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转hCTLA4Ig树突状细胞诱导T细胞免疫耐受的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 通过逆转录病毒载体将人CTLA4Ig转染DCs ,探讨转人CTLA4Ig(hCTLA4Ig)树突状细胞 (DCsRev)诱导T细胞免疫耐受的可能性。方法 通过重组逆转录病毒将目的基因hCTLA4Ig转染到大鼠骨髓来源的DCs中 ,通过流式细胞检测目的基因hCTLA4Ig表达及DCs表面分子的改变 ;通过混合淋巴细胞反应 (MLR)检测DCsRev抑制T细胞免疫反应的能力。 结果 重组逆转录病毒转染DCs的最大效率为 91 2 5 % ;在功能上 ,DCsRev不但丧失了刺激MLR的能力 ,并且能够强烈抑制MLR中反应T细胞的增殖 ,而且抑制率与加入DCsRev的数量和DCsRev预处理反应T细胞的时间长短有关。具体来说 ,DCsRev数量在 10 3 ~ 10 4之间时 ,抑制率与剂量呈正相关 ,最高为 71 96%。而当DCsRev数量达到 5× 10 4抑制率下降为 5 9 2 %。在 12~ 48h之间 ,随着预处理时间的延长 ,抑制率却不断下降 ,预处理 12h抑制率最高 ,为 99 6%。但不做预处理 ,在反应开始时同时加入DCsRev ,则抑制率明显降低 ,仅为 5 9 2 %。对腹腔注射DCsRev大鼠脾T淋巴细胞体外分析表明 ,DCsRev也能在动物体内诱导耐受 ,但这种免疫耐受状态不能维持终身。结论 通过逆转录病毒载体将人CTLA4Ig转染DCs,不但DCs表面CD86分子被CTLA4Ig有效的封闭 ,并且能够诱导抗原特异性T细胞的免疫耐受 相似文献
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异体皮肤移植后MIP-3α的表达及其抗体延长存活的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究异体皮肤移植后表皮MIP 3α的表达及其抗体延长移植皮肤存活的作用。方法 进行同种异体小鼠皮肤移植 ,免疫组化测定移植皮肤组织内MIP 3α的表达 ;局部应用MIP 3α抗体 ,观察其对移植皮肤存活的影响。结果 移植术后表皮MIP 3α表达增加 ,分别于术后 2 4h及第五天出现两个高峰 ,真皮及其皮下组织未见MIP 3α的表达 ;异体皮肤平均存活时间为 (7 5± 0 9)d ,MIP 3α单抗局部注射 1μg/ml治疗组存活 (8 3± 1 2 )d ,与对照组相比无明显差异 (P >0 0 5 ) ;10 μg/ml组与 5 0 μg/ml组分别为 (15 3± 2 3 )d与 (2 1 8± 1 6)d ,二者均显著延长移植皮肤的存活时间 (P <0 0 1)。结论 异体皮肤移植后表皮MIP 3α分泌增加 ,促进郎格罕细胞的迁移以进行抗原递呈 ,是移植排斥反应启动与进展的重要因素 ;应用MIP 3α抗体可有效延长异体移植皮肤的存活 相似文献
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载银磷酸锆纱布对烧伤创面常见细菌作用的实验研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 了解载银磷酸锆纱布对烧伤大鼠创面感染常见细菌的抗菌效力。方法制作Wistar大鼠烫伤(以下称烧伤)感染模型,采用试管双倍稀释法测定载银磷酸锆及磺胺嘧啶银的最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)。观察大鼠创面用磺胺嘧啶银纱布、普通尢菌纱布、载银磷酸锆纱布(小水洗及水洗20次)后痂下组织的细菌计数和对创面愈合的作用。结果载银磷酸锆对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠竹菌的MIC各为8、8、16mg/L,MBC各为16、8、32mg/L,为磺胺嘧啶银的2~8倍?大鼠创面用未水洗的载银磷酸锆纱布覆盖后,痂下细菌计数比用磺胺嘧啶银纱布低91%,比普通无菌纱布低99%未水洗的载银磷酸锆纱布对创面愈合的作用明显优于其他两种纱布,且其痂下组织细菌计数与水洗20次的效银磷酸锆纱布比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论载银磷酸锆埘烧伤创面感染常见细菌有较强的抑制和杀灭作用,其敷料可作为治疗措施中新的选择。 相似文献
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目的探讨CTLA4Ig基因转染猪皮治疗中小面积浅Ⅱ度烧伤创面的临床疗效与安全性。方法将自2005年5月~2007年5月我院收治的浅Ⅱ度烧伤患者60例随机分为2组,每组30例。基因转染猪皮治疗组:伤后创面简单清创,去除水疱,用复温后的基因转染猪皮覆盖创面。对照组:创面简单清创,除颜面、会阴部位创面外,均予包扎治疗,保留水疱皮,其后常规换药治疗。结果基因转染猪皮治疗组创面愈合时间5~10d,对照组为8~14d。基因转染猪皮治疗组疼痛明显减轻,未观察到寒战、高热等全身不良反应及局部排斥反应。两组均未出现瘢痕,但对照组部分病例出现色素改变。结论应用基因转染猪皮治疗中小面积浅Ⅱ度烧伤创面能明显缩短创面愈合时间,能明显减轻创面疼痛,减少换药次数,预防色素改变及瘢痕形成。 相似文献
