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目的研究大鼠肝移植后自发免疫耐受的形成与移植肝内CD4~ CD25~ 调节性T细胞(Tr细胞)的关系。方法按供、受者不同将实验分为3组。急性排斥组:DA大鼠为供者,LEW大鼠为受者;自发耐受组:LEW大鼠为供者,DA大鼠为受者;同基因组:供、受者均为DA大鼠。各组均建立大鼠原位肝移植模型。分别在肝移植术后4、7、14、30和90 d时采用密度梯度离心法分离移植肝内淋巴细胞,免疫磁珠分离(MACS)法分选出CD4~ CD25~ Tr细胞;用流式细胞术(FCM)检测细胞纯度,同时分析CD4~ CD25~ Tr细胞比例的变化;体外细胞增殖试验研究CD4~ CD25~ Tr细胞对CD4~ CD25~-T细胞的免疫抑制作用。结果肝移植早期,急性排斥组和自发耐受组移植肝内CD4~ CD25~ Tr细胞比例均明显增加,其中急性排斥组增加更为明显;移植后4 d左右,两组CD4~ CD25~ Tr细胞比例开始下降,急性排斥组的下降幅度较大;移植后30 d,自发耐受组受者的移植肝内CD4~ CD25~ Tr细胞比例达到第2次高峰,约在移植后90 d时下降至正常生理水平。移植后7 d左右,急性排斥组受者均因发生排斥反应而死亡,而自发耐受组受者均存活。此外,CD4~ CD25~ Tr细胞能有效抑制CD4~ CD25~-T细胞的增殖。结论CD4~ CD25~ Tr细胞是一种具有特异免疫调节功能的T细胞亚群,其主动的免疫抑制功能可能是诱导大鼠肝移植自发免疫耐受的机制之一。 相似文献
2.
目的 探讨大鼠肝移植自然耐受模型移植术后Foxp3基因表达的变化及意义.方法 分别建立大鼠急性排斥(DA→LEW)、自然耐受(LEW→DA)、同基因组(DA→DA)肝移植模型,收集术后7、14、28d外周血、脾脏、肝脏标本,FCM检测标本淋巴细胞中CD4 CD25 Tr (regulatory T cell)比例变化,RT-PCR, Western blot分别检测肝脏内Foxp3基因及其scrufin蛋白的表达.结果 术后7d,各组外周血、脾脏、肝脏中CD4 CD25 Tr细胞比例无明显差异.术后14d自然耐受组脾脏、肝脏内CD4 CD25 Tr细胞比例明显高于同基因组(P<0.05),外周血中差异无统计学意义(P>0.05).术后28d自然耐受组与同基因组间无差异(P>0.05).术后7d,自然耐受组移植物Foxp3 mRNA水平明显高于排斥组和同基因组(P<0.05);术后14d,自然耐受组移植物Foxp3 mRNA水平明显高于同基因组(P<0.05);术后28d,自然耐受组与同基因组移植物Foxp3 mRNA表达无差异(P>0.05).自然耐受组与同基因术后14、28d scrufin蛋白条带明显强于7d,且自然耐受组表达强于同基因组.结论 大鼠肝移植术后1~2周内,移植肝内Foxp3基因表达可诱导机体对移植物产生免疫耐受. 相似文献
3.
