快速cDNA末端扩增技术在钓取未知基因中的应用

全长ｃＤＮＡ的克隆是目前人类基因组研究中的一个重要方面。对一段不完整的ｃＤＮＡ序列，克隆其全长的方法，包括ｃＤ－ＮＡ文库筛选法［１］和快速ｃＤＮＡ末端扩增法（ｒａｐｉｄ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ　ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ，ＲＡＣＥ）［２］。ｃＤＮＡ文库筛选法烦琐、工作量大、费用昂贵；而ＲＡＣＥ技术灵敏、快速。ＭＳＰ２为本实验室应用ｍＲ－ＮＡ差异显示技术克隆到的可能参与肿瘤转移抑制过程的一种新的基因片段，长 ４８１ ｂｐ。经计算机分析它具有编码区特征，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｂｏｌｏｔ分析显示其 ｍＲＮＡ约…     

人白细胞介素－2基因真核表达载体构建

人白细胞介素－２基因真核表达载体构建郑强，范清宇，殷剑宁，惠宏襄（第四军医大学唐都医院骨科西安７１００３８第四军医大学生物化学教研室）关键词白细胞介素－２，基因治疗，逆转录病毒载体中图号０７８４白细胞介素－２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ，ＩＬ－２）是Ｔ细...     

紫杉醇诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨紫杉醇对成骨肉瘤细胞的杀伤作用及机制。方法：应用形态学观察，MTT分析法，DNA梯状电泳，流式细胞术检测术，研究紫杉醇对成骨肉瘤细胞系SOSP-9607的细胞毒效应。结果：紫杉醇作用后成骨肉瘤细胞形态改变明显，存活率明显下降。形态学观察，DNA梯状电泳，流式细胞术检测术证实紫杉醇可诱导成骨肉瘤凋亡。结论：紫杉醇在体外对成骨肉瘤细胞株SOSP-9607有较强的杀伤作用，并且这种作用主要是通过诱导凋亡实现的。     

简便,快速分离高质量mRNA的方法

用mRNA进行分子生物学研究已成为一个必不可少的手段.最近用大分子聚合物包埋的磁性珠替代了偶联oligo(dT)的纤维素、葡聚糖及琼脂糖等非磁性填料.由于磁性珠在磁场中便可很快沉淀,因此免除了离心、过柱以及与之有关的操作,实验证明这一方法简单、快捷,且所提取的mRNA反转录效率高.     

骨肉瘤高转移细胞SOSP-M_1生物学稳定性及组织学起源的鉴定

目的　检测人骨肉瘤细胞高转移亚系SOSP M1 在裸小鼠体内传代过程中的生物学稳定性并鉴定其组织学特性。　方法　利用原位移植将细胞系在 33只裸鼠体内连续传代 ,组织块培养收集各代肺转移灶的肿瘤细胞 ,观察各代肿瘤细胞致瘤率、转移率、形态结构、骨形成蛋白、波形蛋白、肌动蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达情况以及遗传学方面的变化。　结果　各代肿瘤细胞致瘤率均为 10 0 % ,体内增殖稳定 ,肺转移率在 80 %以上。其显微及超微结构形态、抗原表达、染色体数目及结构变化均符合人骨肉瘤的特征。　结论　该细胞亚系在裸鼠体内传代生物学特性相对稳定 ,是人骨肉瘤实验研究的良好模型。     

高转移性人成骨肉瘤细胞系在裸小鼠体内的筛选和维持

目的：筛选人成骨肉瘤高转移细胞并探讨维持其高转移性状的方法。方法：采用低转移性成骨肉瘤细胞系在裸小鼠腹腔内连续传代和体外培养肺转移灶筛选高转移亚系,通过体内、外交替传代维持其高转移性状,并用流式细胞仪、染色体分析等方法,研究该高转移亚系的细胞周期、形态、增殖等生物学特性。结果：筛选所得腹水型高转移亚系自发性肺转移率达100％。在细胞形态、增殖速度、染色体数目等方面与母系有较大差别,经体内、外交替传代高转移性状得以维持,且出现较高比例的脑、骨、肌肉转移。结论：腹腔连续传代培养转移灶和体内、外交替传代是筛选和维持高转移细胞的可靠方法。     

人CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞蛋白质组的双向电泳分析

目的 用双向电泳技术分析人CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达的蛋白质组，建立二者之间的差异表达谱。方法 从人脾脏分选CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞，用双向电泳技术分析两种细胞蛋白质组的表达差异。结果 分选细胞纯度分别为CD4^ CD25^ T细胞82.3%,CD4^ CD25^-T细胞96.5%，双向电泳分析发现有4个蛋白点明显仅于CD4^ CD25^ T细胞检测到表达，有9个蛋白点明显仅于CD4^ CD25^-T细胞检测到表达。结论 CD4^ CD25^-T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达蛋白质组有明显差异。     

应用抑制性消减杂交技术鉴定肿瘤转移抑制相关基因

目的 克隆与肿瘤转移抑制相关的基因，探讨成骨肉瘤转移的分子机理。方法 采用抑制性消减杂交技术构建了人成骨肉瘤低转移细胞株SOSP－9607的消减文库，对部分克隆进行了测序和同源性分析，用Northern杂交及后转录PCR技术证实了克隆的表达情况。结果 在低转移细胞株SOSP－9607中高表达的克隆中有2个克隆与人端粒结合因子2（telomeric repeat binding factor 2,TERF2)同源。Northern杂交及反转录PCR证实这个基因只在低转移细胞中表达，而在高转移人成骨肉瘤细胞株SOSP－M和裸鼠肺转移结节中均未表达。结论 TERF2可能在维持肿瘤细胞自身相对稳定、抑制骨肉瘤演进中起重要作用。     

caspase-6基因诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨caspase6对成骨肉瘤细胞株的凋亡诱导作用。方法：应用RTPCR方法检测成骨肉瘤细胞株SOSP9607中caspase6基因的表达水平。以腺病毒adv5作载体，构建含caspase6基因的转基因载体，用脂质体包裹法转染SOSP9607细胞株， 用RTPCR方法检测转染后SOSP9607细胞中caspase6基因的表达。用MTT法检测转染caspase6对SOSP9607细胞株生长的影响。结果：成骨肉瘤细胞株SOSP9607中未检出caspase6表达。RTPCR法证实转染caspase6后SOSP9607中caspase6表达显著增强，MTT检测显示对SOSP9607细胞的生长有抑制作用，形态学观察及DNA电泳证实转染后的细胞株存在细胞凋亡特征。结论：caspase6对成骨肉瘤细胞的生长有抑制作用，并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

组织型纤溶酶原激活物基因疗法防治血管吻合口血栓栓塞

目的 探讨防止血管吻合口血栓栓塞的新方法,了解组织型纤溶酶原激活物基因疗法防止吻合口血栓栓塞的效果。方法 （1）将含有t-PA基因的重组质粒pAdCMVt-PA与缺陷型腺病毒大框架pJM17共转染病毒包装细胞293细胞,获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒AdCMVt-PA。（2）实验动物随机分为对照组和治疗组,均用11－0尼龙缝线行大鼠颈总动脉原位端端吻合,治疗组吻合口注射AdCMVt-PA溶液,对照组注射AdCMV(不含t-PA的空载体）,提取吻合口组织的总RNA行RT－PCR,应用发色底物法检测吻合口组织的纤溶酶活力。结果 治疗组RT－PCR在2．0kb前面有一条带,对照组则没有,治疗组术后第2,3,5,7和14日均可检测到纤溶酶活力,但第3日活力最高,对照组未检测到纤维溶酶活力,结论 克隆入 病毒载体的p-PA基因可在吻合口组织中表达出有生物学活性的t-PA,可能有效地抑制吻合口血栓形成,提高吻合口通畅率。