常规降糖与联合N-乙酰半胱氨酸对糖尿病慢性肾脏疾病患者PARP-1及GAPDH活性影响的研究

目的观察采用常规降糖治疗与联合N-乙酰半胱氨酸(NAC)治疗对糖尿病慢性肾脏病(CKD)患者多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)活性的影响。方法将60例CKDⅢ期患者随机分为常规治疗组(A组)30例;联合NAC治疗组(B组)30例;另选取同期健康体检者30名为正常对照(NC)组,治疗12周。观察治疗前后外周单核细胞PARP活性、全血GAPDH活性的变化。结果 A、B组治疗后PARP活性下降[A组(3.70±0.06)vs(3.02±0.07)U/mg;B组(3.74±0.11)vs(2.66±0.04)U/mg],GAPDH活性升高[A组(4430.8±279.4)vs(5136.6±321.6)U/ml,B组(4495.2±324.7)vs(6104.4±275.3)U/ml],且B组治疗后PARP及GAPDH活性改变与A组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合NAC治疗与常规治疗相比,可更有效地逆转CKD患者PARP、GAPDH活性的异常。     

转化生长因子β1对大鼠腹膜间皮细胞IL-8表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)IL-8表达的影响及机制.方法 10 μg·L-1 TGF-β1刺激体外培养的RPMCs,RT-PCR法检测IL-8的表达;体外转染Smad7和pcDNA3空载体至RPMCs后,观察10 μg·L-1 TGF-β1刺激RPMCs对IL-8和p38表达的影响.采用p38抑制剂SB203580(10 μmol·L-1)预处理RPMCs后,加入10 μg·L-1TGF-β1,观察阻断p38信号通路对IL-8表达的影响.结果 与0 h刺激组相比,3、6、12 h TGF-β1刺激组IL-8表达明显增加(P＜0.05或P＜0.01),其中3 h达高峰.上调表达Smad7以及SB203580均能显著抑制TGF-β1刺激RPMCs产生IL-8(P＜0.01).与正常对照组比较,TGF-β1刺激磷酸化p38(p-p38)的表达显著增加(P＜0.05),与TGF-β1刺激组比较,外源性Smad7转染组p-p38的表达显著减弱(P＜0.05).结论 TGF-β1促进RPMCs IL-8的表达,其机制可能是TGF-β1通过活化p38磷酸化来实现的.     

患者用药中的健康教育

健康教育是指通过有计划、有系统的教育过程，促使人们自觉地采用有利于健康的行为，以改善维持和促进个体健康，通过一定手段，使人们具有一定的保健能力，以改变不利于健康的各种行为习惯，建立科学的生活方式。为了提高用药疗效及改变患不良的用药习惯，我们对住院患进行了用药的健康教育，现报告如下。     

小剂量螺内酯对透析前慢性肾脏病患者蛋白尿的影响

目的观察小剂量螺内酯在非糖尿病慢性肾脏病（CKD）1～3期患者中的降蛋白尿的作用及其应用的安全性。方法对2010年1月～2011年10月在深圳市第六人民医院肾内科住院及门诊就诊的非糖尿病CKD 1～3期患者55例进行临床观察。按数字随机表法将入选患者随机分为两组。入选者均按慢性肾脏病综合治疗方案处理,并加用贝那普利（10 mg/d）治疗,对照组27例,治疗组28例在原治疗基础上,加用螺内酯（20 mg/d）口服,观察时间为6个月,观察治疗0、3、6个月后患者24 h尿蛋白排泄量、肾功能及血清钾离子水平的变化。结果治疗组中有1例患者在治疗1个月后出现高钾血症（血清K＋浓度为6.31 mmol/L）而退出试验;治疗组和对照组治疗3、6个月后24 h尿蛋白定量水平较治疗前均明显下降[治疗组3个月：（1 314±302）mg/24 h vs（2 005±571）mg/24 h,P=0.006;6个月：（1 295±426）mg/24 h vs（2005±571）mg/24 h,P=0.001。对照组3个月：（1 689±603）mg/24 h vs（2 087±636）mg/24 h,P=0.026;6个月：（1 503±598）/24 h vs（2 087±636）mg/24 h,P=0.012];两组治疗6个月后24 h尿蛋白定量水平较同一组治疗3个月后水平无明显下降（P〉0.05）;治疗组治疗3、6个月后与对照组治疗3、6个月后相比,24 h尿蛋白定量水平低,差异有统计学意义[3个月：（1 314±302）mg/24 h vs（1 689±603）mg/24 h,P=0.033;6个月：（1 295±426）mg/24 h vs（1 503±598）mg/24 h,P=0.027];治疗组治疗3、6个月后血清尿素氮、肌酐水平较治疗前略有上升,估算肾小球滤过率略下降,但与治疗前及对照组治疗3、6个月后上述指标相比差异无统计学意义;治疗组治疗后3、6个月血清钾离子水平略上升[3个月：（4.23±0.41）mmol/L;6个月：（4.27±0.50）mmol/L）],但与治疗前[（4.01±0.44）mmol/L]及对照组治疗3个月[（4.11±0.46）mmol/L]、6个月[（4.16±0.43）mmol/L]后水平相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论小剂量螺内酯能降低非糖尿病慢性肾脏病1～3期患者蛋白尿,且其作用独立于其降压及ACEI作用之外,其对血清钾的影响有待进一步的观察。     

