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1.
目的探明汉坦病毒HTN型与SEO型、HTN型与PHV型之间基因重排的频率和特点。方法分别用相同滴度的汉坦病毒HTN型与SEO型(76-118株与SR-11株),及汉坦病毒HTN型与PHV型(76-118株与PHV株)毒株分别混合感染VeroE6细胞,用空斑形成试验挑选子代病毒克隆,挑得的单个病毒克隆在VeroE6细胞上扩增。分别用分型引物对子代病毒进行RT-PCR实验,以确定子代病毒L、M、S片段核酸的来源,鉴定子代病毒基因型。结果发现76-118株与SR-11株混种的子代病毒株基因30/44株来源于亲代病毒,9/44株子代病毒发生了基因片段重排。76-118株与PHV株混种的子代病毒株基因26/36株来源于亲代病毒,3/36株子代病毒发生了基因片段重排。76-118株与SR-11株混种的子代病毒株的基因重排率(20.45%)明显高于76-118株与PHV株混种的子代病毒株(8.33%)。结论这种重排率的差异可能是由于HTN型与SEO型HV基因核酸序列之间的同源性较高,而更容易发生基因重排。而HTN型与PHV型HV基因核酸序列之间的同源性较低,发生基因重排的机会显著降低。 相似文献
2.
肝肾综合征(HRS)是肝衰竭、失代偿期肝硬化和肝癌晚期等重症肝病常见的严重并发症之一。 HRS 诊断标准虽已十分明确,但缺乏特异性诊断指标。 HRS 的诊断仍是一种临床排除性诊断,在实际工作中还是一个难题,因此需对 HRS 的早期表现提高警惕,无论是否达到 HRS 的诊断标准,一旦出现尿量突发显著减少伴血清肌酐水平升高,均提示 HRS 早期征象的发生,须及时诊断并给予及时的处理。在治疗方面,血管收缩剂联合白蛋白、TIPS、连续性肾脏替代治疗和 MARS 等在短暂改善肾功能的同时,主要为肝移植作准备。迄今为止,肝移植是 HRS 最有效的治疗方法。如不能及时接受肝移植,患者病死率达80%~100%。临床上“防重于治”。 相似文献
3.
HCV C基因腺病毒表达载体骨架质粒pAd.HCV-C的构建、鉴定及表达 总被引:2,自引:0,他引:2
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抗丙型肝炎病毒锤头结构核酶的计算机设计和载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的选择针对丙型肝炎病毒(HCV)5'非编码区(NCR)和核心区(C)的核酶(ribozyme,Rz)切割位点,构建带自剪切的Rz真核表达载体。方法应用计算机辅助设计,根据能量最低化原理,以HCV-H(1a)株SNCR和C靶序列,预测其二级结构,选择理想的Rz切割位点,设计锤头结构核酶;体外合成针对HCV5'NCR的Rz213和Rz260的cDNA,通过亚克隆技术连接于真核表达载体(pcDNA3)。结果在124个自然切割位点(CUX和GUX)中选出213(CUC)、260(GUA)、407(GUC)和498(CUU)4个切点;Rz213和Rz260的DNA序列分析,结果与合成序列完全一致,酶切鉴定两Rz连接正确。结论计算机可作为抗病毒Rz设计的重要辅助工具;通过亚克隆技术可使目的Rz两端带自剪切Rz,并成功地插入真核表达载体。 相似文献
5.
当前,军队院校任职教育任务日益增多,任职教育学员管理工作显得尤为重要。抓好任职教育学员管理,既是军队院校正规化建设的需要,也是培养打赢信息化战争人才的保证。然而,由于任职教育学员都是在职干部学员,与生长干部学员完全不同,管理难度比较大。为此,本文就军队院校任职教育学员管理问题进行了初步探讨。 相似文献
6.
