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鼠脾细胞肿瘤坏死因子的诱生和检测 总被引:6,自引:1,他引:5
本文报道采用E.coli LPS刺激ALB/C小鼠脾细胞诱生TNF的最适条件,并用人TNF ELISA方法检测小鼠TNF。结果显示:脾细胞经LPS刺激2h就可在上清液中测出TNF,12h达高峰,LPS最适刺激浓度为10^-2μg/ml,TNF产量依赖于脾细胞的浓度。 相似文献
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本研究应用分子生物学技术 ,构建小鼠 β2 m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP β2 mAN ,经过酶切、PCR鉴定 ,以及序列分析证实克隆的正确性。然后用脂质体转染NIH3T3细胞 ,经过RT PCR及Westernblot检测 ,观察重组质粒对细胞β2 mmRNA和蛋白表达的影响 ,同时在荧光显微镜下直接观察细胞转染的结果。结果证明pEGFP β2 mAN已成功导入NIH3T3细胞中 ,且有效表达 ,在荧光显微镜下可见梭形绿色荧光细胞 ;与同步转染的小鼠 β2 m正、反义核酸表达载体pcDNA3 β2 mSN、pcDNA3 β2 mAN的转染结果一起进行分析 ,转染pcDNA3 β2 mSN细胞的 β2 mmRNA和蛋白表达水平升高 ,而转染pcD NA3 β2 mAN和pEGFP β2 mAN的细胞 β2 mmRNA和蛋白表达水平降低。小鼠 β2 m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP β2 mAN的转染结果显示 :它不但可以降低NIH3T3细胞 β2 m基因的表达 ,而且为观察脂质体转染效果提供了直观、即时的方法 相似文献
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小鼠胚胎干细胞体外分化为神经前体细胞的研究 总被引:8,自引:1,他引:7
目的 探索小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES cell)体外分化为神经前体细胞(Neural precursor cells,NPC)的无血清培养条件,比较人胚胎成纤维细胞(Human embryonic fibroblasts,HEF)与小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEF)对小鼠ES细胞生长的作用。方法 在MEF或HEF饲养层上培养ES细胞,培养液中含白血病抑制因子。采用无血清方法培养NPC,免疫组化方法检测巢蛋白(Nestin),用硝基四氮啖蓝/5-溴-4-氯-吲哚基磷酸(NBT/BCIP)显色检测碱性磷酸酶。结果 无血清培养可以获得86%的NPC。HEF与MEF-样能维持ES未分化状态。结论 无血清培养方法有利于ES细胞向NPC分化,HEF可用于小鼠ES细胞的培养,而且比MEF优越。 相似文献
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反义IGF—I基因转染人肝癌细胞分泌CEA和AFP水平的研究 总被引:4,自引:3,他引:4
本研究利用基因治疗方法中的反义RNA技术,通过脂质体包裹反义胰岛素样生长因子-I(IGF-I)基因导入人HepG2肝癌细胞株,NorthernBlot分析显示反义IGF-IRNA表达阳性。研究反义IGF-I基因转染的HePG2细胞分泌CEA和AFP的水平,放射性同位素的测定结果表明细胞培养上清中的CEA的水平显著地低于亲本细胞(P<0.05),而分泌AFP的水平更显著地低于亲本细胞(P<0.01)。预示着阳性克隆细胞的恶性程度低于亲本细胞,细胞内原有的生物学过程发生改变。 相似文献
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目的:观察隐丹参酮体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法:采用Ficoll-Paque液分离成人MSC,体外扩增,FACScan流式细胞仪检测表面抗原表达,采用含隐丹参酮的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M,NF-H)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)的表达。结果:成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×10^6个细胞,15代可获得(2-3)×10^12个细胞,流式细胞仪检测显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。加入隐丹参酮诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M,NF-H、Nestin表达阳性,GFAP阴性。结论:隐丹参酮在体外可诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。 相似文献