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人CTLA-4胞外区cDNA的克隆及Ig融合蛋白表达载体的构建 总被引:10,自引:4,他引:6
目的 克隆人CLTA-4胞外区cDNA-4胞外区与人免疫球蛋白IgG Fe融合蛋白表达载体,为研究CTLA-4/Ig融合蛋白及其临床应用奠定基础。方法 从抗人CD3单克隆抗体和PMA活化的健康人中国外周血淋巴细胞总RNA中,扩增人CTLA-4基因胞外区cDNA片段,经HindⅢ+BclⅠ双酶切后定向插入Ig融合蛋白表达载体。结果 从活化人T细胞中扩增出人CTLA-4胞外区cDNA片段,并将其正确插 相似文献
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调节性T细胞的MACS分选和纯度鉴定 总被引:4,自引:4,他引:4
目的 建立CD4^ CD25^ 调节性T细胞(Regulatory T Cells,Treg)的磁珠(MACS)分选方法,并对分选结果进行纯度鉴定。方法 采用T细胞纯化柱分离小鼠脾脏T淋巴细胞,以抗-CD8-FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阴性选择法剔除CD8^ T细胞,再以抗-CD25-FITC抗体和义气风发FITC标记磁珠相结合的阳性选择法选出CD25^ T淋巴细胞;以FACS流式细胞法检测分选的CD4^ CD25^ 调节性T细胞纯度。结果 MACS磁珠分选法能够成功分选出CD4^ CD25^ 调节性T细胞,分选平均纯度达到73%,分选细胞活力为95%。结论 MACS磁珠分选法能够分选出高纯度的Treg细胞,该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力。 相似文献
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人CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体构建及鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
目的 构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双基因共表达逆转录病毒载体。方法 利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中,脂质体法将重组质粒pCTLA4Ig-IRES2-EGFP转染PA317细胞,在G418选择压力下,通过流式细胞检测筛选得到高效共表达CTLA4Ig和EGFP并能产生高滴度重组逆转录病毒的PA317细胞克隆,MTT法测定CTLA4Ig生物学活性。结果 成功构建出含IRES序列的CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体,生物学活性测定表明CTLA4Ig生物学活性没有受到影响。结论 IRES序列调控CTLA4Ig与EGFP双基因在细胞中同时独立表达。 相似文献
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目的 观察创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮存活期的临床效果。方法 12例大面积烧伤切痂创面应用CTLA4Ig重组腺病毒自体微粒皮和异体皮移植。临床观察异体皮存活时间、微粒皮封闭创面情况、用EP Ⅰ型水蒸仪测定创面水分蒸发量及组织学观察。结果 创面应用CTLA4Ig重组腺病毒能显著延长异体皮移植物的成活期 [对照组 ( 16.9± 3 .7)d ,实验组 ( 2 5 .6± 5 .5 )d] ,淋巴细胞浸润较少 ,自体微粒皮移植创面愈合率明显增高 ;实验部位水分蒸发量保持较低水平 ,而对照部位于术后 9d逐渐升高。结论 局部应用CTLA4Ig 重组腺病毒是一种有效延长烧伤创面异基因移植皮肤存活期的方法。 相似文献
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目的 研究腺病毒介导的CTLA4Ig基因在大鼠异基因原位气管移植中的作用。 方法 建立异基因大鼠原位气管移植模型。分别采用腹腔注射生理盐水 (Saline组 ,2ml/只 )、腹腔注射CTLA4Ig重组腺病毒载体 (Ad CTLA4Ig组 ,2× 10 9PFU/只 )和肌肉注射环胞素A(CsA组 ,5mg/kg) ,观察术后大鼠的存活时间和移植气管的病理改变。 结果 Ad CTLA4Ig组大鼠存活时间为(2 7 3± 5 88)d ,较Saline组 (7 3± 1 63 )d和CsA组 (18 3± 1 70 )d明显延长 (P <0 0 5 )。同时 ,术后 10dAd CTLA4Ig组大鼠气管组织学改变与CsA组大鼠比较无明显差异。结论 Ad CTLA4Ig可延长大鼠异基因原位移植气管的存活时间 相似文献
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