多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1介导高糖致大鼠肾脏系膜细胞tPA/PAI-1的紊乱

目的 探讨多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖(25 mmol/L)作用下大鼠肾脏系膜细胞tPA/PAI-1纤溶系统紊乱中的作用.方法 (1)体外培养大鼠肾脏系膜细胞株(MCs 1097),使用高糖(25 mmol/L)处理大鼠肾脏系膜细胞,部分实验组中应用PARP-1特异性抑制剂PJ34(3×10-6 mol/L)进行干预处理.(2) RT-PCR及Western blot检测PARP-1的mRNA及蛋白表达.(3)高通量比色测定法检测PARP-1的活性.(4) ELISA法测定细胞上清液tPA、PAI-1的分泌蛋白.结果 (1)高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1mRNA和蛋白的表达,PJ-34可明显抑制高糖诱导的PARP-1 mRNA和蛋白的过度表达.同时,高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1激活,PJ-34可显著抑制高糖诱导的PARP激活.(2)高糖轻度减少大鼠肾脏系膜细胞分泌型tPA的蛋白表达,显著增加大鼠肾脏系膜细胞分泌型PAI-1的蛋白表达,导致tPA/PAI-1比值降低,PJ-34显著预防高糖诱导的上述改变.结论 高糖可以诱导培养的大鼠肾脏系膜细胞内PARP激活,PARP1表达增加,PJ-34预处理可以明显降低高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞内PARP的激活以及下游tPA/PAI-1纤溶系统紊乱,提示高糖可能通过过度激活PARP来诱导tPA/PAI-1功能紊乱.     

活性维生素D3对透析前慢性肾脏病患者肾脏保护作用研究

目的：探讨活性维生素D3对透析前慢性肾脏病（CKD）患者的肾保护作用及安全性。方法：选择透析前3～4期慢性肾脏病患者200例,随机分为治疗组和对照组各100例。对照组给予优质低蛋白饮食、α-酮酸、血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）和（或）血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）和（或）钙通道拮抗剂以及抗血小板集聚等常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用骨化三醇（0.5μg/d,疗程1年）。分别在治疗前和治疗后3,6,9和12月检测患者肾功能、血清白蛋白、甲状旁腺素、血钙、磷及24h尿蛋白定量等指标,并观察其副作用。结果：两组治疗后3月血肌酐、尿素氮、血尿酸和24h尿蛋白均明显下降（P〈0.05）,估算肾小球滤过率和血清白蛋白显著上升（P〈0.05）。治疗组治疗12月后肾功能进一步改善（P〈0.05）,尿蛋白进一步减少（P〈0.05）,而对照组治疗12月后肾功能和尿蛋白与治疗3月相比无明显改变。对照组患者血钙降低,血磷升高,甲状旁腺素水平明显升高（P〈0.05）。治疗组患者血钙升高,血磷降低,甲状旁腺素水平明显下降（P〈0.05）,但无明显高钙血症等副作用。结论：骨化三醇能显著改善透析前CKD患者的肾功能,减少蛋白尿,抑制继发性甲状旁腺素分泌,具有明显的肾脏保护作用,且无明显副作用。     

胱抑素C评价早中期慢性肾脏病患者肾功能损害的临床价值

目的探讨血清胱抑素C（CysC）评价早中期慢性肾脏病（CKD）患者肾功能损害的临床价值。方法以2008年1月至2010年12月深圳市第六人民医院肾内科住院治疗的221例CKD1～3期患者为观察对象,测定CysC、血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、血尿酸（BUA）及血白蛋白（Alb）,与MDRD公式计算的肾小球滤过率（GFR）进行比较。结果 CKD1～3期患者CysC随着GFR的下降而升高,各组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）;血清CysC水平与SCr、BUN及BUA水平呈明显正相关（r=0.650,P=0.000;r=0.631,P=0.000;r=0.309,P=0.000）,与GFR水平呈明显负相关（r=-0.717,P=0.000）。CKD2期患者CysC异常检出率为32.8%,SCr为0;CKD3期患者CysC异常检出率为73.0%,SCr为58.4%,CKD3期患者CysC、SCr的异常检出率差异有统计学意义（P〈0.05）。CysC评估GFR的接受者操作特征曲线下面积（AUCROC）为0.853,敏感性为0.780,特异性为0.817;SCr的AUCROC为0.924,敏感性为0.793,特异性为0.958;联合CysC和SCr后,AUCROC上升至0.940,敏感性为0.853,特异性为0.950。结论 CysC是评估早中期CKD患者肾功能损害的敏感指标,联合应用CysC和SCr可提高对早中期慢性肾功能不全患者的诊断效能。     

