改良CT测量法用于椎弓根螺钉个体化植入的实验研究

[目的]探讨进钉点到棘突中心矢状面的垂直距离用于椎弓根螺钉个体化植入的可行性.[方法]于华中科技大学同济医学院解剖教研室收集成人脊柱标本30例,在CT横断面扫描图像上测量如下数据:椎弓根宽度a,进钉点到椎体前缘的距离b,进钉点到棘突中心矢状面的垂直距离c,椎弓根纵轴与椎体矢状轴的夹角A,在侧位片上测量椎弓根纵轴与操作台垂直线的夹角B,分为实验组和对照组,实验组采用CT图像上进钉点到棘突中心矢状面的垂直距离用于进钉点在水平方向上的定位,对照组采用Ebraheim法定位进钉点,置钉后行CT扫描,判断螺钉有无穿破椎弓根内侧或外侧壁及穿破程度,按照穿破程度进行分级:A=完全位于椎弓根内;B:穿破程度＜2 mm;C=穿破程度2～4 mm;D=穿破程度＞4 mm,并进行对比分析.[结果]实验组T3-10水平螺钉穿破率明显低于对照组,T1,T2,T 11,12:两组的穿破率相当.在T 3-18水平,螺钉的穿破程度(C,D级)明显高于其他节段,与椎弓根在这些节段横径变小有关;T 1-12,实验组中C,D级的发生率低于对照组.[结论]采用进钉点到棘突中心矢状面的垂直距离用于定位椎弓根螺钉进钉点,可以明显提高螺钉在水平方向上的植入准确性.尤其在L 3-10节段,而且特别适合由于解剖变异,外伤,肿瘤破坏等原因使关节突关节,横突等解剖标志发生改变时椎弓根螺钉的植入,亦可以在正常解剖情况下作为传统定位方法的有效补充.     

兔髓核细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为髓核细胞的研究

目的 研究体外新西兰大白兔髓核细胞(nucleus pulposus cells)与SD大鼠骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cells,MSCs)共培养时,兔髓核细胞与大鼠MSCs直接和间接接触对MSCs分化为髓核细胞的影响.方法 DAPI (4‘,6-二咪基-2‘-苯吲哚盐酸)标记原代髓核细胞后,分别与第三代MSCs按接触组和非接触组(Transwell培养系统)共培养.每隔24小时应用免疫荧光观察MSCs的形态学变化,并用RT-PCR方法检测Ⅱ型胶原和可凝集蛋白多糖(Aggrecan)的表达.结果 直接接触培养组中可见分化的MSCs形态和功能接近髓核细胞;非直接接触组的MSCs未见变化.结论 髓核细胞与MSCs的直接接触,是诱导MSCs分化为髓核细胞的重要因素.     

磁刺激对脊髓神经组织损伤的早期保护作用

目的探讨脊髓损伤后,应用磁刺激(magnetic stimlation,MS)对损伤脊髓组织早期钙、镁离子的影响.方法实验利用Allen的WD(weight drop,WD)技术,以10g×2.5cm致伤力造成wistar大鼠T8脊髓损伤模型,实验组分别于术后即刻,1h,2h,4h,24h分别予0.5HZ,70%输职强度的磁刺激,对照组不做处理.术后2h,6h,24h取治疗组,对照组动物损伤区脊髓组织作以下检测用干湿法测水含量;用原子吸收光谱法测钙、镁离子含量.结果损伤区脊髓组织水含量增多,钙离子水平升高,镁离子水平下降,白质内髓鞘结构紊乱,囊性变重;而应用MS可改善上述变化.结论脊髓损伤后应用磁刺激可减损脊髓损伤后的离子失衡,从而对继发性脊髓损伤具有保护作用.     

体外RNA干扰抑制Ezrin表达对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

背景与目的:细胞膜-细胞骨架联接蛋白(埃兹蛋白,Ezrin)参与了许多细胞的功能,包括细胞黏附、细胞运动以及细胞的生存.最近的许多研究表明Ezrin参与调控了肿瘤的侵袭与转移.然而,在骨肉瘤中,Ezrin所扮演的重要角色还没有被很清晰的阐明.本研究拟探讨Ezrin蛋白对人骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:以骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,针对Ezrin编码基因设计小干扰RNA片段,重组其shRNA(short hairpin RNA)表达载体转染入细胞,筛选稳定表达的克隆,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western-Blot)方法检测转染后Ezrin的mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化.结果:RT-PCR和Western blot检测显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著下调作用.骨肉瘤细胞生长速度减慢,处于分裂期的细胞比例有明显的下降,由25.05%下降到18.36%,而G1期细胞比例则由60.57%上升到67.65%.穿过人工基底膜的细胞数量也明显减少,由35.9±5.6减少为22.5±2.8(P＜0.01).结论:Ezrin在骨肉瘤的增殖和侵袭过程中发挥有重要作用,可能成为抑制肿瘤增殖和转移的关键性分子.     

