新型冠状病毒RDRP的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析北大核心CSCD

目的应用原核表达系统制备重组新型冠状病毒依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RDRP),纯化后免疫新西兰大白兔获得高效价多克隆抗体,并对RDRP进行生物信息学分析。方法鉴定正确的pET-22b RDRP质粒转化表达载体,诱导表达RDRP蛋白,纯化后免疫大白兔,间接ELISA法检测其多克隆抗体效价。运用Expasy PortParam、SWISS MODEL等生物信息学软件对RDRP蛋白的等电点、分子质量、亲疏水性等理化性质、蛋白的空间结构、跨膜结构域、磷酸化位点、蛋白信号肽进行预测;构建系统进化树,进行亲缘性分析。结果pET-22b RDRP重组质粒酶切鉴定正确,经诱导重组蛋白以包涵体的形式表达,8 mol/L尿素梯度复性后得到纯度高的RDRP蛋白。用纯化蛋白免疫大白兔,间接ELISA检测血清抗体效价>1∶256000,Western blot检测抗体具有良好特异性。经生物信息学分析RDRP蛋白为亲水性,非跨膜蛋白,且无信号肽。11种病毒系统进化树显示,SARS-CoV-2 RDRP蛋白与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近。结论成功获得重组SARS-CoV-2 RDRP蛋白,用该蛋白免疫大白兔能刺激产生高效价的多克隆抗体。预测与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近,为亲水性非跨膜蛋白,为研究SARS-CoV-2 RDRP蛋白的生物学功能及其疫苗的制备奠定了基础。     

消肿止痛散外敷治疗急性软组织扭挫伤158例

目的 :观察活血祛瘀、清热凉血类中药配伍治疗急性软组织扭挫伤的疗效。方法 :采用自拟消肿止痛散 (乳香、没药、桃仁、红花、赤芍、栀子、白芷、鸡血藤 )外敷治疗急性软组织扭挫伤 1 5 8例。结果 :总有效率 98.7%。提示 :本方法对本病有活血化瘀 ,行气通经 ,消肿止痛 ,清热凉血 ,祛湿散结 ,舒筋活络的功效     

骨炎膏对大鼠感染性创面TNF-α和IL-6表达的影响

目的 探讨骨炎膏对大鼠感染性创面愈合的影响及可能作用机制。方法 选取72只SPF级SD大鼠,随机取18只作为正常创面组,其余大鼠采用外科手术联合接种金黄色葡萄球菌液方法制备感染性创面模型。将造模成功大鼠随机分为感染创面组、骨炎膏组、京万红组,每组18只。于制备创面后第1天开始,正常创面组及感染创面组大鼠创面予生理盐水棉球擦拭后无菌纱布包扎固定,京万红组创面涂抹适量京万红软膏(约2 g)后予无菌纱布包扎固定,骨炎膏组创面给予涂抹骨炎膏无菌纱布包扎固定,每天换药1次,直至创面完全愈合。观察并记录各组大鼠造模后第3天、第7天、第14天创面愈合面积及大鼠创面完全愈合时间;分别于造模后第3天、第7天、第14天随机取各组大鼠创面组织,使用酶联免疫法(ELISA)检测创面组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果 造模后第7天、第14天,骨炎膏组和京万红组大鼠创面愈合率均明显高于感染创面组(P均<0.05),且骨炎膏组均明显高于京万红组(P均<0.05)。骨炎膏组和京万红组大鼠创面愈合时间均明显短于感染创面组(P均<0.05),且骨炎膏组明显短于京万...     

基于16S rRNA高通量测序分析9种中药饮片污染微生物群落特征

目的：基于16S核糖体RNA(16S r RNA)高通量测序分析浙江省湖州市南太湖地区9种中药饮片的污染微生物群落特征。方法：根据《中华人民共和国药典》（2020年版）对柴胡、白术、山药、玄参、麦冬、焦栀子、砂仁、铁皮枫斗、金银花共9种中药饮片进行控制菌检查和分类鉴定,同时采用16S rRNA高通量测序法测定基因序列并将优化后的序列与数据库比对,进行多样性分析,分析微生物群落特征。结果：（1）90批中药饮片中有1批山药检测出沙门菌和大肠埃希菌,有41批（45.56%）检出耐胆盐革兰氏阴性菌。经菌落鉴定共获得4个科10个属共15种污染微生物,其中包括阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、阪崎克罗诺杆菌、沙门氏菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、奇异变形杆菌等致病菌或条件致病菌。（2）高通量测序共获得32个属、186种污染微生物,山药、白术、柴胡鉴定出的微生物种类最高,分别为112、95、88,焦栀子、铁皮枫斗和麦冬获得微生物种类最少,分别为20、26、34。经多样性分析,柴胡、白术和山药具有最高的Chaol指数,柴胡、山药和砂仁具有最高的Shannon指数,柴胡、山药和砂仁具有最高的Sim...     

