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1.
人巨核白血病细胞系M-07e的生长严格依赖于GM-CSF.在M-07e细胞,GM-CSF受体(GM-CSF R)由两个亚基所组成:低亲合力的配体特异的α亚基和一个磷酸化的β亚基,后者与lynp53/56酪氨酸蛋白激酶固定相连.本研究检测了lyn激酶在调节TGF-β 1诱导的M-07e细胞凋亡过程中的作用.从培养液中去除rhGM-CSF首先导致了lyn激酶活性受抑,接着发生细胞生长受阻和凋亡.M-07e细胞凋亡过程中伴随有大量Bcl-2和Bax蛋白分别被酶解为22 kD和18 kD的较小片段.应用特异性的抑制剂,发现上述Bcl-2蛋白的变化是循激活的caspase-3(CPP32)途径发生的,后者在M-07e细胞中大量表达.Bax蛋白变化的机制尚不清楚.TGF-β 1对rhGM-CSF刺激的细胞生长具有抑制作用,促进M-07e细胞凋亡的机制与去除rhGM-CSF所致相同,包括大量Bcl-2和Bax蛋白被特异酶解和lyn激酶失活.TGF-β 1并不影响lyn蛋白和β链的表达水平,也不阻止这两个信号传导元件的相互作用.研究结果表明,TGF-β 1通过抑制GM-CSF R相关的lyn激酶活性而抑制M-07e细胞生长并促进凋亡发生.本实验还表明激活的CPP32对Bcl-2蛋白的酶解是与细胞凋亡发生相关的一个自然过程,处于lyn激酶活性的调控之下. 相似文献
2.
目的:探索Erbin表达缺失导致Her2阳性的人乳腺癌细胞MDA-453对曲妥珠单抗敏感性的影响。方法设计、构建含人Erbin基因特异性的短发夹RNA( shRNA)及对照shRNA的干扰载体,转染MDA-453人乳腺癌细胞。经G418加压筛选,获得稳定敲低Erbin的MDA-453细胞( MDA-453-Erbin sh)和稳定表达对照shRNA的MDA-453细胞( MDA-453-NC),以后者作为对照细胞。应用Western印迹法检测MDA-453-NC和MDA-453-Erbin sh细胞中Erbin表达水平。分别通过细胞增殖活性实验及细胞集落形成实验,观察敲低Erbin的MDA-453细胞对曲妥珠单抗敏感性的变化。通过免疫组化染色法,分析Erbin在人乳腺癌及正常乳腺组织中的表达。结果建立了稳定敲低Erbin的MDA-453细胞株,发现敲低Erbin表达可诱导MDA-453细胞对曲妥珠单抗产生抗性。与正常乳腺上皮组织相比,人乳腺癌组织标本中Erbin表达水平降低。结论 Erbin表达缺失可能影响乳腺癌对曲妥珠单抗治疗的敏感性。 相似文献
3.
目的探讨p53 K370位乙酰化修饰反应在紫外线B(UVB)诱导p53活化及细胞凋亡反应中的作用。方法体外培养野生型和p53基因缺陷型小鼠胚胎成纤维细胞(wt-MEFs和p53-/-MEFs)。以UVB为刺激源,双荧光素酶报告基因法分析wt-MEFs细胞中p53的转录诱导活化情况;Western印迹检测UVB诱导p53在K370位发生乙酰化修饰反应及p53总蛋白表达情况;构建p53点突变体K370R并在p53-/-MEFs细胞中比较UVB诱导wt-p53和p53 K370R的转录活化情况及野生型和突变体蛋白介导细胞凋亡反应的差异。结果 UVB刺激wt-MEFs细胞后p53转录激活活性呈剂量和时间依赖性明显上调;同样条件下UVB能够有效诱导p53在K370位发生乙酰化修饰反应;p53 K370位突变后并不影响UVB刺激作用下p53的蛋白质稳定性,但其转录激活活性显著下降;同时K370位突变后能够有效抑制UVB诱导的细胞凋亡反应。结论 p53 K370位乙酰化修饰反应在UVB诱导的p53活化及细胞凋亡反应中具有重要作用。 相似文献
4.
eIF-5A的亚细胞定位研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:研究eIF-5A的亚细胞定位,为了解其生物学功能提供线索。方法:借助免疫荧光技术和GFP标签技术,用激光共聚焦显微镜检测eIF-5A的亚细胞定位。结果:免疫荧光检测结果表明,eIF-5A定位于细胞质中;GFP-5A瞬时转染后,起初eIF-5A为全细胞分布,以后逐渐转移到细胞质中。第50位赖氨酸突变为丙氨酸后的eIF-5A则分布于整个细胞。结论:eIF-5A具有核质穿梭功能,它的亚细胞定位是个动态变化过程,hypusine可影响其亚细胞定位,进而可能影响其功能的发挥。 相似文献
5.
