骨髓间充质干细胞及其来源的微泡在慢性肾衰竭中的修复机制

目的:探讨骨髓间充质干细胞及其来源的微泡制备方法及在慢性肾衰竭中的修复机制,为慢性肾衰竭治疗提供方法。方法:①骨髓间充质干细胞制备。选择2只SD大鼠,取大鼠胫骨、股骨髓,利用密度梯度离心法完成单一核细胞分离,采用贴壁方法完成细胞的培养,采用流式细胞仪制备细胞表面特异性抗原,完成细胞的鉴定。②慢性肾衰竭模型制备及处理方法。选择2015年5月～2016年3月医院实验室进行试验的SD大鼠40只,取10只大鼠设为空白对照组,30只大鼠采用肾切除六分之五合并高盐饮食三个月方法建立大鼠慢性肾衰竭模型,随机数字法分为阳性对照组(n=10)、干细胞组(n=10)及微泡干预组(n=10)。阳性对照组建模成功后不采取任何措施处理,干细胞组建模成功后采用移植制备的骨髓间充质干细胞进行治疗,微泡干预组移植骨髓间充质干细胞后采用超声微泡辐照,比较不同组大鼠慢性肾衰竭修复效果。结果:①细胞换液一次细胞纯化呈梭状、纺锤状,以旋涡方式生长,细胞贴壁后生长迅速,细胞传代一次需要3 d,经过三代培养后细胞数量相对较多;②流式细胞仪测定结果表明:对照组细胞表面CD29几乎不表达,而MSC细胞表面CD29阳性率为91. 54%,符合骨髓间充质细胞表面特征;③Western blot法结果表明:HGF蛋白在4组相对分子量为82 000部位存在特异性条带,而EGF蛋白则在4组相对分子量为5 500部位存在特异性条带;④微泡干预组TNF-α水平低于干细胞组与阳性对照组(P0. 05),微泡干预组细胞黏附分子1水平高于干细胞组与阳性对照组(P0. 05);⑤阳性对照组建模后未经任何处理,肾脏损伤明显,存在大量炎性细胞;空白对照组未参与建模,肾脏组织完整,未见肾脏组织损伤,干细胞组修复30 d后肾脏损伤缓解,仍存在少许炎性细胞,微泡干预组修复后30 d肾脏组织损伤改善,未见炎性细胞。结论:采用全骨髓法能分离培养骨髓间充质干细胞,将频率为1 MHz、强度1. 0 W/cm2脉冲超声辐照微泡用于慢性肾衰竭大鼠骨髓间充质干细胞修复中能抑制炎性反应。     

蒲葵子提取物对膀胱癌细胞增殖凋亡的影响及其相关机制

目的:探讨蒲葵子提取物对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法:将T24细胞分别用含蒲葵子提取物且终浓度分别为0、25、50、100 mg/L的培养液培养,分别记为对照组和蒲葵子低、中、高剂量组。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数量;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法...     

纳米羟基磷灰石/聚酰胺材料的体内成骨能力

背景：作为骨修复重建材料,纳米羟基磷灰石具有良好生物相容性及骨传导性,但临床上中单一使用纳米羟基磷灰石尚存在许多不足。目的：观察纳米羟基磷灰石/聚酰胺材料的体内成骨能力。方法：取24只新西兰大白兔,进行纳米羟基磷灰石/聚酰胺人工肱骨头置换,分别于置换后3,6,12,24周,进行X射线观察、组织学观察。结果与结论：①X射线观察：不同时间点材料上端皮质均未出现骨皮质变薄、异位骨化等发生,纳米羟基磷灰石/聚酰胺材料无碎裂迹象,材料四周皮质均可见模糊界面,密度随着时间的增加而增加。②组织学观察：置换后3周,可见大量细胞,包括间充质细胞、单核巨噬细胞等;置换后6周,仍可见界膜内的大量纤维组织、成纤维细胞、单核巨噬细胞,而软骨细胞和成骨细胞分布较少;置换后12周,大范围原始骨小梁开始形成且多呈扁平状,排列整齐有序;置换后24周,组织界膜被骨细胞充斥,骨小梁表面的细胞较规则,骨组织原始细胞开始转变为板层状骨。说明纳米羟基磷灰石/聚酰胺材料具有良好的成骨能力。 ;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

不同运动强度对去势大鼠骨质疏松软骨形态的影响

目的探讨不同运动强度在去势SD大鼠骨质疏松中的应用效果及对软骨形态的影响。方法 2017年9月至2018年11月在中山大学附属第三医院中心实验室取40只SD大鼠作为研究对象,采用切断输卵管及切除卵巢方法建立大鼠骨质疏松模型。取同期实验的SD健康大鼠10只作为假体手术组。根据大鼠处理方法不同分为模型对照组、低强度组、中等强度组及高强度组,每组10只。模型对照组常规饲养,低强度组跑台训练10 m/min,中等强度组进行20 m/min跑台训练,高强度组进行25 m/min跑台训练,每天1 h,连续训练6周。比较不同组大鼠训练6周后关节软骨mankin score评分、关节软骨厚度、血清钙、磷及MMP-3水平、HE及番红染色情况。结果①中等强度组简易精神状态评价(MMS)评分低于低强度组、高强度组及模型对照组(P0.05);低强度组MMS评分低于高强度组及模型组(P0.05);中等强度组关节软骨厚度高于低强度组、高强度组及模型对照组(P0.05);②中等强度组血清钙、血清磷水平低于低强度组、高强度组及模型对照组(P0.05);③模型对照组软骨表面光滑,呈圆形或椭圆形;低强度组大鼠人软骨表面相对光滑,细胞数量相对较多,排列规则,染色加深;中载荷运动组软骨表面光滑,染色明显增粗,基质染色较深,染色均匀;高强度组潮线不规则,染色相对较浅。结论中等运动强度用于去势大鼠骨质疏松中效果理想。     

成人鼻腔呼吸黏膜内间充质干细胞的分化特征及其多向诱导分化潜能研究

目的研究成人鼻腔呼吸黏膜内间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）的分化特征及其多向诱导分化潜能。方法取材及细胞外培养成人鼻腔呼吸黏膜,鼻黏膜组织切片及MSCs免疫荧光染色（体外培养）,鼻黏膜MSCs向成骨细胞诱导分化及向神经细胞诱导分化。结果Vimentin抗体及Nestin抗体免疫荧光染色成人下鼻甲黏膜冷冻切片显示,双标记的阳性细胞为卵圆形或圆形,在鼻黏膜固有层中广泛分布。免疫荧光染色结果显示干细胞标志蛋白Sall4、CD133、Nestin、Vimentin受传代培养的MSCs表达。钙结节的茜素红染色结果：向成骨细胞诱导培养鼻黏膜MSCs 2周后,茜素红染色显示有大量红色钙结节存在于细胞表面,没有显著钙结节存在于未经诱导的MSCs表面,只有少量茜素红着色;碱性磷酸酶染色结果:碱性磷酸酶染色在向成骨细胞诱导培养鼻黏膜MSCs 2周后呈紫蓝色,未经诱导的MSCs具有极浅的染色。用神经诱导培养液进行2周的诱导后,细胞向神经细胞样显著分化,可见大部分细胞呈BM88与NF 200免疫染色阳性,细胞将多根细长突起发出并相互连接,对照组细胞具有极弱的荧光染色,为长梭形。结论成人鼻腔呼吸黏膜内MSCs广泛存在,具有多向诱导分化潜能,在对骨与软组织损伤进行自体移植修复的过程中可以作为种子细胞得到有效应用,期待临床进一步验证。