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶对原发性肾病综合征并发急性肾损伤的诊断价值

探讨原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)并发急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的危险因素及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)在PNS并发AKI中的预测价值。方法 PNS患者78例,其中PNS并发AKI患者(AKI组)21例,PNS未并发AKI(非AKI组)患者57例。对2组患者记录年龄、性别、有无感染、有无使用血管紧张素转换酶抑制剂和(或)血管紧张素受体拮抗剂(ACEI/ARB)及非甾体类抗炎药(NSAIDS),记录入院后的血压[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)],测定2组患者血尿素氮(BUN)、血尿酸(BUA)、血肌酐(SCr)、外周血白细胞计数(WBC计数)、血红蛋白(Hb)、血总胆固醇(TC)、血三酰甘油(TG)、血纤维蛋白原(Fbg)和血清C-反应蛋白(CRP)、血浆白蛋白(Alb)及NAG、尿β2-微球蛋白(β2-MG)、24h尿蛋白定量的水平。结果 PNS并AKI的发生率为26.9%(21/78),AKI组男性发病率较非AKI组高,差异有统计学意义(P<0.05)。AKI组患者血BuN、血BUA、血Fbg、尿NAG、尿β2-MG、24h尿蛋白定量水平均明显高于非AKI组(P<0.05或P<0.01),AKI组患者血浆Alb水平明显低于非AKI组(P<0.05)。单因素Logistic回归分析结果显示:男性、血BUA、血浆Fbg、尿NAG、24h尿蛋白定量水平高是PNS并发AKI的危险因素。多因素Logistic回归分析结果显示:尿NAG升高是PNS并发AKI的独立危险因素[OR1.059、OR(95%CI)1.005～1.115、P<0.01]。尿NAG升高诊断PNS并发AKI特征曲线下面积(AUCROC)为0.903(95%CI 0.826～0.979);尿NAG诊断PNS并发AKI的阳性参考值为>83U.L-1,敏感性为0.789,特异性为0.936。结论尿NAG是早期发现、早期诊断PNS并发AKI的理想生物学标记物。     

NADPH氧化酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚

目的 探讨NADPH氧化酶在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化以及细胞外基质积聚中的作用。 方法 体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞，静止24 h后，随机分为以下4组：正常对照组，AngⅡ（10^-7 mol/L）组，AngⅡ+ Los(洛沙坦,10 μmol/L)组及AngⅡ+DPI（NADPH氧化酶活性抑制剂，10 μmol/L）组。应用荧光染料（DCF）及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧（ROS）的产生。RT-PCR检测NADPH氧化酶亚单位p47phox以及纤溶酶原激活物抑制剂（PAI）1、α平滑肌肌动蛋白（SMA）、E钙黏蛋白（cadherin） mRNA的表达。Western印迹检测p47phox、α-SMA的蛋白表达。 结果 （1）外源性AngⅡ可显著增加大鼠腹膜间皮细胞ROS的产生，刺激15 min后，ROS 的表达较对照组上升了(3.64±0.53)倍。DPI和洛沙坦可显著抑制AngⅡ刺激后ROS的产生（P < 0.05）。（2）AngⅡ刺激腹膜间皮细胞后， NADPH氧化酶亚单位p47phox mRNA和蛋白的表达均呈上升趋势。洛沙坦和DPI可阻断由AngⅡ诱导的p47phox表达上调（P < 0.05）。（3） AngⅡ诱导α-SMA表达的上调以及 E-cadherin mRNA的下调, 洛沙坦和DPI可部分逆转AngⅡ的这种作用。（4）AngⅡ刺激8 h后可明显上调PAI-1的mRNA表达，为正常对照组的（3.06±0.77）倍。 洛沙坦和DPI可明显阻断PAI-1的表达上调（P < 0.05）。 结论 NADPH氧化酶依赖产生的ROS介导了AngⅡ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚。阻断AngⅡ的作用及抑制NADPH氧化酶的表达和活性可作为防治腹膜纤维化的潜在治疗靶点。     

NADPH氧化酶在转化生长因子β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）转分化中的作用。方法用TGF-β1（10μg/L）刺激NRK-52E细胞不同时间,观察α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI- 1）及Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）的表达。部分实验中细胞在TGF-β1刺激前用NADPH氧化酶抑制剂DPI预处理1 h。用激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧（ROS）的产生。用RT-PCR方法检测NADPH氧化酶p22phox、gp91phox、p47phox和p67phox亚单位mRNA的表达。α-SMA、E-cadherin、PAI-1及Col-ⅠmRNA及蛋白的表达分别采用RT-PCR、Western印迹和细胞免疫化学检测。结果TGF-β1可显著上调NADPH氧化酶p67phox亚单位mRNA的表达,8 h及24 h时分别为对照组的2.43倍及3.59倍（P〈0.01）。TGF-β1可显著促进细胞ROS的产生,5 min时已是对照组的2.5倍（P〈0.05）。DPI预处理同时可显著逆转TGF-β1诱导NRK-52E细胞ROS的产生（P〈0.05）、α-SMA的表达上调、E-cadherin的表达下调以及PAI-1和Col-Ⅰ的表达上调。结论TGF-β1可促进NRK-52E细胞增加ROS的产生。ROS介导了TGF-β1诱导NRK-52E细胞的转分化,促进肾脏纤维化。