目的观察缺血预处理(ischemia preconditioning,IPC)对大鼠减体积肝移植术后氧化还原因子-1(redox factor-1,Ref-1)蛋白表达的影响,以探讨IPC对减体积肝移植损伤的保护作用及其机制。方法将100只Lewis成年雄性大鼠随机分成三组:IPC移植组(IPC组)、50%减体积肝移植组(PLT组)和假手术组(SO组),分别于移植后0.5 h、2 h、6 h和24 h取材,通过Western blot法和免疫组织化学技术结合图像分析定量检测移植后各时间点Ref-1表达变化,同时结合血清学和组织病理学分析Ref-1表达变化的意义。结果术后PLT组各时间点血清ALT值分别为(595.06±108.78)U/L;(723.18±117.24)U/L;(1186.65±142.31)U/L;(1498.91±126.79)U/L;IPC组术后各时间点血清ALT值分别为(459.06±84.73)U/L;(587.71±95.23)U/L;(799.61±125.97)U/L; (659.27±135.68)U/L。与PLT组相比,IPC组术后6 h和24 h血清ALT值明显降低(t=4.553, P<0.05;t=10.110,P<0.01)。病理学分析显示,PLT组术后24 h门静脉周围大量炎细胞浸润,肝窦扩张明显,肝组织损伤较重;而IPC组则损伤较轻。与PLT组相比,IPC组于减体积肝移植术后24 h肝实质细胞中Ref-1蛋白表达明显增高。结论缺血预处理可以减轻减体积肝移植后早期肝脏损伤,促进肝组织Ref-1蛋白表达,提示缺血预处理保护减体积肝移植物早期损伤的机制可能与促进Ref-1蛋白的表达有关。 相似文献
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目的 探讨肝素结合的类表皮生长因子(heparin binding epidermal growth factor—like growth factor,HB-EGF)对大鼠减体积肝移植术后肝细胞再生的促进作用。方法 采用改良“二袖套法”建立大鼠原位减体积肝移植模型,分为实验组和对照组,术后即刻经尾静脉分别给予HB-EGF(500μg/kg)和相同体积的生理盐水,2次/d。2组分别在术后第6h、2d、4d及7d随机挑取5只大鼠处死,称取移植物湿重,采血检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)及白蛋白(Alb),流式细胞仪检测移植肝细胞的增殖活性,免疫组织化学法检测移植肝Ki-67的表达情况。结果术后第6h、2d和4d,实验组移植物湿重较对照组相应时相明显增加(P〈0.05);术后第6h、2d、4d和7d,实验组血清ALT水平较对照组相应时相明显降低(P〈0.05),而第4和7d时Alb水平较对照组相应时相明显增高(P〈0.05);术后第2和4d时,实验组的移植肝细胞增殖指数和Ki-67表达较对照组高(2d:P〈0.01;4d:P〈0.05)。结论 大鼠原位减体积肝移植术后使用HB-EGF能够明显促进移植肝细胞的再生。 相似文献
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目的:分析单人操作大鼠原位肝移植(rat orthotopic liver transplantation,ROLT)模型建立术的学习曲线.方法:将作者学习制作该模型最初的100例资料分为5阶段(各20例),对操作时间,无肝期,手术成功率,长期存活率及并发症率进行分析.结果:Ⅲ,Ⅳ,V阶段操作无肝期较Ⅰ,Ⅱ阶段明显减少(P=0.000),手术成功率从35%稳定上升至100%,长期存活率经历Ⅲ阶段55%~60%的平台期,达到95%;并发症率大大降低,模型稳定.结论:初学者经过耐心反复的训练,可通过学习曲线,熟练掌握ROLT术,成功建立肝移植基础研究需要的各种模型. 相似文献
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患者,男性,88岁,主因咳嗽咳痰5天伴不进饮食1天来院,入院后胸片示左肺下肺炎,故以"肺感染"收入院。患者既往体健,否认糖尿病、冠心病及高血压病史, 相似文献
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研究显示,肝移植后的排斥反应涉及多个基因表达的改变[1],如何高效地筛选出这些特异性表达基因,对排斥反应的诊治具有重要意义.本实验采用基因芯片技术筛选肝移植后急性排斥反应时的相关基因,以期能发现预测排斥反应的标志物. 相似文献
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目的:研究大鼠CD4 CD25 T调节细胞(Tr)的分离培养,并对其功能进行初步分析。方法:无菌条件下切取大鼠脾脏分离脾淋巴细胞。用免疫磁珠细胞分离系统(MACS)分选CD4 CD25 T细胞,并以流式细胞术检测其纯度后,对其进行扩增。采用混合淋巴细胞反应研究CD4 CD25 Tr细胞对CD4 CD25-T细胞的免疫抑制作用。用ELISA法检测培养上清中IL-2、IFN-γ及IL-10水平的差异。结果:MACS分离的CD4 CD25 T细胞的纯度达86%~93%。该细胞与CD4 CD25-T细胞相比能特异性地表达Foxp3基因。体外培养中能明显抑制效应T细胞增殖及其分泌IFN-γ、IL-2,但其自身能分泌Th2型细胞因子IL-10。结论:采用MACS系统阴性加阳性分选,可高效快速的获得理想纯度和免疫抑制功能的大鼠CD4 CD25 T调节细胞,该细胞对CD4 CD25-T细胞具有明显的免疫抑制作用,并能特异性的表达Foxp3基因。 相似文献
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