几种牛结核病检疫方法在结核污染牛群中的应用研究

牛结核病主要是由牛分枝杆菌引起的一种人畜共患病,皮内变态反应是牛结核病检疫国家规定的检疫方法和有效手段,本文阐述了皮内变态反应与比较变态反应、γ-干扰素检测及病理剖检的相关性和符合率,对确诊结核病阳性牛有一定的指导作用.     

牛结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的原核表达和纯化

构建牛结核分枝杆菌ESAT-6基因的原核表达载体,诱导表达、纯化并初步鉴定该蛋白。方法:以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增ESAT-6基因,产物通过双酶切克隆入pET-22b(+)质粒,经PCR、酶切、测序等方法鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)polys菌体,经IPTG诱导表达蛋白;利用Western-blot鉴定重组蛋白后,纯化目的蛋白。结果:所获得ESAT-6基因序列与GenBank公布的完全一致。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现在6kDa处有特异性蛋白条带。纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准比较一致。结论:成功表达纯化并鉴定构建了ESAT-6融合蛋白。     

一株牛分枝杆菌的分离与鉴定

采集一头检疫阳性的结核牛病变的淋巴组织进行细菌分离.分离物(Z-N)染色为阳性.提取细菌DNA,用PCR检测结核分枝杆菌特异性插入片段IS1081,确定该细菌为结核分枝杆菌.将PCR扩增出的特异性片段克隆到PMD-18T载体上.重组质粒经酶切和PCR鉴定均为阳性,测序结果与牛分枝杆菌标准菌株的同源性为100%.对其用Richard C.Huard等公布的PCR分型方法设计引物进行基因分型,确定该菌株为牛分枝杆菌BCG(M.bovis BCG).     

牛分枝杆菌ESAT-6蛋白抗体间接ELISA方法的建立

利用分子克隆技术,提取结核分支杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6基因,然后对其进行克隆表达,获得高效表达的ESAT-6蛋白,Westem blot证实ESAT-6蛋白可与结核牛阳性血清发生特异性反应.以纯化复性的ESAT-6重组蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA特异性为94%、敏感性为63.35%.交叉反应试验表明,该抗原只与牛副结核病阳性血清有交叉反应,而不与其他5种常见的牛病阳性血清发生交又反应.用间接ELISA方法对285份PPD阳性牛血清、对74份PPD阴性牛血清、79份牛γ-干扰素(IFN-γ)检测阳性血清进行检测,其负荷率分别为62.1%、98.64%、83.5%.实验结果表明建立的间接ELISA方法可以用于牛结核病感染和免疫抗体检测,且具有很好的开发和应用前景.     

乌鲁木齐市人畜间结核病的流行病学特点

牛结核病被世界动物卫生组织(OIE)列为B类动物疫病,是一种人兽共患传染病,可通过病畜传染给人和其他动物。其传播流行影响着畜牧业的持续发展和人类的健康。由于卡介苗(BCG)的使用,结核病的发病率比过去有所下降。但近年来该病发病率又呈上升趋势。通过对乌鲁木齐市2007-2010年人畜间结核病的流行病学进行调查,找出结核病流行的规律和特点,为更好地控制结核病的传播提供一定的帮助。