting结果显示,与对照组相比,切除颌下腺14d和28d后,实验组大鼠睾丸annexin 5的表达分别升高了27.5%和35.2%,具有显著性差异（P＜0.05,P＜0.01）;切除颌下腺42d后,实验组大鼠睾丸annexin 5又恢复到与对照组几乎相同的水平.免疫组织化学显示,annexin 5在大鼠睾丸中的分布未见明显改变,但实验组annexin 5免疫组化显色较深,说明annexin 5的表达升高,这与Western blotting的结果基本一致.结论：颌下腺切除影响大鼠睾丸annexin 5的表达,颌下腺切除早期（14、28 d）颌下腺分泌的某些生物活性物质缺乏,而造成睾丸内annexin 5表达的升高.颌下腺切除后期（42 d）,机体内因颌下腺切除而缺乏的某些物质在体内又重新得到了补偿,对睾丸annexin 5的影响消除,睾丸annexin 5的表达也恢复到正常水平.其内在具体机制尚待进一步阐明.     

消炎痛Vcu200 IUD减少月经过多的机理

自１９９２年１１月至１９９５年６月，对４６例放置无消炎痛ＶＣｕ２００ＩＵＤ及２４例含消炎痛ＶＣｕ２００ＩＵＤ妇女的子宫内膜中６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α、ＴＸＢ２及纤溶指标包括ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ、ＰＫ、ＰＬＧ、Ｄ－Ｄ及ＦＤＰ的水平进行测定，同时作光、电镜观察置器后ＩＵＤ对子宫内膜的影响。结果：１．无消炎痛ＶＣｕＩＵＤ３月组置器后６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α／ＴＸＢ２比值明显高于置器前（Ｐ＜０．０５），ｔ－ＰＡ、ＰＫ、ＰＬＧ、Ｄ－Ｄ及ＦＤＰ均非常明显低于置器前水平（Ｐ＜０．ｏ１～０．００１）。２．无消炎痛ＶＣｕＩＵＤ＞６月组置器后只ｔ－ＰＡ、ＰＫ、ＦＤＰ明显低于置器前水平（Ｐ＜０．０１～０．００１），其余指标均无统计学差异。３．放置合消炎痛ＶＣｕＩＵＤ３个月后６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α、ＴＸＢ２及各项纤溶指标与置器前比均无统计学意义。４．子宫内膜形态学变化与置器前相比，表现为血管内血栓形成减少及末梢小血管腔扩大。根据上述结果，置器后内膜中６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α／ＴＸＢ２值升高，与ｔ－ＰＡ水平下降可能是置器后月经过多的主要原因，尤以前者起主导作用。本文并对消炎痛ＩＵＤ减少月经过多的作用机理进行了讨论。     

荧光定量聚合酶链反应检测去颌下腺大鼠睾丸Bcl 2和Bax mRNA的改变

目的观察切除颌下腺对大鼠睾丸Bax和Bcl 2 mRNA表达的影响。方法切除大鼠颌下腺,分别于术后14、28和42 d处死大鼠,提取睾丸总RNA,反转录,设计特异性引物和Taqman探针,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Bax和Bcl 2 mRNA的改变。结果随着颌下腺切除时间的延长,实验组大鼠睾丸Bax和Bcl 2 mRNA的比值显著升高,与对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论颌下腺切除大鼠睾丸Bax和Bcl 2 mRNA比值明显升高,提示颌下腺切除所致的大鼠睾丸生精细胞的凋亡可能是由Bax和Bcl 2介导的线粒体途径进行,但Fas/FasL是否参与该凋亡过程还有待进一步研究。