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在肿瘤的形成过程中,有两条通路研究的较为深入,即pRb(p16-pRb-cyclin D1)和p53(ARF-Mdm2-p53-p21WAF/CIP1)通路,由于p53突变在胰腺癌中是一主要事件,我们利用传统的免疫组化技术并结合新兴的组织芯片技术检测p53通路中相关基因:ARF、Mdm2、p53和p21在胰腺癌、癌旁与良性病变组织中的表达情况,以探讨四种蛋白在胰腺癌组织中的改变情况、临床意义及相互作用关系. 相似文献
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背景与目的:在前期工作中,我们经计算机序列分析发现,在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因组增强子Ⅰ上游1047~1059 bp存在P53样应答元件结合序列5′-TGCC(G)TTGCCT-3′,体外实验应用凝胶迁移方法(EMSA和EMSSA)发现这段序列与P53蛋白能够进行特异性结合.本实验拟观察肝癌细胞中P53蛋白与HBV基因组P53样应答元件结合序列之间的关系.方法:报告基因质粒pX-CAT上游为X基因增强子和启动子序列,其中含有P53样应答元件结合序列5′-TGCGTTGCCT-3′.首先用PCR方法将pX-CAT质粒中5′-TGCGTTGCCT-3′进行点突变,成为5′-TGTATTGTAT-3′,以破坏P53样应答元件结合序列.将pX-CAT和变异后的pX-CAT(mpX-CAT)分别单独或与pCMV-p53质粒共转染HepG2细胞,通过检测报告基因CAT的活化情况,观察P53蛋白与这段DNA序列的作用关系.将HBV基因P53样应答元件结合序列反向构建于真核表达质粒pZeoSV2中(αpZeoXP),转染HepG2.2.15细胞并稳定筛选,以封闭HBV基因上P53样结合位点,观察细胞中P53/P21蛋白表达的改变,以及细胞周期、细胞凋亡的变化.结果:HepG2细胞中,报告基因CAT活性在pCMV-p53与pX-CAT共转染组较pX-CAT单独转染组明显升高(1.353 vs 0.738,P<0.05),而mpX-CAT单独转染组CAT活性则明显降低(0.304),即使与pCMV-p53共转染CAT活性也较低(0.402).与对照组相比,稳定转染了αpZeoXP的HepG2.2.15细胞中,P53、P21蛋白表达水平降低;细胞周期检测显示,与对照组相比,处于S期的细胞数增多(16.37%vs 9.48%),而细胞凋亡数减少(0.95%vs7.84%).结论:P53可促进pX-CAT报告基因在细胞内的表达,进一步提示P53与HBV增强子上游5′-TGCC(G)TTGCCT-3′序列存在结合作用,二者作用可能通过导致细胞内P53蛋白半衰期延长,而使细胞中P53及其下游基因P21蛋白表达水平和活性升高. 相似文献
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不同p53状态的肝癌细胞系DNA损伤修复能力的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 观察不同p53状态的肝癌细胞在DNA损伤因素存在下,探讨p53在肝细胞癌发生过程中的作用。方法 选用内源性表达野生型p53、突变型p53、p53全基因缺失的HepG2、PLC/PRF/5、Hep3B肝癌细胞系,将含有p53结合序列的CAT报告基因质粒分别转染各细胞,通过ELISA方法检测报告基因CAT活化情况,观察p53功能状态;用细胞生长曲线比较不同p53状态的细胞生长速度的差异;给予一定剂量的紫外线照射,检测各细胞程序外DNA损伤修复(UDS)能力;观察紫外线照射后细胞克隆形成情况,反映不同细胞系在紫外线照射后细胞存活率的不同。结果 报告基因CAT在HepG2细胞表达最强,而在PLC/PRF/5、Hep3B肝癌细胞均处于较低水平,说明HepG2细胞具有功能性的p53表达;HepG2细胞生长速度明显慢于其他两种细胞;紫外线照射后,HepG2具有较好的DNA损伤修复能力以及较高的细胞生存率。结论 野生型p53具有抑制肝癌细胞生长、保持细胞良好的DNA损伤修复的功能。 相似文献
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应用组织芯片研究p63及其同系物在肺癌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究p63蛋白及其同系物TAp63、△Np63在肺癌组织中的表达,并初步探讨其生物学意义。方法选取183例肺癌、30例肺良性病变的石蜡标本,应用组织芯片技术和免疫组织化学方法观察三种蛋白在肺良、恶性病变中的表达情况。结果p63蛋白及其同系物map63、△Np63三者在肺鳞状细胞癌、腺癌、细支气管肺泡癌、小细胞癌的表达具有一致性(r〉0.75,P〈0.01),且在鳞状细胞癌中的表达率均高于其它类型(P〈0.01);在鳞状细胞癌中△Np63表达率(74.6%)略高于map63(67.2%),但无统计学意义(P〉0.05)。三种蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小、有无淋巴结转移及临床分期不相关(P〉0.05)。p63、TAp63及△Np63在肺癌旁组织或肺良性病变的肺泡上皮细胞和支气管纤毛柱状上皮不表达,而只表达于支气管上皮的基底细胞和支气管腺的肌上皮细胞。结论p63基因在不同类型的肺癌中作用不同,在鳞状细胞癌的发生发展中起着重要的作用。两种同系物map63和△Np63在鳞状细胞癌中也呈高表达,其机制有待研究。p63可作为肺鳞状细胞癌与其它类型癌鉴别的重要依据。 相似文献