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目的探索不同级别小鼠来源的骨髓细胞对体外制备优势DC2细胞的影响。方法取SPF级和健康普通级C57BL/6小鼠股、胫骨骨髓细胞及脾细胞,设细胞因子诱导的实验组、低浓度GM-CSF对照组、无外源细胞因子对照组及脾细胞组。骨髓细胞采用GM-CSF,IL-4,Flt3L和SCF的不同细胞因子浓度和组合体外培养诱导。脾细胞培养2d去除大部分淋巴细胞,第3天采用流式细胞术4色荧光标记法分析细胞表型,骨髓细胞诱导的各组同样于第3天采用流式细胞术分析细胞表型,比较不同级别小鼠骨髓细胞所诱导的DC2细胞的表型和比例。结果SPF来源的小鼠骨髓细胞诱导的各组第3d在CD11c+的DC细胞群中CD8α+DC2所占比例及不成熟DC2的比例均高于普通级小鼠,显示普通鼠来源的骨髓细胞更倾向于产生成熟的DC,不易诱导产生高比例的不成熟的DC2。对两种动物脾细胞DC2的分析结果表明,普通鼠脾脏中CD8α-MHCⅡ+的成熟DC1比例为75.58%,远远超过SPF鼠的30.60%。结论小鼠的微生物级别可影响耐受性DC的诱导效果,采用SPF级小鼠来源的骨髓细胞体外制备优势DC2细胞效果优于普通级鼠,原因可能与普通鼠接触微生物较多,免疫系统更易于产... 相似文献
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目的探讨H-2Kb基因转移诱导小鼠心肌移植免疫耐受的可行性。方法通过逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将供体小鼠(C57BL/6)的H-2Kb基因(小鼠MHC-类基因)导入到受体小鼠(BALB/c)的造血细胞。结果H-2Kb基因可以稳定地整合进小鼠造血细胞的基因内,并在受体内表达较长时间。正常对照小鼠的心肌移植物平均存活时间(MST)为9.4±1.84d。诱导耐受组小鼠的心肌移植物MST为45.7±6.001d,比对照组明显延长(P<0.05)。结论H-2Kb基因转移诱导了供体特异性的免疫耐受,为临床移植控制排斥反应提供了一种新的方法 相似文献
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本文用亚硝酸盐形成法检测了不同病期鼻咽癌(NPC)患者血浆中SOD活性以及鼻咽癌低分化细胞株培养上清(CNE-2s)对SOD活性的影响。结果发现:NPC病人血浆中总SOD、Mn-SOD及CuZn-SOD活性较正常人明显降低(P<0.01;将NPC按TNM分期,发现晚期(Ⅲ+Ⅳ)病人比早期(Ⅰ+Ⅱ)病人下降更明显。其中Mn-SOD活性在疾病早期即已降低(P<0.01)而CuZn-SOD活性则于晚期才降低(P<0.01)。CNE-2s对SOD活性有明显的抑制作用(P<0.01)。本文结果提示SOD活性的改变与NPC的发生发展有关。肿瘤组织的代谢物能抑制SOD活性。 相似文献
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目的:克隆抗人CD154抗体轻重链可变区基因,并分析其核苷酸序列,为基因工程抗体的构建奠定基础。方法:从分泌能抑制免疫反应的抗人CD154单克隆抗体杂交瘤细胞株 7E8中提取总RNA,合成cDNA第一链后,经PCR扩增获得抗人CD154单抗轻链可变区 (VL)和重链可变区 (VH)基因,分别克隆入pUC18载体,并进行序列分析。结果:①抗体的轻链可变区基因全长为 341bp,编码113个氨基酸,归属于Ig的Vκ2基因,氨基酸序列分析结果显示轻链可变区含有明确的 4个骨架区和 3个抗原决定簇互补区,在第 2 3位和第 93位氨基酸为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸;②抗体的重链可变区基因全长为 354bp,编码118个氨基酸,归属于小鼠IgVH基因,D、J区基因分别属于DSP2.9和JH2,氨基酸序列分析结果显示,重链可变区含有明确的 4个骨架区和 3个抗原决定簇互补区,在第 2 3和第 97位氨基酸为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸。结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别为抗体的轻、重链可变区基因. 相似文献
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目的:于大肠杆菌表达抗-D抗体Fab段基因,为真核载体表达完整的人抗-D抗体奠定基础。 方法: 将已克隆测序的Fab段基因亚克隆到pComb3噬粒载体,用PCR和限制性内切酶酶切鉴定后于大肠杆菌进行表达,表达产物用SDS-PAGE和ELISA等方法分析。 结果: SDS-PAGE电泳表明重组克隆表达了1条约48 kD的蛋白条带, ELISA结果显示,所表达的抗体和Rh+的人红细胞呈阳性反应,和Rh-红细胞反应为阴性,阴性对照和Rh+及Rh-红细胞反应均为阴性。 结论: 于大肠杆菌表达了具有抗原结合特性的人抗-D抗体Fab段抗体分子。 相似文献