外源基因在大肠杆菌中表达效率的影响因素

人们运用基因工程技术已在大肠杆菌中成功地表达了许多重要的生物活性蛋白基因。但不同外源蛋白基因在大肠杆菌中的表达效率差异很大。本文综述了影响外源基因表达效率的一些常见因素,特别是对影响酬译起始的因素给予了更多的关注,同时总结了一些提高外源基因在大肠杆菌中表达效率的行之有效的方法。     

肝癌单抗研究应用现状与展望

肝癌单抗研究应用现状与展望陈志南边惠洁蒋建利Ｓｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｌｉｖｅｒｎｅｏｐｌａｓｍｓ／ｔｈｅｒａｐｙ；ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ／ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｕｓｅ主题词肝肿瘤／治疗；抗体，单克隆／治疗应用中国图书资料分...     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＰｈａｒｍａｃｉａＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ—３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０～５０ｍｌ腹水，回收率为８５％－９０％．整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测定，纯度＞９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）。该法操作简单、快速，只要有一台核酸／蛋白检测仪，便可进行制备级水平的纯化。     

冻存细胞计算机管理软件的研制及应用(摘要)

冻存细胞计算机管理软件的研制及应用（摘要）杨连君陈志南隋延仿米力曲萍（第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）我们编制了冻存细胞计算机管理软件—ＣＭ（ＣｅｌＭａｎａｇｅｒ），可对冻存的细胞系或细胞株进行自动管理、查询和统计归类。ＣＭ软件的主控程...     

抗人原发性肝细胞肝癌相关抗原P60单克隆抗体的产生及体内定位研究

本文用临床肝癌手术标本,制成细胞悬液,三次免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用A、B、C染色法筛选单克隆抗体。抗原片为低温石腊切片,获得一株特异性好的杂交瘤一H_(H10)。抗体亚类为小鼠IgG_1。 一、免疫组化染色 肝癌阳性例数37/50;正常肝0/30;肝硬化0/30;肝炎3/50;肝细胞瘤0/2;胃癌0/5;结肠癌1/5;正常成人组织复合片0/3;正常胎儿复合片1/5(心肌~+)。     

鼠源性单克隆抗体F(ab′)2片段制备工艺

目的制备符合临床应用质量标准的鼠源性mAb F(ab′)2片段.方法采用胃蛋白酶消化小鼠腹水抗体,疏水作用色谱法纯化F(ab′)2片段的新工艺,替代原有的木瓜蛋白酶消化IgG,阴离子交换色谱法纯化的旧工艺.结果新工艺所制备的F(ab′)2 片段经SDS-PAGE检测纯度达98%以上,ABC免疫组化法测定免疫活性为1∶8000,回收率大于 50%,核酸含量及热原均合格,整个工艺流程可在48 h内完成.结论新工艺制备人用鼠源性mAb F(ab′)2片段更简便高效、安全实用,能够适应中试放大及大规模生产的要求.     

单克隆抗体与超抗原结合物介导的T细胞抗肿瘤作用研究进展

超抗原(SAg)是一类能高效地刺激T细胞增殖并且使之释放大量细胞因子的细菌或病毒产物.SAg与抗肿瘤单克隆抗体(McAb)的偶联物或者利用基因工程手段制成的它们的融合蛋白对MHCⅡ类分子阳性或阴性的肿瘤细胞都有强大的杀伤作用.体外细胞毒实验和动物体内实验的研究结果表明,它很有可能成为一种有效的新型肿瘤免疫导向治疗剂.但是目前尚未见临床应用的报道.本文综述了用McAb与SAg结合物介导的T细胞对肿瘤进行免疫导向治疗的实验研究进展.     

抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达

目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。     

阴离子交换FPLC制备级化单克隆抗体

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换柱，在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了ＩｇＧ类单克隆抗体制备级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水经５０％饱和硫酸铵盐析粗分离后，再用阴离子交换色谱纯化，一次上样量相当于８０～１００ｍｌ腹水，可得纯化ＭｃＡｂ５００～６００ｍｇ，得率为６～７ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为５７～６７％，一次纯化周期仅南非４５ｍｉｎ。经ＳＤＳ－ＦＡＧＥ检测ＭｃＡｂ纯度为９５％，ＡＢＣ染色法