延续护理在乳腺癌化疗患者居家管理中的应用效果

目的:探究延续护理在乳腺癌化疗患者居家管理中的应用价值。方法:选取我院2016年6月-2018年4月收治的乳腺癌化疗患者138例为对象,随机分入两组,对照组患者居家管理中给予常规电话随访,观察组居家管理中给予延续护理,对比两组患者的认知评估分、现状评分等。结果:干预3个月后,奥马哈结局评分系统的认知评分、现状评分和行为评分:观察组均高于对照组,P 0.05。结论:延续护理的实施有助于乳腺癌化疗患者病情控制,提高疾病认知水平,合理安排居家生活,值得推广。     

Detection and significance of lymph node micro-metastases in patients with node-negative gastric carcinoma

Lymph node ndcrometastases refer to minute cancermetastases in lymph nodes whose diameter is less than 2nun,l'] and they are difficult to be observed with routinehistologic exndnation. In early years serial sectioningwas frequently used in detectingl lymph node ulnicrometastases. Since the 80's inununohistochemicaltechnique has been commonly employed, and recentlyreverse iran s criptas es -polymeras e chain reaction is al s oaPPlied in order to detect ndcrometastases.12--SJ Althoughall techn…     

肺炎性假瘤及球形肺结核细胞增殖研究

目的了解肺炎性假瘤及球形肺结核是否存在细胞增殖异常。方法用流式细胞仪对9例患者(其中5例肺炎性假瘤、4例球形肺结核病)痰液细胞DNA含量进行分析,并与痰细胞学检查、手术及经皮肺活检组织P53、PCNA、Ki67免疫组化分析结果作比较。结果以最后病理诊断为标准,肺炎性假瘤及球形肺结核患者异倍体检出率分别为40%(2/5)与50%(2/4),其相应的病变组织切片PCNA、Ki67免疫组化染色也阳性,但P53免疫组化染色阴性。结论部分炎性假瘤及结核球存在细胞增殖异常。痰细胞DNA含量分析是发现增殖异常的有效辅助方法,可能有利于肺癌的早期诊断。     

人乳牙牙髓干细胞体外成骨特性的实验研究

目的研究人乳牙牙髓干细胞体外成骨特性。方法从健康儿童滞留乳牙牙髓组织中分离培养乳牙牙髓干细胞(SHED)后,经流式细胞仪分选出两组细胞。A组:CD34+/CD117+双阳性表达的细胞,B组:剩余的混杂细胞。研究两组细胞各自成骨特性:运用流式细胞仪分选标记干细胞,以免疫细胞化学技术,荧光定量PCR技术检测成骨细胞标记物,并做矿化染色。结果分离培养的细胞呈成纤维细胞样生长,经分选的A、B两组细胞在第30天时免疫细胞化学检测发现均有成骨细胞的标记物RUNX-2、OC、BSP表达,在培养第40天时运用荧光定量PCR检测分析发现A、B两组细胞表达RUNX-2、OC、BSPmRNA基因水平的差异有显著性意义:A组高于B组;在第50天A、B两组细胞运用VonKossa's染色法和茜素红染色法检测,结果显示A组细胞呈阳性表达,B组细胞呈阴性表达。结论纯化后的CD34+/CD117+双阳性表达的SHED具有体外自行成骨特性。     

经皮穿针配合力臂式外固定架治疗儿童股骨颈骨折

目的　探讨经皮穿针配合力臂式外固定架治疗儿童股骨颈骨折的疗效。方法　 1 4例患儿经皮牵引复位后X线透视下用 3枚克氏针经皮固定骨折端 ,配合力臂式外固定架固定 ,术后早期不负重功能锻炼 ,并对其疗效进行观察。结果　术后经 2～ 5年随访分析 ,全部骨性愈合。据毛宾尧儿童股骨颈骨折疗效判定标准 ,1 2例功能良好 ,无股骨头缺血性坏死发生。结论　经皮穿针配合力臂式外固定架固定治疗儿童股骨颈骨折手术创伤小 ,固定稳定 ,效果良好。