目的:利用LEICAQ500MC图像分析系统观察针对HBVC区双位点核酶对细胞质中C区基因表达的抑制作用。方法:采用亚克隆技术,从pGEMRz123(含针对HBVC区双位点核酶)上切下双位点核酶的片段,定向克隆于真核表达载体pBBS212中,利用Lipofec-tamine介导,将重组质粒pBBS212-Rz转染入2215细胞中,采用原位杂交观察核酶的表达,采用免疫组化、图像分析法分析HBcAg的表达。结果:筛选2周后,原位杂交证实可表达针对HBVC区双位点核酶。免疫组化及图像分析证实该核酶可抑制C区基因表达。结论:应用图像分析法可定量地观察到核酶对C区基因表达有阻断作用,抑制HBcAg的合成。 相似文献
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白细胞介素2提高HBV-S DNA疫苗的免疫效应 总被引:4,自引:0,他引:4
目的观察IL-2真核表达载体对HBV-SDNA疫苗诱导BALB/c小鼠的特异性免疫应答的影响.方法肌肉注射基因疫苗及IL-2真核表达载体,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性.结果免疫8周后,单纯注射pCR3.1-S及共注射IL-2真核表达载体的小鼠血清450nmA值分别为1.24±0.10及1.98±0.17.CTL细胞杀伤活性分别为(50.5±6.4)%及(61.9±7.1)%,两组均有明显差异(P<0.01).结论IL-2的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答.基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染. 相似文献
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丙型肝炎病毒C区的DNA改组 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:利用DNA改组技术进行不同基因型别丙型肝炎病毒(HCV)基因组C区的人工进化。方法:首先利用PCR扩增了三段具有较高序列同源性的460bp基因片段,然后将其等量混合,在Mg^2+存在的条件下,用脱氧核糖核酸酶(DNase Ⅰ)切割成50bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮正常的PCR扩增。结果:获得了与原片段大小相当的基因片段。结论:这一技术为进一步筛选高活性的HCVC区基因打下基础,有利于从一组序列同源性程度较高的基因库构建随机嵌合基因,并为改组其他基因家族提供了借鉴。 相似文献
9.
目的:观察针对HBVC区双位点核酶在细胞内阻断C区基因表达的作用。方法:采用亚克隆技术,从pGEM-Rz123(含针对HBVC区双位点核酶)上切下双位点核酶的片段,定向克隆于真核表达载体pBBS212中。利用lipofectamine介导,将重组质粒pBBS212-Rz及pBBS212转染2.2.15细胞中,采用打点杂交技术观察核酶的表达,采用ELISA、免疫荧光、免疫组化、图象分析法、Westernblot分析HBe/HBcAg及HBsAg的表达。结果:转染的2.2.15细胞经潮霉素B和G418筛选2周后,打点杂交证实可表达针对HBVC区双位点核酶。ELISA方法检测发现核酶抑制HBeAg表达48.6%,用免疫荧光、免疫组化、图象分析法、Westernblot分析证实核酶可抑制HBV细胞内表达。结论:该双位点核酶通过针对HBVC区基因的剪切作用,阻断C区基因表达,抑制了HBe/HBcAg的表达。 相似文献
10.
丙型肝炎病毒与荧光素酶融合基因细胞模型的初步建立 总被引:2,自引:0,他引:2
Objective To establish HCV cell culture model which is easy to
measure. Methods Controllable retroviral vector with fusion gene of
hepatitis C virus (HCV) cDNA and luciferase (luc) reporter gene was constructed by
molecular cloning technique, the transfection of this retroviral vector in a human hepatic
carcinoma cell (HHCC) line was performed by lipofectAMINE and then luciferase activity in
the cellular lysate was measured by scintillation counter. Results ① Fusion gene of the
HCV 5′ NCR-C region
and luciferase reporter gene identified by restriction endonuclease cleavage have been
cloned into pBPSTR1 vector. ② The luciferase activity could maintain up to 20 days at least, and could be
increased by puromycin treatment and regulated by tetracycline. Conclusion A cell model for
expression of HCV C-E1 and luciferase genes was established for gene therapy studies
against HCV C-E1 sequences. 相似文献