目的:应用PET32-c原核表达载体快速、高效地表达及纯化单链抗体。方法:将单链抗体H22基因克隆到PET32-c原核表达载体中,通过酶切及测序鉴定正确后,进行原核诱导表达和纯化。并检测纯化后单链抗体的功能。结果:DNA琼脂糖凝胶电泳表明,单链抗体基因克隆成功;SDS-PAGE结果表明,单链抗体得到成功表达和纯化;ELISA和Western印迹结果表明,单链抗体H22能够特异性结合人TNF-α。结论:成功地表达及纯化抗人TNF-α单链抗体rSeFvH22。 相似文献
6.
从pUC18/E-选择素(E-selectin CD62E)重组质粒,以PCR的方法扩增得到E-selectin突变体CD62E1和CD62E2基因。将其分别插入痘苗病毒表达载体pJSA1175的单一SmaI位点,在痘苗病毒真核系统中进行了表达。初步的细胞粘附功能试验结果表明,E-selectin分子不同结构域的可削弱其粘附能力,为进一步研究E-selectin公子的结构与功能奠定了基础。 相似文献
7.
目的 探讨紫外线(UVB)反应中TNF-α在介导VEGF诱导表达中的作用.方法 采用TNF-α特异性shRNA转染小鼠成纤维细胞(MEFs)并建立稳定细胞株;RT-PCR方法验证TNF-α shRNA的有效性;荧光素酶报道分析系统检测vegf基因启动子活性;ELISA方法检测VEGF的分泌表达水平.结果 本课题组构建的TNF-α shRNA能够有效抑制UVB刺激作用下TNF-α的诱导表达;同样条件下,UVB诱导vegf基因启动子活性上调趋势被TNF-α shRNA显著抑制;同时VEGF的胞外分泌表达水平明显下降.结论 UVB反应中TNF-α可间接介导VEGF的诱导表达. 相似文献
8.
以光敏生物素分别标记含目的基因的L、E选择素重组质粒,用DNaseI随机消化为100bp大小的片段作为探针,用于检测细胞中L选择素或E选择素mRNA的表达水平。结果显示,经TNFα和IL1刺激后的脐带内皮细胞中人E选择素mRNA有较强的表达信号;Raji,HL60,KGI和U937细胞,均有L选择素的表达。这些结果为L、E选择素探针用于临床检测和诊断奠定了基础。 相似文献
9.
蓖麻毒素快速ELISA检测法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立蓖麻毒素快速ELISA检测方法。方法:从8株抗蓖麻毒素的杂交瘤细胞中,筛选亲和力较高的单克隆抗体,用Westernblot和ELISA鉴定、ProteinA纯化、HRP标记,经交叉配伍筛选最佳的抗体组合。结果:建立了蓖麻毒素的快速ELISA检测方法,对蓖麻毒素的最低检出浓度为175ng/L,目视检测最低浓度为625ng/L,整个实验不需仪器可在40min内完成检测。结论:蓖麻毒素快速ELISA检测法为蓖麻毒素生物战剂的快速侦检提供了有效手段。 相似文献
10.
目的 以人sIL-6R为靶分子,利用噬菌体随机15肽库筛选其亲和短肽,结合计算机模拟分析,获得具有抑制IL-6/IL-6R结合作用的短肽序列,作为IL-6拮抗剂。方法 通过亲和筛选,获得一组sIL-6R特异亲和序列。测定序列,结合计算机模拟,选取具有潜在拮抗功能的2条肽(命名为pTl、pT2)。合成短肽,进行ELISA竞争抑制实验和细胞增殖抑制实验。结果 pTl、pT2均可抑制IL-6,sIL-6R的结合。pTl、pT2可抑制XG-7细胞的增殖,并且这种抑制作用随着合成肽浓度的增高而增强,pTl、pT2不影响。7TD1细胞的增殖。结论 利用亲和筛选并结合计算机模拟从随机15肽库中获得可抑制IL-6/sIL-6R结合的短肽,并可抑制IL-6依赖细胞XG-7的增殖。 相似文献