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目的探讨运动日记在外周静脉置入中心静脉导管(peripherally inserted central catheter,PICC)患者手臂操锻炼中的应用效果。方法将2017年6月-8月在本院住院治疗的30例PICC置管患者设为对照组,采用手臂操锻炼视频和常规护理方法对患者进行功能锻炼的指导;将2017年9月-11月在本院住院治疗的32例PICC置管患者设为观察组,在对照组基础上采用自行设计的运动日记进行干预,共干预31d。比较两组患者干预前后功能锻炼的依从性和干预后静脉血栓的发生率。结果干预后观察组患者手臂操锻炼依从率(90.6%)高于对照组(26.7%);静脉血栓发生率(3.1%)低于对照组(30.0%),两组比较,差异均有统计学意义(P0.001,P=0.004)。结论运动日记可提高PICC置管患者手臂操锻炼的依从性,从而起到预防静脉血栓发生的作用,值得在临床应用和推广。 相似文献
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目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白羧基端缺失40个氨基酸(HBx3'-40)反式激活基因,克隆其反式激活的相关靶基因.方法:以HBx3'-40蛋白表达质粒pcDNA3(-)-HBx3'-40 转染Huh-7细胞,以转染pcDNA3(-)-HBx为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取总RNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与pUCm-T载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌JM109进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建了HBx3'-40反式激活基因差异表达的cDNA文库,文库扩增后得到154个白色克隆,经菌落PCR分析,克隆包含有200~800 bp的插入片段,部分片段编码蛋白涉及原癌基因、信号转导相关基因、细胞生长因子相关基因、细胞凋亡、代谢和蛋白合成等相关基因.结论:应用抑制性消减杂交技术成功构建了HBx和HBx3'-40差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HBx3'-40在HBV感染相关的肝细胞癌发生中的分子生物学机制提供理论依据. 相似文献
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目的:观察五味地龙汤对实验性支气管哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)的计数和肺、支气管组织形态学的影响。方法:用OVA腹腔注射及气道吸入激发建立哮喘豚鼠模型,对支气管肺泡灌洗液离心后计数BALF中EOS。光镜观察其肺支气管病理组织学变化。结果:①一般情况:哮喘模型组豚鼠均出现不同程度的呼吸次数增加、张口等呼吸困难症状,各药物组豚鼠OVA激发后,地塞米松组和五味地龙汤大剂量组没有出现明显不适症状。②BALF中EOS计数显示:各组与哮喘模型组EOS(15.57±1.51)个/mm3比较,差异均有非常显著的统计学意义(P〈0.01)。五味地龙汤大剂量组和地塞米松组与正常对照组EOS(0.83±0.75)个/mm3比较,差异均无统计学意义(P〉0.05)。哮喘性模型组BALF中EOS数明显增加。③光镜观察:模型组见支气管黏膜下层充血水肿,嗜酸性粒细胞灶状浸润,腔内可见部分粘液及渗出物。地塞米松组:气管及支气管管壁结构正常,无炎性渗出。五味地龙汤大剂量组:气管管壁结构逐渐恢复,炎症减轻,水肿明显消失。管腔炎性渗出物明显减少。结论:五味地龙汤可能通过减少气道EOS浸润,减轻炎性渗出,抑制杯状细胞和平滑肌增生,抑制气道重塑,从而发挥平喘的作用。 相似文献
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应用组织芯片技术研究P33^ING1在胰腺癌中的表达及意义 总被引:4,自引:1,他引:4
目的 探讨P33~(INGI)表达在胰腺癌的发生、发展中的生物学特征和临床意义。方法 选取胰腺癌、癌旁组织与胰腺良性病变标本,应用组织芯片(又称组织微阵列)技术和免疫组化方法研究P33~(INGI)、P53和MDM2在胰腺良恶性病变中的表达情况。结果 P33~(INGI)在胰腺癌与癌旁组织中表达的阳性率分别为77.2%(129/167)、60.4%(61/101)。P33~(INGI)的阳性表达与肿瘤的分化和神经受累显著相关(P<0.05);P53的阳性表达与肿瘤的分化、淋巴结转移和神经受累均显著相关(P相似文献