YIGSR抑制骨肉瘤细胞分泌MMP-2和MMP-9的实验研究

[目的]研究酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸五肽（YIGSR）对人骨肉瘤细胞MG-63分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的抑制作用。[方法]在MG-63细胞中加入0、50、100μg／ml的YIGSR，用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、免疫组化和明胶酶谱分析检测MMP-2和MMP-9的变化。[结果]免疫组化结果显示随YIGSR剂量增加，MMP-2、MMP-9平均光度递减。胞浆着色变浅；RT—PCR结果显示，随YIGSR剂量增加，MMP-2、MMP-9对应电泳条带亮度逐渐减弱：明胶酶谱分析也表明，随YIGSR剂量的增加，负染条带平均光度越来越低。结果均有显著性差异（P〈0．05）。[结论]YIGSR能有效抑制人骨肉瘤细胞MG-63分泌MMP-2和MMP-9，在抑制骨肉瘤的侵袭与转移中可能会发挥一定作用。     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides,ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。方法：设计针对HIF-1α亚基的mRNA反义和正义寡核苷酸（sense oligodeoxynucleotides,SODN）,并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,观察不同时相5μmol/L的HIF-1αASODN对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。半定量RT-PCR方法检测HIF-1α和p53 mRNA的转录水平,免疫组化SP法和免疫印迹（Western blot）检测HIF-1α和p53蛋白表达情况。结果：与常氧组比较,单纯缺氧组及SODN缺氧组的蛋白表达水平随缺氧时间延长明显升高（P〈0.05）;而p53 mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强（P〈0.05）。在ASODN缺氧组,HIF-1α蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）;p53 mRNA及其蛋白的表达水平也明显减弱（P〈0.05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型p53的突变使HIF-1α稳定表达。而ASODN明显抑制HIF-1α的表达,且使突变型p53的表达水平显著下降,这说明HIF-1α可能在缺氧诱导野生型p53突变方面有一定的作用。     

超低频电磁场对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的:研究超低频电磁场对硝普钠诱导的SD大鼠肋骨骨骺软骨细胞凋亡的影响。方法:不同浓度硝普钠诱导软骨细胞凋亡,检测不同时间软骨细胞半数致死量(LD50)的硝普钠浓度;观察超低频电磁场对软骨细胞凋亡的影响。结果:半数软骨细胞致死的硝普钠浓度呈时间依赖性下降;经超低频电磁场和硝普钠同时作用后的细胞凋亡率明显低于单纯硝普钠作用的细胞凋亡率(P<0.05);单纯硝普钠诱导的细胞在超微结构上有典型的凋亡改变,超低频电磁场能在一定程度上恢复软骨细胞的正常结构。结论:超低频电磁场能抑制硝普钠诱导体外培养的大鼠软骨细胞的凋亡。     

低频电磁场对骨肉瘤MG63细胞侵袭和转移的生物学特性

目的:研究低频电磁场对骨肉瘤MG63细胞侵袭和转移的生物学特性。方法:以不同强度(0.8、1.6及3.2 mT)的50 Hz低频电磁场对骨肉瘤MG63细胞进行干预后,检测MG63细胞的增值,体外侵袭和迁移能力,裸鼠体内肺转移等指标。结果:经过磁场干预的实验组MG63细胞与对照组比较,其增殖能力下降,体外侵袭和迁移能力变弱,裸鼠体内肺转移形成时间晚,转移灶数目少。结论:低频电磁场能抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭和转移。     

壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架的生物相容性研究

制备壳聚糖/纳米羟基磷灰石(CS/nHA)分层复合支架,对其进行细胞毒性评价.分离培养大鼠软骨细胞接种于支架,相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附及生长情况.动物皮下埋植试验观察其组织相容性.实验结果证实壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架具有良好的生物相容性,有望成为较好的骨软骨组织工程支架.     

正弦波电磁场对鼠骨骺干细胞分化的生物学影响

目的 研究50Hz正弦波电磁场对大鼠骨骺干细胞分化的生物学影响。方法 取生长良好的第4代骨骺干细胞，随机分为实验组和对照组，实验组采用50Hz正弦波电磁场间断刺激。分别绘制2组细胞生长曲线，MTT法测定细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，Western Blot法检测细胞甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrp）的表达，并进行定量分析。结果 曝磁早期细胞增殖活性的改变不明显，正弦波电磁场刺激4d和6d能明显促进细胞的增殖，2组OD值比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。与对照组比较，实验组骨骺干细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均明显降低（P〈0．05）．PTHrp蛋白的表达增强。结论 适当参数的工频正弦波电磁场能促进骨骺干细胞PTHrp蛋白的表达，从而调节其增殖能力，增强分化稳定性，抑制细胞凋亡。